北京市東城區(qū)藥品檢驗(yàn)所（100027）尤立華 趙希賢

基層藥檢所的工作是按照藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對轄區(qū)的抽驗(yàn)藥品進(jìn)行檢驗(yàn)，在對不合格藥品的判定過程中，除嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)外，還要對各種影響因素進(jìn)行試驗(yàn)分析，從而得出正確的判定結(jié)果。近期一份抽驗(yàn)檢品正天丸的檢測過程表明，僅僅依靠標(biāo)準(zhǔn)有時(shí)不能得出正確的結(jié)論，因?yàn)楦鞣N試劑、各種條件經(jīng)常會(huì)發(fā)生變化，所以要求我們檢驗(yàn)人員要具備各種檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的分析研究能力，才能得出一份合格的檢驗(yàn)報(bào)告。

正天丸[1]是由鉤藤、白芍、川芎、當(dāng)歸 、地黃、白芷等十五味中藥組成，具有疏風(fēng)活血、養(yǎng)血平肝、通絡(luò)止痛的功效，用于外感風(fēng)邪、瘀血阻絡(luò)、血虛失養(yǎng)、肝陽上亢引起的偏頭痛，緊張性頭痛，神經(jīng)性頭痛，頸椎病型頭痛，經(jīng)前頭痛。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[2]WS3-B-3169-98-（2006）。

按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行含量測定，芍藥苷含量測定值很低，且測定時(shí)樣品間的重現(xiàn)性不好，為了得出正確的判定結(jié)果，對供試品制備過程進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不同批號的氧化鋁可嚴(yán)重影響檢測的結(jié)果，因此在檢驗(yàn)中，當(dāng)發(fā)生不合格等情況時(shí)要求我們認(rèn)真查找測定過程中的影響因素，從而得出正確的判定結(jié)論。我們以對正天丸含量測定的具體情況為例，進(jìn)行具體闡述，內(nèi)容如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC2010液相色譜儀。

1.2 試藥 芍藥苷對照品(批號：110736-201035)（由中國藥品生物制品鑒定所提供）；層析用中性氧化鋁（100～200目）（批號：F20080305，F(xiàn)20090804，F(xiàn)20110124)（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）；正天丸（批號：110515H）（華潤三九醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)）；試劑為分析純，乙腈為色譜純。

2 方法

2.1 正天丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定方法

2.1.1 色譜條件

色譜柱：WAT045905C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-水（15：85）；檢測波長為230nm；溫度：30℃；流速：1.0ml/min。

2.1.2 對照品溶液制備

取芍藥苷對照品，精密稱定，置50ml的容量瓶中，加甲醇40ml后超聲處理10分鐘使其充分溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1ml，將其置于10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1ml含39.94μg的溶液，即得所需的對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液制備

取本品30g，研細(xì)，取約1g，精密稱定，加50%乙醇15ml，超聲處理（功率200W，頻率59KHZ）30分鐘，用適量的50%乙醇洗滌容器和殘?jiān)?，洗液并入濾液中，蒸干，殘?jiān)屑尤?0%甲醇5ml使之溶解，加在中性氧化鋁柱（內(nèi)徑0.9cm，100～200目中性氧化鋁4.5g）上，用80%甲醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.1.4 測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀中進(jìn)行測定，即得。

2.1.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，其峰面積測量值的RSD值為1.56%。理論板數(shù)均大于5000。樣品中芍藥苷峰附近未見干擾峰。

2.2 本批樣品含量測定結(jié)果

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，測定結(jié)果應(yīng)不少于0.5mg/g，但樣品測定結(jié)果為0.06mg/g 和0.09mg/g ，結(jié)果表明兩份樣品含量低于標(biāo)準(zhǔn)限值近8倍，且樣品間平行性不好。由于系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)符合要求，復(fù)測時(shí)對照品重現(xiàn)性良好，故排除儀器設(shè)備的影響；又因芍藥苷含量測定多采用超聲提取的方法[3][4]，未發(fā)現(xiàn)超聲提取對芍藥苷測定有重大影響，因此考慮針對氧化鋁柱層析過程進(jìn)行試驗(yàn)，以找到檢測過程中芍藥苷含量測定結(jié)果的影響因素。

2.3 氧化鋁柱層析洗脫速度不同時(shí)樣品的測定結(jié)果

一般試驗(yàn)時(shí)，氧化鋁柱層析的洗脫速度會(huì)對含量測定結(jié)果產(chǎn)生影響，因此設(shè)計(jì)試驗(yàn)，分別采用不同的洗脫速度，層析氧化鋁用量為2g進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測定結(jié)果（見附表1）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：洗脫速度對芍藥苷含量測定結(jié)果有一定影響，但洗脫速度不同，測定結(jié)果的差別不大，不會(huì)對檢測結(jié)果產(chǎn)生本質(zhì)性的影響。

2.4 不同用量氧化鋁的樣品測定

氧化鋁用量不同，對成分的吸附和保留程度也不同，因此采用不同用量氧化鋁處理樣品，比較芍藥苷的測定結(jié)果，層析氧化鋁的用量分別為0g，2g和4g，測定結(jié)果（見附表2）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：氧化鋁用量不同時(shí)，對芍藥苷的測定結(jié)果有很大影響，不進(jìn)行氧化鋁柱層析洗脫樣品即氧化鋁用量為0g時(shí)，測定結(jié)果為合格。

2.5 不同批號及不同用量氧化鋁樣品測定結(jié)果

樣品采用氧化鋁柱層析的方法測定結(jié)果為不合格，而不進(jìn)行氧化鋁柱層析則合格，是標(biāo)準(zhǔn)有錯(cuò)誤嗎？但本藥品已研發(fā)多年，且其它藥品的芍藥苷測定過程也有采用氧化鋁柱層析的。如果本次檢驗(yàn)不采用氧化鋁處理，那么檢驗(yàn)結(jié)果不合法，由此可見，氧化鋁就成為影響含量測定結(jié)果的關(guān)鍵因素。考慮到是否是氧化鋁本身存在差異，因此我們考察了不同批號的氧化鋁對芍藥苷測定結(jié)果的影響，測定結(jié)果見附表3。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)采用11批號層析用氧化鋁測定時(shí)，使用不同用量的氧化鋁處理后的樣品，含量測定結(jié)果差別不大，且均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，即含量測定值為合格。因此采用不同批號的氧化鋁測定時(shí)，芍藥苷的含量測定結(jié)果有很大差異，此差異可導(dǎo)致檢測判定結(jié)果的不同。

2.6 不同批號及不同用量氧化鋁對芍藥苷對照品測定結(jié)果

由于樣品中含有其它成分，為排除其它成分可能對氧化鋁柱層析吸附作用的干擾，同時(shí)也為了驗(yàn)證不同批號氧化鋁對芍藥苷含量測定結(jié)果的影響，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，采用芍藥苷對照品溶液進(jìn)行氧化鋁柱層析，以驗(yàn)證不同批號不同用量層析用氧化鋁對芍藥苷含量測定的影響。

精密吸取對照品溶液3ml（3ml芍藥苷的含量為1.198mg），加在中性氧化鋁柱（內(nèi)徑0.9cm，100～200目中性氧化鋁）上，其余按照供試品制備項(xiàng)下操作，測定結(jié)果見附表4。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：進(jìn)行氧化鋁柱層析后，和實(shí)際芍藥苷含量1.198mg比較，芍藥苷含量均下降，且證實(shí)了三種批號層析用氧化鋁處理芍藥苷后，測定結(jié)果均不相同。

附表1 不同洗脫速度樣品測定結(jié)果（n=2）

附表2 氧化鋁不同用量樣品測定結(jié)果（n=2）

附表3 不同批號及不同用量氧化鋁樣品測定結(jié)果（n=2）

附表4 不同批號及不同用量氧化鋁對照品測定結(jié)果（n=2）（mg）

3 討論

3.1 在過氧化鋁柱層析時(shí)，相同用量的氧化鋁，洗脫速度不同，對芍藥苷的吸附多少不同，結(jié)果不同，應(yīng)適當(dāng)控制洗脫速度。

3.2 在過氧化鋁柱層析時(shí)，氧化鋁用量不同，也會(huì)對芍藥苷含量測定的結(jié)果產(chǎn)生影響，但按照標(biāo)準(zhǔn)操作應(yīng)能達(dá)到要求。

3.3 不同批號的柱層析氧化鋁對芍藥苷含量測定的結(jié)果有重要影響，可導(dǎo)致判定結(jié)果的錯(cuò)誤。

在方法制定時(shí)，使用氧化鋁柱層析，不僅要考慮氧化鋁用量、洗脫速度、洗脫液體積，還應(yīng)充分考慮到氧化鋁有可能發(fā)生變化，對芍藥苷測定結(jié)果產(chǎn)生的影響；有時(shí)一些問題如氧化鋁的吸附能力、各種變化不可能完全與制定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)一致，這就有賴于藥品生產(chǎn)企業(yè)、檢驗(yàn)部門及藥品質(zhì)量研究部門等及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，以避免誤判的發(fā)生，影響藥品含量測定的結(jié)果。

3.4 在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)使用過程中，我們要隨著各種條件的變化，針對有些原來不重要的細(xì)節(jié)要逐漸變?yōu)樾枋芸氐臈l件，例如本次實(shí)驗(yàn)中采用了三種批號的氧化鋁，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們對芍藥苷均有吸附作用，且吸附大小不同，這些變化了的細(xì)節(jié)作為生產(chǎn)廠家應(yīng)該最為熟悉。

當(dāng)我們每發(fā)出一份不合格報(bào)告時(shí)，為保證不錯(cuò)判，對于方法中容易存在問題的地方我們會(huì)與企業(yè)進(jìn)行溝通，以避免誤判。因此，我們也希望企業(yè)能真正對自己的藥品負(fù)責(zé)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中逐漸成為判定結(jié)果影響因素的那些細(xì)節(jié)，并對標(biāo)準(zhǔn)提出修改，以便能更好地控制藥品的質(zhì)量。