鄭新華,韓煥美,何桂華,陳晞,張愛霞,盧燕華
(濟(jì)南出入境檢驗(yàn)檢疫局,山東濟(jì)南250014)
防治有害軟體動物的農(nóng)藥叫做殺軟體動物劑。殺蟲環(huán)、滅梭威、四聚乙醛是選擇性很強(qiáng)的軟體動物殺滅劑,廣泛應(yīng)用于防治作物上的田螺、蝸牛與蛞蝓等害蟲[1]。雖然此類藥物毒性中等或較低,但由于廣泛使用,導(dǎo)致人畜中毒的事例時有發(fā)生[2],同時,此類藥物可在農(nóng)作物、環(huán)境及水生生物大量殘留,最終威脅人類健康。我國GB2763-2012《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定了葉菜中的四聚乙醛殘留限量是1.0 mg/kg;糙米中的四聚乙醛殘留限量是0.2 mg/kg;大米中的殺蟲環(huán)為0.2 mg/kg。殺蟲環(huán)在日本肯定列表中限量為0.050 mg/kg。
目前,關(guān)于殺軟體動物劑殘留量檢測報(bào)道較少。有用氣相色譜法(GC-ECD)檢測殺蟲環(huán)的報(bào)道[3];有用LC-MS/MS 檢測滅梭威的報(bào)道[4];用氣相色譜法[5]和LCMS/MS 法[6]檢測的四聚乙醛的報(bào)道。但對于本文所述的3 中不同類型的殺軟體動物劑殘留量同時分離檢測的尚未見報(bào)道。本文對3 中不同類型的殺軟體動物劑在蔬菜和水果中的殘留量采用同時提取、凈化方法,建立了LC-MS/MS 同時檢測的方法。
Aglient1200 高效液相色譜API4000 串聯(lián)質(zhì)譜儀:美國AB SCIEX;感量為0.1 mg 的分析天平:瑞士梅特勒公司;Milli-Q 純水器:美國Millipore 公司;IKAGM200 型高速均質(zhì)器:德國IK 公司;超純水由Milli-Q純水器制備;甲醇、乙腈、丙酮:色譜純,默克公司;甲苯、甲酸(分析純);氯化鈉、無水NaSO4(分析純,用前在500 ℃馬弗爐內(nèi)烘5 h,冷卻裝瓶備用);四聚乙醛、滅梭威、殺蟲環(huán)標(biāo)準(zhǔn)品:德國Dr Ehrenstorfer 公司。其他試劑,如非特別提及,均為分析純。
稱取四聚乙醛,滅梭威、殺蟲環(huán)標(biāo)準(zhǔn)品各10.0 mg,用甲醇溶解后,并分別定容于100 mL 棕色容量瓶中,即得100 mg/L 標(biāo)準(zhǔn)儲備液。用甲醇將標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,進(jìn)行LC-MS/MS 分析。以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制相關(guān)線性方程。
稱取20.0 g 樣品于50 mL 聚四氟乙烯離心管中,加入20 mL 乙腈,在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min。勻漿后以4 500 r/min 離心5 min,上清液轉(zhuǎn)移至另一裝有5.0 g氯化鈉的50 mL 離心管中,塞上塞子,手動劇烈振搖后再渦流1 min,再以4 500 r/min 離心5 min,吸取上清液轉(zhuǎn)移于裝有5.0 g 無水NaSO4的漏斗中,漏斗下接10 mL刻度試管,準(zhǔn)確接液10 mL 于刻度管中,刻度管置于40 ℃水浴中氮?dú)獯蹈?。?zhǔn)確加入2.0 mL 乙腈溶解殘?jiān)鼫u流2 min 待凈化。
待凈化液轉(zhuǎn)移至盛有0.15 gPSA 粉和0.15 gC18粉的離心管中。渦流2 min,離心。取1.0 mL 上清液,置于離心管中氮?dú)獯到桑眉状级ㄈ葜?.0 mL,渦流混合后過0.22 μm 濾膜,進(jìn)行LC-MS/MS 分析。
色譜條件:XBridgeTMC18色譜柱(150 mm×2.1 mm×5.0 μm);進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:30 ℃。流動相:甲醇+0.1%甲酸水溶液,梯度洗脫程序見表1。
表1 流動相梯度洗脫條件Table 1 Eluted condition of the mobile phase
質(zhì)譜條件:ESI 源正離子模式電離;多反應(yīng)監(jiān)測;電噴霧電壓:4 500 V;離子源溫度:500 ℃;載氣流速:15 L/min;霧化器壓力:45 psi。目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)品的采集參數(shù)見表2。
表2 3 種殺軟體動物劑的LC-MS/MS 分析參數(shù)Table 2 LC-MS/MS parameters for three kinds of molluscicides
對菠菜、白菜、草莓和白瓜進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn),分別添加濃度為0.010、0.020、0.050 mg/kg。稱樣后加入標(biāo)準(zhǔn)溶液,渦旋混勻放置0.5 h 后按上文進(jìn)行樣品處理。
以乙腈+0.1%甲酸水,甲醇+5 mmol/L 乙酸銨水溶液,甲醇+0.1%甲酸水作為流動相,考察了不同流動相對色譜圖的影響。研究發(fā)現(xiàn)以乙腈+0.1%甲酸水,甲醇+5 mmol/L 乙酸銨水溶液為流動相,四聚乙醛,殺蟲環(huán)出峰快,峰形差。而以甲醇+0.1%甲酸水為流動相,采用梯度洗脫,3 種殺軟體動物劑能夠快速分離,且每種化合物色譜峰對稱尖銳,分離效果較好,見圖1。因此,選擇甲醇+0.1%甲酸水溶液作流動相,梯度洗脫條件見表1。
圖1 3 種殺軟體動物劑多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖Fig.1 Multiple reaction monitering chromatograms of three molluscicides
實(shí)驗(yàn)比較了分散固相凈化方法、氨基柱、弗羅里硅土小柱對樣品的凈化效果。結(jié)果表明弗羅里硅土小柱去除雜質(zhì)效果較差;氨基柱去除雜質(zhì)效果較好,但試劑消耗量大、費(fèi)時,而且四聚乙醛回收較差。采用PSA 粉、C18粉2 種混合吸附劑粉末凈化樣品,提取液可以充分和凈化粉末接觸,凈化效果較好,并且基線穩(wěn)定,回收效果好。
樣品基質(zhì)對離子化有抑制作用,不同農(nóng)藥受同一樣品基質(zhì)影響不同,不同樣品對同一農(nóng)藥離子化的抑制也有差異。殺蟲環(huán)和滅梭威的離子化效率受樣品基質(zhì)影響較小,四聚乙醛離子化效率受樣品基質(zhì)影響較強(qiáng)。菠菜,白菜對農(nóng)藥離子化影響較弱,草莓和白瓜對農(nóng)藥離子化影響較強(qiáng)。為消除樣品基質(zhì)效應(yīng),以空白樣品提取液為標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液,可使標(biāo)樣和樣品溶液具有同樣的離子化條件,從而消除樣品基質(zhì)效應(yīng)。
準(zhǔn)確配制一系列濃度的3 種混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,按上述儀器條件依次進(jìn)樣,以色譜峰面積對濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線,得3 種殺軟體動物劑的線性方程及相關(guān)系數(shù)見表3。
表3 3 種農(nóng)藥的線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)和方法檢出限Table 3 Linear equations,linear ranges,correlation coefficients(r2)and detection limits of three molluscicides
以信噪比S/N=3 和樣品處理過程的稀釋倍數(shù)計(jì)算得出方法檢出限。結(jié)果顯示,3 種農(nóng)藥在一定質(zhì)量濃度內(nèi)呈良好線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均大于0.99,檢出限均為0.010 mg/kg。
在陰性白菜,菠菜,草莓和白瓜樣品中添加3 個濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按上述前處理方法進(jìn)行處理,做回收實(shí)驗(yàn),每個水平重復(fù)6 次,精密度結(jié)果見表4。
表4 樣品中3 種殺軟體動物劑回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 4 Spiked recoveries and RSDs of three kinds of molluscicides in the samples
3 種殺軟體動物劑在白菜、菠菜、草莓、白瓜中添加回收率在80.0 %~101.5 %之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD,n=6)2.3%~7.5%,符合農(nóng)藥殘留分析的要求。
本文采用乙腈提取,分散固相進(jìn)行樣品凈化,首次建立了同時檢測蔬菜和水果中的四聚乙醛、殺蟲環(huán)、滅梭威3 種殺軟體動物劑殘留量的LC-MS/MS法。該方法簡便快速,準(zhǔn)確靈敏、重現(xiàn)性好,完全滿足進(jìn)出口食品農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)品質(zhì)量控制要求。
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