陳學(xué)國(guó)，賴永權(quán)，蔡宗葦

(1. 中國(guó)刑事警察學(xué)院法醫(yī)系，遼寧 沈陽(yáng) 110854; 2. 香港浸會(huì)大學(xué)化學(xué)系，香港特別行政區(qū) 999077)

2011-07-15；

2011-10-11

香港浸會(huì)大學(xué)項(xiàng)目(FRG/08-09/II-01)資助

陳學(xué)國(guó)(1977～)，男(漢)，副教授，從事毒物、毒品分析。E-mail:chenxg@dicp.ac.cn

蔡宗葦(1962～)，男(漢)，教授，從事藥物、環(huán)境污染物分析。E-mail:zwcai@hkbu.edu.hk

液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜分析烏頭堿及其代謝物

陳學(xué)國(guó)1，2，賴永權(quán)2，蔡宗葦2

(1. 中國(guó)刑事警察學(xué)院法醫(yī)系，遼寧 沈陽(yáng) 110854; 2. 香港浸會(huì)大學(xué)化學(xué)系，香港特別行政區(qū) 999077)

為了研究烏頭堿的生物轉(zhuǎn)化規(guī)律，建立了烏頭堿及其代謝物分離與鑒定的液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜(LC-ESI-ITMS)方法。首先利用體外代謝法得到大鼠肝微粒體S9組分中烏頭堿及代謝產(chǎn)物混合體系，然后利用LC-ESI-ITMS聯(lián)用技術(shù)對(duì)各代謝物進(jìn)行分析，得到烏頭堿代謝物的[M+H]+分子質(zhì)量信息，進(jìn)一步結(jié)合多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜(LC/MSn)分析結(jié)果獲得結(jié)構(gòu)信息，對(duì)代謝物進(jìn)行鑒定，從而推測(cè)代謝物結(jié)構(gòu)，并結(jié)合大鼠尿中烏頭堿及其代謝物的分析結(jié)果，得到烏頭堿的生物轉(zhuǎn)化規(guī)律。本方法在大鼠肝微粒體S9組分中鑒定得到8種體外代謝產(chǎn)物。

液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜；肝微粒體；烏頭堿；代謝

肝臟是生物體藥物代謝的主要器官，研究藥物的肝臟代謝對(duì)于研究藥物體內(nèi)代謝非常重要[1]。作為研究藥物代謝的經(jīng)典方法，體外肝臟代謝不僅可以排除體內(nèi)因素的干擾，還可以直接觀察酶對(duì)底物的選擇性代謝，為藥物的整體試驗(yàn)提供可靠的理論依據(jù)，尤其是對(duì)于那些體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化率低、毒性大、缺乏靈敏檢測(cè)手段的藥物來(lái)說(shuō)，體外肝臟代謝研究已經(jīng)成為行之有效的研究手段[2]。

作為藥物分析領(lǐng)域最強(qiáng)有力的分析檢測(cè)技術(shù)，液相色譜-質(zhì)譜(LC/MS)聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)在環(huán)境分析、生化分析、藥物分析等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[3]，并顯示出靈敏度高、專屬性好、樣品處理簡(jiǎn)單等優(yōu)越性。離子阱質(zhì)譜(ITMS)不僅可以給出樣品分子質(zhì)量的相關(guān)信息，而且還可以給出有關(guān)樣品結(jié)構(gòu)的豐富信息[4]。由于具有靈敏度高、選擇性好等特點(diǎn)，液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜(LC-ESI-ITMS)聯(lián)用已經(jīng)成為藥物代謝研究的有力工具和代謝物結(jié)構(gòu)分析的重要方法[5]?；贚C-ESI-ITMS技術(shù)，已經(jīng)建立了藥物及其代謝物快速高通量分析方法，并成功用于多種藥物及其代謝產(chǎn)物的分離與鑒定[6-7]。

毛莨科烏頭屬植物是我國(guó)著名的傳統(tǒng)中藥，具有祛風(fēng)除濕、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等功效，廣泛用于治療風(fēng)濕麻痹、關(guān)節(jié)疼痛、心腹冷痛等疾病，烏頭堿是該類植物的主要活性成分，也是含量最高、毒性最大的成分[8]。烏頭堿為C19雙酯二萜類生物堿，具有較強(qiáng)的毒性，人口服0.2 mg即可中毒，臨床應(yīng)用該藥物時(shí)極其慎重，一旦使用不當(dāng)即可導(dǎo)致中毒，嚴(yán)重者可能危及生命，由于使用不當(dāng)而造成中毒甚者致死的情況時(shí)有發(fā)生[9]。因此，研究烏頭堿及其代謝產(chǎn)物，明確生物轉(zhuǎn)化規(guī)律，對(duì)于該類藥物的臨床使用和中毒檢驗(yàn)等具有重要意義。針對(duì)不同檢材中的各種烏頭生物堿及其代謝物，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)建立了多種樣品處理方法和檢測(cè)技術(shù)，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[10]、液相色譜法[11]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[12]、毛細(xì)管電泳[13]等也被廣泛用于烏頭生物堿分析，并已經(jīng)成為烏頭生物堿及其代謝物檢測(cè)的主要方法。生物體內(nèi)代謝后，烏頭堿主要通過(guò)脫乙酸基、脫苯甲?；?、脫甲基和酯化反應(yīng)等，得到烏頭次堿、烏頭原堿、去甲基烏頭堿、去雙甲基烏頭堿、去乙基烏頭堿等單酯型、雙酯型和脂類代謝產(chǎn)物[14]。另外，結(jié)合體外代謝研究方法，在烏頭堿代謝產(chǎn)物中也檢測(cè)到去氫烏頭堿、去氧烏頭堿等代謝產(chǎn)物[15]。

本研究建立了烏頭堿及其代謝物分離與鑒定的LC-ESI-ITMS方法。該方法利用體外代謝方法得到大鼠肝微粒體S9組分中烏頭堿及代謝產(chǎn)物混合體系，然后借助LC-ESI-ITMS法對(duì)各代謝物進(jìn)行分析，得到烏頭堿代謝物的分子質(zhì)量信息，進(jìn)一步結(jié)合多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜(LC/MSn)獲得結(jié)構(gòu)信息，對(duì)其代謝物進(jìn)行鑒定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與實(shí)驗(yàn)條件

1.1.1色譜條件 液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜系統(tǒng)由HP 1100液相色譜儀(Hewlett-Packard，Wilmington，DE，USA)和Esquire 4000離子阱質(zhì)譜儀(Bruker-Fransen，Bremen，Germany)組成；色譜柱：Waters Symmetry C18柱(150×2.1 mm，3.5 μm)；流動(dòng)相A為0.1 mM乙酸銨-甲酸緩沖溶液(pH 4.5)，流動(dòng)相B為乙腈-0.1 mM乙酸銨-甲酸緩沖溶液)(V(乙腈)∶V(0.1 mM乙酸銨-甲酸緩沖溶液)=90∶10，pH 4.5)，流速為0.20 mL/min，起始梯度為5%B，在20 min內(nèi)線性增加至90%B，維持5 min，進(jìn)樣量為5 μL。

1.1.2質(zhì)譜條件 電噴霧離子化源(ESI)，正離子方式檢測(cè)，全離子掃描模式，掃描范圍為m/z50～1 000；電噴霧氣(N2)溫度為350 ℃,流量為8.0 L/min；源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離氣為氦氣；MSn通過(guò)利用總離子流控制單元(ICC)自動(dòng)調(diào)整積分時(shí)間實(shí)現(xiàn)。

1.2試劑與動(dòng)物

乙腈(色譜純)：美國(guó)Tedia(Fairfield, OH)公司產(chǎn)品；甲酸、乙酸銨、磷酸二氫鉀(分析純)：Mallinckrodt(Paris, KY, USA)公司產(chǎn)品；烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99.9%)、二甲亞砜(DMSO，純度>99.9%)、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)：美國(guó)Sigma公司(St. Louis, USA)產(chǎn)品；純水經(jīng)Milli-Q水處理系統(tǒng)(Millipore, USA)純化。雄性SD大鼠購(gòu)自香港中文大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.3肝微粒體S9組分的制備

SD大鼠斷頭處死后，放血，以冰冷生理鹽水由肝門(mén)靜脈沖洗肝，去除肝中殘余血液，取出肝臟，稱重，用預(yù)先冷凍的0.10 mol/LKCl-PBS緩沖溶液(pH 7.4)洗凈，剪碎，制成肝勻漿(1 g肝/5 mL KCl-PBS緩沖溶液)，以9 000 r/min于4 ℃離心10 min，棄去上層脂質(zhì)和下層沉淀物后的上清液即為大鼠肝微粒體S9組分。大鼠肝微粒體S9組分中蛋白質(zhì)和細(xì)胞色素P450含量分別用Bradford法和Omura法測(cè)定，分別為10.34 g/L和0.05 nmol/L。

1.4體外代謝與樣品處理過(guò)程

“這件事太復(fù)雜了，不能簡(jiǎn)單去理解。S想一勞永逸地解決問(wèn)題。但這兩個(gè)女人都給了他共同的感受，那就是壓抑、沖突和痛苦。S遇到Y(jié)時(shí)，對(duì)命運(yùn)感激不已。他羞怯內(nèi)向，恐懼于跟人打交道，他不是一個(gè)愛(ài)追逐女人的人，那是迫不得已。世上若有一個(gè)女人能使他平靜，那就是Y。他終于跟Y在一起了，卻依然沒(méi)法安寧。或者說(shuō)，Y正在變得枯竭及死寂，S眼前浮現(xiàn)了一句唐詩(shī)：千山鳥(niǎo)飛絕，萬(wàn)徑人蹤滅。Y猶如一顆正在塌縮的星球。當(dāng)然，他們?nèi)詴?huì)睡覺(jué)，有時(shí)還是Y主動(dòng)邀請(qǐng)。但S知道這是怎么回事。這連跟曲做愛(ài)都不如?！?/p>

將烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品用DMSO配制成濃度為2 mmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，取5 μL標(biāo)準(zhǔn)溶液置于試管中，加入495 μL 0.1 mol/L KCl-PBS緩沖溶液(pH 7.4)，再加入適量NADPH，使NADPH濃度為3 mM，混勻后置于37 ℃水浴中預(yù)孵育5 min，然后，加入500 μL蛋白質(zhì)濃度為2.0 g/L肝微粒體S9組分KCl-PBS緩沖溶液，得到烏頭堿孵育體系，其中烏頭堿、NADPH和肝微粒體蛋白質(zhì)濃度分別為10 μmol/L、1.5 mmol/L和1.0 g/L。然后，置于37 ℃水浴中孵育0 min和60 min后，分別取50 μL孵育混合溶液，加入150 μL乙腈，混勻后置于冰浴中5 min，終止反應(yīng)。最后，以14 000 r/min離心5 min后取上清液，氮?dú)獯蹈珊螅尤?00 μLV(乙腈)∶V(水)=80∶20的溶液溶解，供LC/MS測(cè)定。

1.5尿樣收集與處理

將5只雄性SD大鼠，體重為(590±5) g，置于代謝籠中，禁食12 h，收集尿樣作為空白對(duì)照尿樣，然后，將烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品按照0.2 mg/kg劑量灌胃給藥，收集所有大鼠0～24 h尿樣，置于-20 ℃冷凍保存。

取解凍后的1.0 mL尿樣，冷凍干燥后，加入0.5 mLV(乙腈)∶V(水)=80∶20的溶液溶解，以14 000 r/min離心5 min后取上清液，供LC/MS測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[12]，本研究首先以烏頭堿為研究對(duì)象，考察烏頭堿的色譜行為和質(zhì)譜響應(yīng)值，優(yōu)化烏頭堿及其代謝物分析的LC-ITMS分析色譜、質(zhì)譜條件，烏頭堿在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下分析得到的LC-ITMS譜圖，示于圖1。

圖1 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下烏頭堿的LC-ITMS譜圖Fig.1 LC-ITMS spectra of Aconitine

在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)烏頭堿及其體外代謝產(chǎn)物混合體系進(jìn)行LC-ITMS全離子掃描模式分析，得到LC-ITMS譜圖。根據(jù)藥物在肝微粒體中的代謝規(guī)律[16]，結(jié)合LC-ITMS譜圖，通過(guò)比較烏頭堿在大鼠肝微粒體S9組分中孵育60 min和0 min后的LC-ITMS譜圖，根據(jù)[M+H]+分子質(zhì)量信息，初步鑒定出8種代謝產(chǎn)物。烏頭堿及8種體外代謝產(chǎn)物的LC-ITMS譜圖示于圖2，相應(yīng)的色譜保留時(shí)間和[M+H]+分子質(zhì)量信息列于表1。

利用LC-ITMS全掃描模式對(duì)烏頭堿及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行初步鑒定，只能根據(jù)所測(cè)到的[M+H]+離子質(zhì)量信息得到，為了進(jìn)一步確定代謝物的結(jié)構(gòu)，可以借助LC/MSn進(jìn)行深入分析，結(jié)合準(zhǔn)分子離子、二級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜和三級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜分子碎片離子峰，最終確定其結(jié)構(gòu)。利用多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜法分析初步鑒定出的烏頭堿及8種代謝產(chǎn)物，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，進(jìn)一步確定了烏頭堿和8種代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，相應(yīng)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)列于表1和圖3～10。

保留時(shí)間為19.3 min的化合物M0，其準(zhǔn)分子離子m/z646.2，與烏頭堿的質(zhì)子化分子[M+H]+一致，如圖1所示，二級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)中基峰離子m/z586.2，三級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜(MS3)基峰離子m/z526.2與烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品的色譜保留時(shí)間及各級(jí)質(zhì)譜行為相同，鑒定其為烏頭堿。

圖2 優(yōu)化條件下烏頭堿及其體外代謝產(chǎn)物L(fēng)C-ITMS譜圖Fig.2 LC-ITMS spectrum of Aconitine and its metabolites

表1 烏頭堿及其8種代謝物的保留時(shí)間和分子質(zhì)量信息 Table 1 Retention time and mass spectra of Aconitine and its metabolites

如圖3所示，化合物M1的色譜保留時(shí)間為14.0 min，準(zhǔn)分子離子m/z604.2，相對(duì)于烏頭堿在相同條件下所得到的基峰離子減少42 u，說(shuō)明二者具有相同的骨架結(jié)構(gòu)，已有文獻(xiàn)報(bào)道[17]，42 u的中性丟失為脫去乙?；斐傻模谲涬婋x條件下檢測(cè)到m/z554.1和m/z522.1的碎片離子分別為二級(jí)和三級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜的基峰離子，推斷該化合物為烏頭堿結(jié)構(gòu)中醋酸酯水解形成的烏頭次堿，該鑒定結(jié)果與文獻(xiàn)中報(bào)道關(guān)于烏頭次堿的質(zhì)譜行為相符?；衔颩3色譜保留時(shí)間為16.2 min，準(zhǔn)分子離子m/z586.2，相對(duì)于烏頭堿的基峰離子減少了60 u，軟電離條件下經(jīng)過(guò)二級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到基峰碎片離子[M+H-32]+(m/z554.1)，三級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到主要碎片離子[M+H-32-32]+(m/z522.1)，示于圖4，結(jié)合魏巍等[18]在烏頭堿水解產(chǎn)物中檢測(cè)到焦烏頭堿[M+H]+分子離子峰m/z586.7的報(bào)道，推測(cè)M3為焦烏頭堿。

化合物M2和M4的準(zhǔn)分子離子m/z相同，均為618.2，而且在該軟電離條件下二級(jí)質(zhì)譜碎片也相同，均為m/z558.1，相對(duì)于烏頭堿在相同條件下所得的基峰離子分別減少28 u，但是，三級(jí)質(zhì)譜碎片有差別，分別為m/z476.1和m/z498.1，而且色譜保留時(shí)間也不同，分別為14.9 min和16.9 min，示于圖5和圖6。由此可以判斷M2和M4為同分異構(gòu)體，推測(cè)為烏頭堿脫去N-乙基或者O-雙甲基的產(chǎn)物，參考文獻(xiàn)報(bào)道[17]，根據(jù)相應(yīng)的二級(jí)和三級(jí)質(zhì)譜碎片，鑒定M2為N-去乙基烏頭堿，M4為O-去雙甲基烏頭堿。

色譜保留時(shí)間為17.0 min的M5，準(zhǔn)分子離子m/z662.2，二級(jí)和三級(jí)質(zhì)譜碎片分別為m/z602.1和m/z542.1，示于圖7，均比烏頭堿的基峰離子、二級(jí)質(zhì)譜和三級(jí)質(zhì)譜碎片多了16 u，這說(shuō)明M5和烏頭堿具有相似的結(jié)構(gòu)，中性丟失16 u推測(cè)為羥基，推斷其為烏頭堿的羥基化產(chǎn)物，參考文獻(xiàn)報(bào)道[19]，M5鑒定為羥基烏頭堿。

化合物M6色譜保留時(shí)間為17.8 min，準(zhǔn)分子離子m/z632.1，比烏頭堿的基峰離子少14 u，14 u的中性丟失可能為亞甲基，另外，二級(jí)和三級(jí)質(zhì)譜碎片分別為m/z572.1和m/z512.1，比較烏頭堿在同樣條件下所得的基峰離子均相差14 u，說(shuō)明兩者具有相同的斷裂規(guī)律，因此推斷M6與烏頭堿結(jié)構(gòu)相似，文獻(xiàn)[20]中報(bào)道了烏頭堿在體內(nèi)代謝過(guò)程中可以丟失C-16位甲氧基中的亞甲基而形成C-16位羥基，產(chǎn)生16-O-去甲基烏頭堿，化合物M6其各級(jí)質(zhì)譜的數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的16-O-去甲基烏頭堿裂解規(guī)律相同，示于圖8，故鑒定其為16-O-去甲基烏頭堿。

圖3 烏頭次堿的MSn譜圖Fig.3 Mass spectra of M1

圖4 N-去乙基烏頭堿的MSn譜圖Fig.4 Mass spectra of M2

圖5 焦烏頭堿的MSn譜圖Fig.5 Mass spectra of M3

圖6 O-去雙甲基烏頭堿的MSn譜圖Fig.6 Mass spectra of M4

圖7 羥基烏頭堿的MSn譜圖Fig.7 Mass spectra of M5

圖8 16-O-去甲基烏頭堿的MSn譜圖Fig.8 Mass spectra of M6

圖9 去氫烏頭堿的MSn譜圖Fig.9 Mass spectra of M7

圖10 去氧烏頭堿的MSn譜圖Fig.10 Mass spectra of M8

圖11 烏頭堿及其代謝物生物轉(zhuǎn)化過(guò)程Fig.11 Biotransformation of Aconitine and its metabolites

準(zhǔn)分子離子m/z為644.2，色譜保留時(shí)間為18.8 min的化合物M7，比烏頭堿基峰離子僅少2 u，推測(cè)為烏頭堿脫去兩個(gè)氫的產(chǎn)物，參考文獻(xiàn)報(bào)道[17]，鑒定為去氫烏頭堿，二級(jí)和三級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜碎片分別為m/z584.2和m/z552.1，示于圖9。

化合物M8的色譜保留時(shí)間為20.3 min，分子離子、二級(jí)和三級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜碎片分別為m/z630.2、570.2、510.2，示于圖10，均比烏頭堿相應(yīng)分子離子少16 u，由此推斷16 u的中性丟失為氧，參考文獻(xiàn)報(bào)道[21]，推斷M8為去氧烏頭堿。

為了更準(zhǔn)確的鑒定烏頭堿在大鼠肝微粒體S9組分中的體外代謝產(chǎn)物，大鼠給藥后尿樣處理后經(jīng)LC-ITMS分析，對(duì)照空白尿樣實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合LC/MSn譜圖，烏頭堿原藥及8種體外代謝產(chǎn)物均被檢測(cè)到，除此以外，還檢測(cè)到更多的代謝產(chǎn)物。

根據(jù)鑒定出來(lái)的代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)，可以推斷烏頭堿及其代謝產(chǎn)物之間的生物轉(zhuǎn)化規(guī)律，對(duì)烏頭生物堿中毒的法醫(yī)鑒定、臨床診斷以及毒代動(dòng)力學(xué)、毒理學(xué)研究等具有一定的指導(dǎo)意義。烏頭堿及8種代謝產(chǎn)物之間可能的生物轉(zhuǎn)化過(guò)程示于圖11。

另外，與體內(nèi)代謝研究相比，體外代謝具有反應(yīng)干擾小、操作簡(jiǎn)單、代謝條件易于控制等優(yōu)點(diǎn)；同時(shí)，體外代謝可以實(shí)現(xiàn)在較短時(shí)間內(nèi)得到大量代謝產(chǎn)物，便于對(duì)它們進(jìn)行提取、分離、純化和表征；還能迅速有效的解決藥物代謝中的關(guān)鍵問(wèn)題，例如代謝物結(jié)構(gòu)鑒定、代謝途徑推斷等。因此，本研究利用LC-ITMS方法對(duì)烏頭堿及其代謝物進(jìn)行分析結(jié)果為新藥開(kāi)發(fā)、藥物毒代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)、毒理學(xué)等研究提供了一定的參考和借鑒。

3 結(jié)論

利用體外代謝方法，結(jié)合LC-ITMS聯(lián)用技術(shù)，建立了烏頭堿及其體外代謝產(chǎn)物的分析方法。該方法首先利用體外代謝方法得到大鼠肝微粒體S9組分中烏頭堿及代謝產(chǎn)物混合體系，然后利用LC-ESI-ITMS聯(lián)用技術(shù)對(duì)各代謝物進(jìn)行分析，得到烏頭堿代謝物的[M+H]+分子質(zhì)量信息，進(jìn)一步結(jié)合多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜(LC/MSn)分析結(jié)果獲得結(jié)構(gòu)信息，對(duì)代謝物進(jìn)行鑒定，從而推測(cè)代謝物結(jié)構(gòu)，進(jìn)而結(jié)合大鼠尿中烏頭堿及其代謝物的分析結(jié)果，得到烏頭堿的生物轉(zhuǎn)化規(guī)律。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：采用體外代謝方法，利用LC-ITMS聯(lián)用技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)烏頭堿及主要代謝產(chǎn)物的同時(shí)檢測(cè)和分析，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道與體內(nèi)代謝過(guò)程，借助LC/MSn方法可以對(duì)代謝物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，并得到烏頭堿的生物轉(zhuǎn)化規(guī)律。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)烏頭生物堿的法醫(yī)鑒定和臨床診斷具有一定的指導(dǎo)意義。

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SimultaneousAnalysisofAconitineandItsMetabolitesbyLiquidChromatography-ElectrosprayIonTrapMassSpectrometry

CHEN Xue-guo1, 2, LAI Yong-quan2, CAI Zong-wei2

(1.DepartmentofForensicMedicine,ChinaCriminalPoliceUniversity,Shenyang110854,China;2.DepartmentofChemistry,HongKongBaptistUniversity,HongKongSAR999077,China)

A method applying liquid chromatography-electrospray ionization-ion trap mass spectrometry (LC-ESI-ITMS) for the simultaneous analysis of Aconitine and its in-vitro metabolites is described. Aconitine was incubated with mouse liver microsome S9fraction firstly, and then the incubation sample was analyzed by LC-ESI-ITMS in full-scan mode. Aconitine and its metabolites were identified from the determination of molecular ions. The metabolites detection were confirmed from tandem mass spectrometry (MSn) analysis. Comparing with the analysis of urine, 8 metabolites were identified in the mouse liver S9fractions by comparing with the analysis of urine of rat oral with Aconitine and referring to the literature reports.

liquid chromatography-electrospray ion trap mass spectrometry; mouse liver S9fractions; Aconitine; in-vitro metabolism

O 657.63

A

1004-2997(2012)03-0065-09