孫志平，韓文東，丁悅娜，瞿滌,2

1. 上海復(fù)旦大學(xué)三級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室，上海 200032； 2. 復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院教育部/衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200032

生物安全實(shí)驗(yàn)室微環(huán)境消毒是控制實(shí)驗(yàn)室污染的重要環(huán)節(jié)，而生物安全柜是生物安全實(shí)驗(yàn)室中的關(guān)鍵設(shè)備，對(duì)感染性病原微生物的操作均應(yīng)盡量在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。因此，生物安全柜存在被污染的風(fēng)險(xiǎn)，特別是在操作抵抗力強(qiáng)的病原微生物(如結(jié)核分枝桿菌等)時(shí)風(fēng)險(xiǎn)更大。當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后或污染事故(如意外潑灑)發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行生物安全柜內(nèi)表面和空間的微環(huán)境消毒。生物安全柜的常規(guī)消毒方式主要采用消毒劑擦拭，但該方法無(wú)法徹底清除潛在的污染，因此需采用更加有效的空間消毒方式，如消毒劑蒸汽或氣溶膠熏蒸[1]。過(guò)氧化氫干霧消毒方法廣泛應(yīng)用于病原微生物實(shí)驗(yàn)室微環(huán)境消毒，但其對(duì)不同病原微生物的消毒效果有待研究。

目前，實(shí)驗(yàn)室微環(huán)境的消毒方式可分為化學(xué)消毒法和物理消毒法，其中化學(xué)消毒法主要采用甲醛、環(huán)氧乙烷、二氧化氯、過(guò)氧乙酸等熏蒸或霧化，對(duì)病原微生物具有良好的殺菌作用。然而，這些消毒劑在使用中存在一些缺陷：或具有毒性/致癌性，或?qū)Νh(huán)境不友好，或?qū)x器具有一定的腐蝕性，或易燃、易爆等[2]。過(guò)氧化氫是一種強(qiáng)氧化劑，適用于傷口消毒及環(huán)境、食品消毒[3]。過(guò)氧化氫因毒性小且對(duì)環(huán)境友好，其在空間消毒中的應(yīng)用越來(lái)越受關(guān)注[4-7]。通過(guò)干性或濕性霧化后，過(guò)氧化氫氣溶膠具有更強(qiáng)的氧化性，能均勻彌散至空間的各個(gè)角落，其中干性霧化的彌散效果較好，可用于病原微生物實(shí)驗(yàn)室或潔凈室空間的消毒[6,8-11]。因不同病原微生物對(duì)消毒劑及消毒方式的抵抗力存在差異，本文研究了過(guò)氧化氫干霧法對(duì)生物安全柜的空間及微環(huán)境表面常見(jiàn)病原微生物的消毒效果，提出適用于生物安全柜微環(huán)境表面干霧消毒的程序和措施。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1菌種嗜熱脂肪芽胞桿菌菌片(SS1.K31)、枯草芽胞桿菌黑色變種(ATCC 9372)購(gòu)自北京鑫四環(huán)消毒技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，恥垢分枝桿菌(MC2155)由第四軍醫(yī)大學(xué)徐志凱教授惠贈(zèng)，金黃色葡萄球菌(ATCC 49230)、表皮葡萄球菌(ATCC 1457)和大腸埃希菌(DH5a)由本實(shí)驗(yàn)室課題組保存。

1.1.2試劑胰蛋白胨、酵母提取物、胰蛋白胨大豆肉湯(tryptone soya broth, TSB)購(gòu)自英國(guó)Oxiod公司，溴甲酚紫(染料含量為90%)、無(wú)水D-葡萄糖(純度≥99.5%)購(gòu)自Sigma公司，Difco Middlebrook 7H9肉湯培養(yǎng)基、Difco Middlebrook 7H10 瓊脂培養(yǎng)基、BBL Middlebrook ADC Enrichment培養(yǎng)基和BBL Middlebrook OADC Enrichment培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)BD公司，過(guò)氧化氫溶液(濃度6%)為法國(guó)Devea公司產(chǎn)品(O2SAFE)。

1.1.3過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器(法國(guó)Devea公司，型號(hào)：PHILEAS 20D)通過(guò)高速離心方式每分鐘發(fā)散6 ml過(guò)氧化氫，產(chǎn)生粒徑<10 μ m的過(guò)氧化氫氣溶膠(干霧)。

1.2 方法

1.2.1細(xì)菌菌片的制備金黃色葡萄球菌(ATCC 49230)、表皮葡萄球菌(ATCC 1457)培養(yǎng)于TSB培養(yǎng)基，大腸埃希菌(DH5a)培養(yǎng)于LB培養(yǎng)基，恥垢分枝桿菌(MC2155)培養(yǎng)于Middlebrook 7H9培養(yǎng)基， 37 ℃振蕩培養(yǎng)。金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大腸埃希菌培養(yǎng)12 h，恥垢分枝桿菌培養(yǎng)48 h，分光光度計(jì)測(cè)定600 nm處光密度(optical density，OD)，菌液稀釋至OD600=1作為測(cè)試原液。金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大腸埃希菌OD600=1時(shí)濃度約為1×109CFU/ml，恥垢分枝桿菌濃度約為1×108CFU/ml。分別將細(xì)菌測(cè)試原液稀釋10、100、1 000倍，吸取100 μ l稀釋菌液并涂布于0.5 cm×2.0 cm濾紙(Bio-Rad)。金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大腸埃希菌菌片的含菌量分別為1×108、1×107、1×106、1×105CFU；恥垢分枝桿菌菌片的含菌量分別為1×107、1×106、1×105、1×104CFU。嗜熱脂肪芽胞桿菌菌片(SS1.K31)、枯草芽胞桿菌黑色變種(ATCC 9372)菌片的含菌量約為1×106CFU。

1.2.2過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器消毒方案將4個(gè)稀釋度菌片放置于12孔板中，每個(gè)稀釋度3片，共2塊(A、B)板，分別放置于生物安全柜內(nèi)操作臺(tái)面左右兩端(圖1)。各濃度的菌片均設(shè)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照。以不進(jìn)行處理的菌片為陰性對(duì)照，壓力蒸汽滅菌(121 ℃，20 min)處理的菌片為陽(yáng)性對(duì)照。過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器消毒效果檢測(cè)分為3個(gè)階段。①消毒前準(zhǔn)備：在生物安全柜內(nèi)相應(yīng)位置放置過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器和細(xì)菌菌片(圖1)，并用薄膜紙封閉生物安全柜的前窗口。②消毒過(guò)程：發(fā)生器產(chǎn)生過(guò)氧化氫干霧的程序可分為連續(xù)發(fā)生和間斷重復(fù)發(fā)生2種形式，在干霧發(fā)生過(guò)程中每分鐘可將6 ml過(guò)氧化氫溶液轉(zhuǎn)化為干霧。一般情況下，短時(shí)、多次發(fā)生有利于干霧的分散。干霧發(fā)生結(jié)束后靜置120 min。為摸索過(guò)氧化氫干霧殺滅細(xì)菌的效果，針對(duì)生物安全柜(0.8 m3)設(shè)計(jì)了4個(gè)不同的消毒程序(表1)。③消毒結(jié)束后檢測(cè)：開(kāi)啟生物安全柜的通風(fēng)，待過(guò)氧化氫干霧排凈后，重新蓋上12孔板，在生物安全柜內(nèi)取出菌片進(jìn)行培養(yǎng)。

表1過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器消毒程序的設(shè)置

Tab.1 The procedures of H2O2dry-mist sterilization

ProcedureGeneration (min)Interval (min)CycleSterilization (min)Total volume of H2O2 (ml)Volume of H2O2 (ppm)12101120121522105120607532101012012015041581204860

A and B location: the right/left site of the biosafety cabinet (BSC) surface for laying indicator bacteria (B.subtilis,B.stearothermophilus,E.coli,S.aureus,S.epidermidisandM.smegmatis). The middle site of BSC surface for laying H2O2delivery device generating dry-mist.

圖1生物安全柜內(nèi)過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器和菌片的位置

Fig.1 The location of H2O2disinfector and indicators on the BSC surface

1.2.3過(guò)氧化氫消毒效果的微生物檢測(cè)過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器消毒程序結(jié)束后取出菌片，置于5 ml相應(yīng)液體培養(yǎng)基中。其中嗜熱脂肪芽胞桿菌菌片培養(yǎng)前需90 ℃孵育60 min。嗜熱脂肪芽胞桿菌的培養(yǎng)基為溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基(含1%胰蛋白胨、0.5%葡萄糖和0.1%溴甲酚紫乙醇溶液指示劑)，56 ℃振蕩培養(yǎng)；枯草芽胞桿菌黑色變種和大腸埃希菌的培養(yǎng)基為L(zhǎng)B培養(yǎng)基(含0.5%酵母提取物、1%胰蛋白胨和0.5%氯化鈉)；恥垢分枝桿菌的培養(yǎng)基為Middlebrook 7H9培養(yǎng)基(含10% OADC)；金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的培養(yǎng)基為T(mén)SB培養(yǎng)基(含0.5%大豆蛋白胨、1.5%胰蛋白胨和0.5%氯化鈉)。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、恥垢分枝桿菌和枯草芽胞桿菌在37 ℃振蕩培養(yǎng)24 h后，培養(yǎng)液澄清，無(wú)可見(jiàn)細(xì)菌菌落，則判定為無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。嗜熱脂肪芽胞桿菌在56 ℃振蕩培養(yǎng)168 h后，培養(yǎng)液為紫色澄清且未變?yōu)辄S色，無(wú)可見(jiàn)細(xì)菌菌落，則判定為無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。

2 結(jié)果

2.1 過(guò)氧化氫干霧采用不同消毒程序的殺菌效果

為了確定有效的過(guò)氧化氫干霧消毒程序，在減少過(guò)氧化氫對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器損害的前提下，設(shè)定了4個(gè)不同的過(guò)氧化氫干霧消毒程序，發(fā)散循環(huán)次數(shù)為1、5、10、8次，過(guò)氧化氫發(fā)散體積分別為15、75、150、60 ppm，靜置消毒時(shí)間均為120 min(表1)，利用枯草芽胞桿菌黑色變種菌片和嗜熱脂肪芽胞桿菌菌片作為指示菌進(jìn)行研究。經(jīng)不同程序消毒后，分別取出菌片，根據(jù)指示菌的相應(yīng)生長(zhǎng)特性進(jìn)行培養(yǎng)，其中枯草芽胞桿菌37 ℃培養(yǎng)24 h，嗜熱脂肪芽胞桿菌56 ℃培養(yǎng)168 h，觀察細(xì)菌培養(yǎng)液的變化情況。枯草芽胞桿菌菌片經(jīng)4個(gè)程序消毒后，培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)液均為透明澄清，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)，與經(jīng)壓力蒸汽滅菌的菌片培養(yǎng)結(jié)果相同；而未經(jīng)消毒處理的菌片培養(yǎng)液(24 h)渾濁，可見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)。然而，嗜熱脂肪芽胞桿菌菌片經(jīng)過(guò)程序1和2消毒后，培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)液均由紫色澄清變?yōu)辄S色渾濁，與未經(jīng)消毒處理的菌片培養(yǎng)結(jié)果相似；而經(jīng)程序3和4消毒后，嗜熱脂肪芽胞桿菌菌片培養(yǎng)168 h，培養(yǎng)液保持紫色澄清，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)(表2、3，圖2、3)。比較消毒程序3與4發(fā)現(xiàn)，消毒程序4 降低了過(guò)氧化氫干霧濃度，減少了對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器的損害，優(yōu)于消毒程序3。

表2過(guò)氧化氫干霧采用不同消毒程序的殺菌效果

Tab.2 Effect of H2O2dry-mist on killing bacterial spores with different procedures in the biosafety cabinet

Bacterium Negative controlProcedure 1Procedure 2Procedure 3Positive control?B. subtilis1×106 CFU+————B. stearothermophilus1×106 CFU+++——

Negative control, the filter paper containing bacterial spores (1×106CFU) without disinfection; Positive control, the filter paper containing bacterial spores sterilized by autoclave (121 ℃, 15 min). The filter papers containing bacterial spores were cultured in the medium for 24 h (B.subtilis, 37 ℃) and 1 week (B.stearothermophilus, 56 ℃). Observe turbidity of the culture. The turbid cultures (+) indicated bacteria growing on the papers. Oppositely, the limpid cultures (-) indicated papers being sterilized. The filter papers containing bacterial spores was disinfected with H2O2dry-mist for procedures 1, 2 and 3. Procedure 1: Generate H2O2dry-mist for 2 min, then sterilize for 2 h. Procedure 2: Generate H2O2dry-mist for 2 min for 5 cycles and suspend for 10 min, and then sterilize for 2 h. Procedure 3: Generate H2O2dry-mist for 2 min for 10 cycles and suspend for 10 min, and then sterilize for 2 h.

表3過(guò)氧化氫干霧采用消毒程序4對(duì)生物安全柜表面的殺菌效果

Tab.3 Effect of H2O2dry-mist on killing bacterial spores with procedure 4 in the biosafety cabinet

BacteriumNegative controlA locationB locationPositive controlB. subtilis1×106 CFU+———B. stearothermophilus1×106 CFU+———

Negative control, the filter paper containing bacterial spores (1×106CFU) without disinfection; Positive control, the filter paper containing bacterial spores sterilized by autoclave (121 ℃,15 min). A and B locations: the right/left site of the BSC surface for laying indicator bacteria (B.subtilisandB.stearothermophilus). Each bacterial strain had 3 repeats on the plates (12 wells) laying on A and B locations. The filter papers containing bacterial spores were disinfected by H2O2dry-mist with procedure 4 (generate H2O2dry-mist for 1 min for 8 cycles and suspend for 5 min, and then sterilize for 2 h). The filter papers containing bacterial spores were cultured in the medium for 24 h (B.subtilis, 37 ℃) and 1 week (B.stearothermophilus, 56 ℃). Observe turbidity of the culture. The turbid cultures (+) indicated bacteria growing on the papers. Oppositely, the limpid cultures (-) indicated papers being sterilized.

2.2 過(guò)氧化氫干霧采用消毒程序4對(duì)不同細(xì)菌的殺滅效果

采用消毒程序4(發(fā)散8次，總體積60 ml/m3空間)研究過(guò)氧化氫干霧對(duì)常見(jiàn)病原微生物大腸埃希菌(DH5a)、金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)、表皮葡萄球菌(ATCC 1457)及恥垢分枝桿菌(MC2155，作為結(jié)核分枝桿菌模擬菌)等的消毒效果。首先制備上述細(xì)菌不同稀釋度的菌片，其中大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌菌片含菌量為1×105、1×106、1×107和1×108CFU，恥垢分枝桿菌菌片含菌量為1×104、1×105、1×106和1×107CFU，在各稀釋度均設(shè)置未消毒處理菌片和壓力蒸汽滅菌處理菌片分別作為陰性和陽(yáng)性對(duì)照。將各稀釋度的菌片(每個(gè)稀釋度3片)放置于12孔板，分別安放于生物安全柜內(nèi)操作臺(tái)面左右兩側(cè)(圖1)，采用過(guò)氧化氫干霧消毒程序4進(jìn)行消毒，取出菌片培養(yǎng)。結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)氧化氫干霧消毒后，大腸埃希菌1×108CFU菌片仍未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)；金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的1×105和1×106CFU菌片培養(yǎng)液均未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)，而1×107和1×108CFU菌片培養(yǎng)液均變渾濁；恥垢分枝桿菌1×107CFU菌片培養(yǎng)液渾濁，細(xì)菌生長(zhǎng)，其余稀釋度的菌片培養(yǎng)液均澄清，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)(表4、圖4)。

3 討論

生物安全實(shí)驗(yàn)室中病原微生物污染最集中的部位是生物安全柜內(nèi)微環(huán)境，包括生物安全柜表面及空氣。國(guó)家新標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》(GB 19489-2008)要求生物安全實(shí)驗(yàn)室在關(guān)鍵部位配備局部消毒裝置。研究安全、有效的實(shí)驗(yàn)室微環(huán)境中微生物消毒方法， 將為實(shí)驗(yàn)室生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供依據(jù)， 從而確保生物安全柜微環(huán)境中微生物污染的清除，降低實(shí)驗(yàn)室感染事件發(fā)生的概率，同時(shí)也減少消毒劑對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的危害[12]。根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范》，實(shí)驗(yàn)室空間消毒方式(紫外線照射、消毒劑熏蒸和噴霧等)主要?dú)w類(lèi)為化學(xué)消毒劑和物理作用方式。其中，紫外線的消毒作用較弱，消毒效果難以保證，因此實(shí)驗(yàn)室微環(huán)境表面消毒通常采用化學(xué)消毒劑進(jìn)行消毒[13]?；瘜W(xué)消毒劑主要包括甲醛、環(huán)氧乙烷、二氧化氯、過(guò)氧乙酸和過(guò)氧化氫等。其中，甲醛熏蒸的消毒效果已得到驗(yàn)證，被證實(shí)為可靠的實(shí)驗(yàn)室空間消毒方式，但仍存在一定的缺陷[14,15]。甲醛熏蒸時(shí)，對(duì)消毒環(huán)境有一定的要求，實(shí)驗(yàn)室空間溫度和濕度的變化直接影響消毒效果；其次，當(dāng)環(huán)境溫度較低時(shí)，甲醛蒸汽容易在微環(huán)境表面凝結(jié)成白色結(jié)晶，不易清除，從而對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和儀器產(chǎn)生較大損傷；熏蒸結(jié)束后，殘余的甲醛氣體對(duì)人體具有致癌作用，對(duì)操作者和環(huán)境極不友好[16]。其他消毒劑如環(huán)氧乙烷等也存在對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不友好等諸多缺點(diǎn)。因此，缺點(diǎn)較少的過(guò)氧化氫在實(shí)驗(yàn)室微環(huán)境消毒中的應(yīng)用越來(lái)越受關(guān)注，并不斷推出新技術(shù)。

表4過(guò)氧化氫干霧采用消毒程序4對(duì)生物安全柜表面不同細(xì)菌的殺滅效果

Tab.4 Effect of H2O2dry-mist on killing bacteria with procedure 4 in the biosafety cabinet

Bacterium (CFU)Negative controlA locationB locationPositive controlE. coli 1×108+——— 1×107+——— 1×106+——— 1×105+———S. aureus 1×108+++— 1×107+++— 1×106+——— 1×105+———S. epidermidis 1×108+++— 1×107+++— 1×106+——— 1×105+———M. smegmatis 1×107+++— 1×106+——— 1×105+——— 1×104+———

Negative control, the filter paper containing bacteria (100 μ l) without disinfection; Positive control, the filter paper containing bacteria (100 μ l) sterilized by autoclave (121 ℃, 15 min). A and B locations: the right/left site of the BSC surface for laying indicator bacteria (E.coli,S.aureus,S.epidermidisandM.smegmatis). Each bacterial strain had 3 repeats at four CFU levels (10 times dilution) on the plates (12 wells) laying on the A and B locations. The filter papers containing bacterial spores disinfected by H2O2dry-mist with procedure 4 (generate H2O2dry-mist for 1 min for 8 cycles and suspend for 5 min, and then sterilize for 2 h). The filter papers containing bacterial spores were cultured in the medium for 24 h. Observe turbidity of the culture. The turbid cultures (+) indicated bacteria growing on the papers. Oppositely, the limpid cultures (-) indicated papers being sterilized.

過(guò)氧化氫消毒可分為普通擦拭、霧化、蒸汽及低溫等離子體方式[7,11,17-19]。后兩者的應(yīng)用條件比霧化過(guò)氧化氫更加嚴(yán)苛，在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用中成本較高，難以推廣。因此，霧化過(guò)氧化氫更常用于實(shí)驗(yàn)室消毒。霧化過(guò)氧化氫是在外加能量作用下，液體在氣體環(huán)境中變成小霧滴的物理過(guò)程，液滴粒徑1～1 000 μ m。產(chǎn)生霧化的方式有很多，如通過(guò)普通噴壺、氣溶膠發(fā)生器、霧化超聲器等。霧化粒徑越小，消毒效果越好。當(dāng)粒徑<10 μ m時(shí)，液滴在空間中不會(huì)沉降，不會(huì)聚合產(chǎn)生大液滴，且能進(jìn)行無(wú)規(guī)則運(yùn)動(dòng)，與表面接觸后會(huì)反彈而不破裂。干霧能形成很好的空間擴(kuò)散和表面接觸效果，更有利于發(fā)揮消毒作用[11,20-22]。

在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，病原微生物易產(chǎn)生氣溶膠，污染生物安全柜內(nèi)微環(huán)境，擦拭消毒時(shí)有些部位不易接觸到，當(dāng)操作抵抗力強(qiáng)的病原微生物(如結(jié)核分枝桿菌等)時(shí)潛在的生物安全風(fēng)險(xiǎn)更大。當(dāng)常規(guī)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后或污染事故(如意外潑灑)發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行生物安全柜內(nèi)表面和空間的消毒，及時(shí)清除污染，避免微生物污染擴(kuò)散，防止實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染事件發(fā)生[1]。本文研究了過(guò)氧化氫干霧發(fā)生器對(duì)生物安全柜微環(huán)境表面病原微生物的消毒效果。這些微生物包括大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌， 常用的滅菌微生物指示菌枯草芽胞桿菌和嗜熱脂肪芽胞桿菌， 以及作為結(jié)核分枝桿菌模擬菌的恥垢分枝桿菌。生物安全柜內(nèi)微環(huán)境過(guò)氧化氫干霧消毒結(jié)果顯示，枯草芽胞桿菌對(duì)該消毒方法的敏感度高于嗜熱脂肪芽胞桿菌：當(dāng)過(guò)氧化氫干霧濃度達(dá)到15 ppm時(shí)，可殺滅1×106CFU枯草芽胞桿菌，而殺滅1×106CFU嗜熱脂肪芽胞桿菌則須達(dá)60 ppm。不同細(xì)菌的芽胞對(duì)氧化氫干霧敏感度的差異有待進(jìn)一步研究。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)消毒程序?qū)ο拘Ч哂兄匾绊?，尤其是發(fā)散循環(huán)次數(shù)直接影響過(guò)氧化氫干霧的殺菌效果。本文建立了生物安全柜內(nèi)微環(huán)境過(guò)氧化氫干霧的消毒程序：發(fā)散1 min，間隔5 min，循環(huán)8次，達(dá)60 ppm后，消毒120 min。過(guò)氧化氫干霧可完全殺滅1×106CFU枯草芽胞桿菌、嗜熱脂肪芽胞桿菌及1×108CFU大腸埃希菌。雖然過(guò)氧化氫干霧可殺滅1×106CFU金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和恥垢分枝桿菌，但對(duì)這3種病原微生物1×107CFU則無(wú)法完全殺滅。因此，建議在進(jìn)行過(guò)氧化氫干霧消毒前，必須用消毒劑對(duì)生物安全柜表面進(jìn)行擦拭或?qū)σ鐬⒉课贿M(jìn)行局部消毒，以降低局部污染微生物的濃度，以期徹底殺滅生物安全柜微環(huán)境中污染的病原微生物。

圖2過(guò)氧化氫干霧采用消毒程序2對(duì)生物安全柜表面的殺菌效果

Fig.2 Effect of H2O2dry-mist on killing bacterial spores with procedure 2 in the biosafety cabinet

圖3過(guò)氧化氫干霧采用消毒程序4對(duì)生物安全柜表面的殺菌效果

Fig.3 Effect of H2O2dry-mist on killing bacterial spores with procedure 4 in the biosafety cabinet

圖4過(guò)氧化氫干霧采用消毒程序4對(duì)生物安全柜表面不同細(xì)菌的殺滅效果

Fig.4 Effect of H2O2dry-mist on killing bacteria with procedure 4 in the biosafety cabinet

通過(guò)過(guò)氧化氫干霧對(duì)生物安全柜微環(huán)境表面和空間的消毒效果，針對(duì)常規(guī)實(shí)驗(yàn)及高濃度病原微生物污染情況，本文提出了相應(yīng)的過(guò)氧化氫干霧消毒方案，以保障實(shí)驗(yàn)室生物安全。此外，生物安全實(shí)驗(yàn)室空間的消毒也是風(fēng)險(xiǎn)控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，以后將進(jìn)一步研究過(guò)氧化氫干霧對(duì)實(shí)驗(yàn)室空間中常見(jiàn)微生物的消毒效果，摸索針對(duì)實(shí)驗(yàn)室空間的有效過(guò)氧化氫干霧消毒程序，完善生物安全實(shí)驗(yàn)室污染控制方案。

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