曾翠瓊 曾振東 呂 琳

廣西民族醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530001

壯醫(yī)刺血療法對更年期小鼠免疫系統(tǒng)的影響

曾翠瓊 曾振東 呂 琳

廣西民族醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530001

目的：壯醫(yī)刺血療法對自然更年期小鼠免疫系統(tǒng)的影響。方法：制作自然更年期小鼠模型，觀察壯醫(yī)刺血療法對不同月齡段自然更年期小鼠血清IL－2水平、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響，并與同齡自然組進行比較。結(jié)果：壯醫(yī)刺血治療后，小鼠血清IL－2水平、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)明顯升高，與同齡自然組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜0.05，0.01）。結(jié)論：壯醫(yī)刺血療法可在一定程度上改善自然更年期小鼠的免疫衰退，增強免疫器官功能，從多個途徑增強或改善機體免疫功能。

壯醫(yī)刺血療法；免疫系統(tǒng)；實驗研究

更年期綜合征是指從卵巢功能開始衰退到完全停止的階段，會導(dǎo)致患者體液免疫、細胞免疫功能下降和衰退，也是導(dǎo)致發(fā)生如感染、自身免疫疾病、心腦血管疾病等并發(fā)癥的重要原因。因此，免疫系統(tǒng)對維護人體健康、防止衰老、更年期癥狀及并發(fā)癥的防治具有重要意義。本研究通過觀察壯醫(yī)刺血療法對自然更年期小鼠血清IL－2水平、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響，探討壯醫(yī)刺血療法對自然更年期小鼠免疫系統(tǒng)的作用機制，為臨床提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 10月齡昆明種雌性小鼠56只，體重（39.11±3.52）g，清潔級，室溫18～22℃，相對濕度50%～70%。

1.1.2 針刺用具 一次性淺刺針、2%碘酒、75%酒精、棉簽。

1.1.3 主要器械和試劑 電子天平、超低溫冰箱、低溫離心機、小鼠白介素－2（購自北京中宇生物技術(shù)研究中心）。

1.2 方法

1.2.1 模型制備 為了與更年期機體各器官的水平相接近，本實驗選擇鼠齡在12～16個月的自然老化的小鼠為研究對象。

健康10月齡雌性小鼠常規(guī)喂養(yǎng)至12月齡，按文獻［1］方法連續(xù)5天進行陰道涂片檢查，呈現(xiàn)不規(guī)則動情周期的小鼠為自然更年期小鼠。

1.2.2 取穴及分組

1.2.2.1 取穴：百會、關(guān)元等穴。參照林文注主編《實驗針灸學(xué)》［2］穴位圖譜定位。

1.2.2.2 分組：雌性小鼠56只，隨機分7組，每組各8只。分別為自然組：將小鼠從購買時起，空養(yǎng)至10、12、14、16月齡后分別取材，分為自然10月齡組、自然12月齡組、自然14月齡組、自然16月齡組。壯醫(yī)刺血組：分別從小鼠10月齡開始，取小鼠百會、關(guān)元等穴位進行刺血，持續(xù)8周（2個月，從10月齡到12月齡），并于進入更年期的12、14、16月齡后分別取材。分別為壯醫(yī)刺血12月齡組、壯醫(yī)刺血14月齡組、壯醫(yī)刺血16月齡組。

1.2.3 壯醫(yī)刺血方法

取穴百會、關(guān)元等，常規(guī)消毒后用淺刺針點刺擠壓放血1滴/穴。每周2次，共8周。自然組與壯醫(yī)刺血組同步，以手抓放小鼠，每周2次，共8周。

1.2.4 取材

各組小鼠斷頭取血，胸腺、脾臟。

1.2.5 檢測指標(biāo)及方法

1.2.5.1 行為學(xué)

①一般狀況：整體精神狀態(tài)、活動度、毛色、飲食等。

②體重：分別于造模前、治療后稱量小鼠體重并作記錄。

1.2.5.2 觀察指標(biāo) 血清IL－2水平、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)。

①血清IL－2水平測定胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù) 斷頭取靜脈血2ml，取血2m l置于普通試管內(nèi)，于4℃靜置凝固后，低溫離心3500r/min，15min，分離血清，－20℃保存待測。采用雙抗體夾心ELISA法測定，測定方法嚴格按試劑盒說明書操作程序操作。

②胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù) 動物處死，將胸腺、脾臟取出，剝?nèi)ブ車街慕M織，在電子分析天平上稱取濕重，按如下公式計算胸腺、脾臟指數(shù)：

胸腺指數(shù)＝胸腺重量（g）/體重（kg），結(jié)果以（% 0）表示。

脾臟指數(shù)＝脾臟重量（g）/體重（kg），結(jié)果以（% 0）表示。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)

2.1.1 一般狀況 自然組小鼠在造模期間精神萎靡，活動減少，皮毛色澤較晦暗，毛發(fā)略顯凌亂，飲食明顯減少。

壯醫(yī)刺血后，小鼠活動、飲食增加，皮毛色澤及凌亂程度有改善，機體的整體狀況改善。

2.1.2 體重增長情況 自然組小鼠隨月齡增長體重增長加快，與自然10月齡組小鼠比較，自然12、14、16月齡組體重明顯上升，統(tǒng)計學(xué)比較差異有非常顯著意義（P＜0.01）。

壯醫(yī)刺血治療后，壯醫(yī)刺血組與同齡自然組小鼠比較，體重增長百分率明顯下降，統(tǒng)計學(xué)比較差異有顯著意義（P＜0.05，P＜0.01）。

2.2 免疫指標(biāo)的變化

2.2.1 胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù) 胸腺指數(shù)自然組內(nèi)比較，與自然10月齡組比較，自然12、14、16月齡組小鼠胸腺指數(shù)呈逐步下降趨勢，但四組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；壯醫(yī)刺血治療后，壯醫(yī)刺血14月齡組胸腺指數(shù)較12月齡組顯著上升，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與同齡自然組比較，壯醫(yī)刺血14月齡組顯著上升，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），壯醫(yī)刺血12、16月齡組呈上升趨勢，統(tǒng)計學(xué)比較差異無顯著意義（P＞0.05）。

自然組小鼠脾臟指數(shù)隨月齡增長呈下降趨勢，各月齡組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F＝13.1652，P＜0.01）。壯醫(yī)刺血組各月齡組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），與同齡自然組比較，壯醫(yī)刺血12、14、16月齡組均呈上升趨勢，其中14、16月齡的壯醫(yī)刺血組與自然組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01；P＜0.05）。見表1。

表1 壯醫(yī)刺血前后小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)（g/kg）（±s）

表1 壯醫(yī)刺血前后小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)（g/kg）（±s）

注：與自然10月齡組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與同齡自然組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

胸腺指數(shù) 脾臟指數(shù)組別 n自然組 壯醫(yī)刺血組 自然組 壯醫(yī)刺血組10月齡組8 1.21±0.43 8.20±1.13 12月齡組 8 1.07±0.33 1.12±0.33 7.40±0.81 7.87±1.14 14月齡組 8 1.05±0.25 1.56±0.37＃6.11±0.80*7.67±0.66＃＃16月齡組 8 0.90±0.36 0.99±0.26 5.73±0.78**7.91±2.20＃

2.2.2 血清IL－2含量 與自然10月齡組比較，自然12、14月齡組均呈下降趨勢，其中自然12月齡組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t＝0.0040，P＜0.01）；自然16月齡組呈上升趨勢，但兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05）。壯醫(yī)刺血治療后，14、16月齡組與自然10月齡組比較呈上升趨勢；與同齡自然組比較，刺血14月齡組顯著上升，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），自然16月齡組均呈上升趨勢，但兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 壯醫(yī)刺血前后小鼠血清IL－2含量（ng/mL）（±s）

表2 壯醫(yī)刺血前后小鼠血清IL－2含量（ng/mL）（±s）

注：與同齡自然組比較，＃P＜0.05。

自然組 壯醫(yī)刺血組10月齡組組別 n 8 4062.00±667.93 12月齡組 8 2986.03±579.31 3704.16±558.59 14月齡組 8 3862.93±379.06 4795.91±1029.93＃16月齡組8 4131.64±247.22 4386.23±547.75

3 討論

壯醫(yī)刺血療法是壯族民間常用的一種外治法，通過刺血的針具刺人體的一定穴位、病灶處、病理反應(yīng)點或淺表血絡(luò)，運用擠壓或拔罐等方法放出適量血液，從而達到治病目的。壯醫(yī)認為百會和關(guān)元穴具有補益精血、強壯根本、疏調(diào)三道兩路的功能，是常用的保健強壯要穴。壯醫(yī)刺血療法通過刺激百會、關(guān)元穴微血管管壁的神經(jīng)，加強微血管的調(diào)節(jié)作用而間接地改善微循環(huán)功能，繼而改善機體臟腑組織器官的功能，提高機體的免疫機能，增強抗應(yīng)激能力［3］，均為傳統(tǒng)的強壯保健要穴。

本實驗結(jié)果顯示，行為學(xué)方面，自然組小鼠在進入更年后精神萎靡，活動減少，皮毛色澤較晦暗，毛發(fā)略顯凌亂，飲食明顯減少，與刺血組比較體重增長較快。免疫系統(tǒng)方面，自然更年期小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、血清IL－2水平隨月齡呈下降趨勢，其中脾臟指數(shù)下降明顯（P＜0.01）。壯醫(yī)刺血治療后，刺血16月齡組胸腺指數(shù)與同齡自然組比較顯著上升（P＜0.01）；刺血14、16月齡組脾臟指數(shù)與同齡自然組比較顯著上升（P＜0.01，P＜0.05）；血清IL－2水平與同齡自然組比較，刺血14月齡組呈上升趨勢（P＞0.05），刺血16月齡組明顯上升（P＜0.01）。研究說明壯醫(yī)刺血療法可良性調(diào)節(jié)自然更年期小鼠的免疫功能，且對不同月齡段免疫指標(biāo)的影響具有不同特點，對血清IL－2的影響主要是調(diào)動了機體的自穩(wěn)機制，使紊亂的狀態(tài)趨于平穩(wěn)，表現(xiàn)為和緩、持久的遠效應(yīng)。

［1］徐淑云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學(xué) ［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1538－1539，826－627.

［2］林文注，王佩.實驗針灸學(xué)［M］.上海：上海科技出版社，1999.

［3］呂琳.壯醫(yī)刺血療法技術(shù)操作規(guī)范與應(yīng)用研究 ［M］.南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2007.

R29

A

1007－8517（2013）06－0006－02

2013.01.26）

廣西自然科學(xué)基金青年基金項目（合同編號：2010GXNSFB013058）。

曾翠瓊，女，漢族，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師，主要從事中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥研究。