于海燕 何粵紅 胡冬竹 胥小葉

云南省精神病醫(yī)院藥劑科，云南 昆明 650224

RP－HPLC法同時測定人體中富馬酸喹硫平和氯氮平濃度

于海燕 何粵紅 胡冬竹 胥小葉

云南省精神病醫(yī)院藥劑科，云南 昆明 650224

目的：建立同時測定人血漿中喹硫平與氯氮平的反相高效液相色譜法。方法：以Agilent Herpesil ODS C18柱（250mm× 4mm，5μm）為色譜柱，流動相為甲醇∶水（70∶30），每250ml水中加入0.55ml三乙胺；流速1.2ml·min－1；柱溫40℃；檢測波長254nm。以乙酸乙酯為提取劑。結(jié)果：喹硫平在40～800ng·ml－1、氯氮平在20～1000ng·ml－1濃度范圍內(nèi)，峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系；喹硫平、氯氮平的高、中、低濃度相對平均回收率分別為101.86%、97.35%、101.56%和98.65%、97.69%、102.06%；日內(nèi)、日間RSD均＜9%（n＝5）。分析方法的檢測限10 ng·ml－1；喹硫平標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Y＝0.20665388X＋2.186141，r＝0.99479（n＝9），氯氮平的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y＝0.31172966X－3.215692，r＝0.99795（n＝9）。結(jié)論：該方法靈敏、準(zhǔn)確、簡單、快捷，可用于臨床喹硫平與氯氮平的血漿濃度監(jiān)測和藥物動力學(xué)研究。

喹硫平；氯氮平；血藥濃度；高效液相色譜；反相

富馬酸喹硫平（Quetiapine Fumarate），化學(xué)名稱11－｛4－［2－（2－羥基乙氧基）乙基］－1－哌嗪基｝二苯駢［b，f］［1，4］硫氮雜卓半富馬酸鹽，屬新型抗精神病藥，為腦內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)受體拮抗劑，喹硫平作用機理尚未明確，可能是通過拮抗中樞D2受體和5－HT2受體來發(fā)揮其抗精神分裂癥作用的。該藥在治療劑量范圍內(nèi)使用安全，不良反應(yīng)少。在臨床用藥范圍內(nèi)，血漿濃度與劑量呈線性關(guān)系。

氯氮平（Clozapine），化學(xué)名稱8－氯－11－（4－甲基－1－哌嗪基）－5H－二苯并［b，e］二氮雜卓，為一種非典型抗精神病藥物，較少引起錐體外系反應(yīng)。對腦內(nèi)5－羥色胺（5－HT2A）受體和多巴胺受體具有阻滯作用。

臨床上，喹硫平和氯氮平常聯(lián)合用于治療難治性的精神分裂癥患者，筆者參考相關(guān)文獻，建立了一種簡單、快速同時測定人血漿中喹硫平和氯氮平的反相高效液相色譜法，并應(yīng)用于臨床血藥濃度檢測。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（Agilent 1100，包括G1379A在線脫氣機、G1311A四元泵、G1313A自動進樣器、G1316A可調(diào)柱溫恒溫箱、G1314A可變波長紫外檢測器和Agilent色譜化學(xué)工作站），快速混勻器（XK96－A，姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司），電子分析天平（BP61S，德國賽多利斯股份有限公司），小型通用離心機（TGL－16GB，上海安亭科學(xué)儀器廠），真空干燥箱（ZKF040，上海實驗儀器廠有限公司）。

1.2 藥品和試劑 喹硫平與氯氮平對照品（均由湖南洞庭藥業(yè)股份有限公司提供，含量均＞99%），甲醇（Fisher Scientific公司，色譜純），三乙胺（天津市光復(fù)精細化工研究所，分析純），乙酸乙酯（天津市瑞金特化學(xué)品有限公司，分析純），水為哇哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的配制 精密稱取喹硫平對照品與氯氮平對照品各10.0mg，分別置于2個25ml量瓶，加甲醇溶解，并定容至25ml，置冰箱4℃保存。臨用時用甲醇稀釋成所需濃度的喹硫平與氯氮平對照品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱：Agilent Herpesil ODS C18柱（250mm×4mm，5μl）；流動相：甲醇∶水（70∶30），每250ml水中加入0.55ml三乙胺；流速1.2ml·min－1；柱溫40℃；檢測波長254nm；靈敏度AUFS為0.01。

2.3 樣品處理方法 取含喹硫平與氯氮平的血漿樣品0.4ml，加NaOH液0.1ml，快速振蕩數(shù)秒，加入乙酸乙酯1.2ml，密塞，渦旋振蕩3min，3600r·min－1離心10min。吸取上清液，32℃真空干燥至干。進樣前加入甲醇40μl快速振蕩數(shù)秒溶解殘渣，吸取15μl進樣。

2.4 色譜分離情況 在本實驗條件下，空白血漿、喹硫平與氯氮平對照品血漿，以及精神患者服藥后的血漿樣品，經(jīng)高效液相色譜分析法測定，得到的色譜圖見圖1。由圖1可知，喹硫平與氯氮平的色譜峰能夠完全分離。喹硫平與氯氮平的保留時間為4.70min和5.50min。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 在9個具塞的離心管中分別加入不同濃度、相同體積的喹硫平和氯氮平對照品溶液，再加空白血漿0.4m l，振蕩數(shù)秒，使血漿喹硫平濃度分別為40.0、100.0、200.0、300.0、400.0、500.0、600.0、700.0、800.0ng·ml－1，氯氮平為20.0、100.0、200.0、300.0、400.0、500.0、600.0、800.0、1000.0 ng·ml－1。然后按照“2.3”項處理后，經(jīng)高效液相色譜分析，測得喹硫平與氯氮平的峰面積（Y）分別對應(yīng)其濃度（X：ng·m l－1）進行線性回歸（n＝9），得到喹硫平40～800 ng·m l－1，氯氮平20～1000ng·ml－1標(biāo)準(zhǔn)曲線。Y＝0.20665388X＋2.186141，r＝0.99479（n＝9），氯氮平的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y＝0.31172966X－3.215692，r＝0.99795（n＝9）。當(dāng)信噪比（S/N）＝3時，喹硫平與氯氮平的檢測定量下限可達到10ng·ml－1。

2.6 回收率與精密度實驗 取喹硫平濃度為40.0、400.0、700.0 ng·ml－1的含藥血漿樣品，氯氮平濃度為20.0、400.0、800.0 ng·ml－1的含藥血漿樣品，經(jīng)色譜分析。同時在1天內(nèi)重復(fù)5次和1周內(nèi)重復(fù)5次測定濃度，計算日內(nèi)、日間誤差、回收率（見表1）。結(jié)果表明，該方法符合生物樣品分析要求。

表1 日內(nèi)、日間精密度、方法回收率實驗（n＝5）

2.7 樣品的穩(wěn)定性實驗 按照“2.5項”的方法分別配置40.0、400.0、700.0 ng·ml－1喹硫平和20.0、400.0、800.0 ng·m l－1氯氮平血漿樣品，3組共18個樣品（雙樣），分別在室溫（17～23℃）放置0，24h和－20℃凍存1d，以及－20℃凍存1，4周，分別進行色譜測定，未見凍存樣品的藥物降解，統(tǒng)計結(jié)果顯示RSD均＜9%。

2.8 樣品的質(zhì)量控制 按“2.5項”方法分別配制40.0、400.0、700.0 ng·ml－1喹硫平和20.0、400.0、800.0 ng· ml－1氯氮平60個血漿樣品（一式12份）。置－20℃冰箱凍存?zhèn)溆?，為質(zhì)控樣品。每次檢測血樣時同時檢測質(zhì)控樣品，如果相對回收率均在85%～115%之內(nèi)，即可認(rèn)為儀器檢測正常，操作人員操作正常，否則及時檢查整個操作過程及儀器原因。

2.9 患者血樣測定 1例男性精神病患者，口服氯氮平（江蘇恩華制藥股份有限公司，批號：20120203，規(guī)格：50mg/片）150mg·d－1和喹硫平（湖南洞庭制藥股份有限公司，批號：B120603，規(guī)格：200mg/片）800mg·d－1。2周后早晨服藥前空腹采血檢測其血漿藥物濃度。結(jié)果喹硫平為285.32 ng.ml－1，氯氮平為110.24 ng.ml－1。

3 討論

喹硫平與氯氮平的化學(xué)結(jié)構(gòu)比較相似，都有二個苯環(huán)，故都具有明顯的紫外吸收。為了減少溶劑峰和其它雜質(zhì)的干擾，選擇254nm為檢測波長。喹硫平的血藥濃度檢測方法文獻已有報道，本實驗采用高效液相色譜法同時測定喹硫平與氯氮平的血藥濃度方法，具有操作簡單、成本低、精密度和回收率高等特點、適用于化學(xué)藥物分析和臨床藥動學(xué)研究，結(jié)果可靠。

以甲醇和水為流動相，有嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象，故加入一定量的封端試劑三乙胺可以改變拖尾現(xiàn)象，改善峰形。比較甲醇和水不同配比，結(jié)果甲醇∶水（70∶30）時，樣品保留時間理想，喹硫平與氯氮平可以較好的分離。

本實驗過程中筆者分別使用乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、正己烷為提取劑，乙酸乙酯的提取率最高，所取血漿僅為0.4ml，進樣量15μl便達到實驗要求，提高了靈敏度減少了樣品雜質(zhì)的干擾，保證色譜柱能夠進行大量樣品的連續(xù)分析。

精神科藥物存在治療窗較窄、患者服藥后個體差異大、不良反應(yīng)較大等特點，因此對精神科藥物進行治療藥物監(jiān)測具有積極的臨床意義，本實驗建立人血漿中喹硫平與氯氮平同時測定的方法，用于臨床治療藥物監(jiān)測，達到臨床監(jiān)測的要求。

［1］陳彥方，顧牛范.新編臨床精神藥物手冊［M］.濟南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1998：10－15.

［2］趙敏，陳清霞，朱軍，等.高效液相色譜法測定人血漿中喹硫平濃度［J］.海峽藥學(xué)，2010，22（2）：168－170.

［3］傅崇銘，張桂華，唐茂芹，等.精神分裂癥患者富馬酸喹硫平血藥濃度測定及其臨床效應(yīng)的相關(guān)性［J］.中國藥學(xué)雜志，2004，12（39）：928－930.

［4］林治光，翁毅仁，莊冬梅，等.RP－HPLC法測定人體中富馬酸喹硫平血藥濃度［J］.四川精神衛(wèi)生，2003，16（3）：140－142.

Concentration Determination of Quetiapine and Clozapine in Human Plasma by RP－HPLC

YU Hai－yan，HE Yue－h(huán)ong，HU Dong－zhu，XU Xiao－ye
（Yunnan Mental Hospital，Kunming City，Yunnan Province，China）

Objective：To estabilish a method for determining the concertration of Quetiapine and Clozapine in human plasma by RP－HPLC.Methods：The drug from plasma was analyzed by a reverse phase HPLC system with a Agilent Herpesil ODS C18column（250mm×4mm，5μm），methanol－H2O（0.55mlTEA＋250mlH2O）（70∶30）were used as mobile phase；the flow rate was 1.2ml· min－1；the detection wavelength was at254nm；Ethyl acetate was used as extracting solvent.Results：The relation of peak area and concentration showed linear in the range of40－800ng·ml－1for Quetiapine，20－1000ng·ml－1for Clozapine，respectively.The average recoveries of Quetiapine and Clozapine at high，middle and low concentrations were 101.86%，97.35%，101.56%and 98.65%，97.69%，102.06%，respectively.The intra－day and inter－day variations（RSD）were less than 9%（n＝5）.The minimum detectable concentration was 10.0 ng·ml－1The regression equation of Quetiapine was Y＝0.20665388X＋2.186141，r＝0.99479（n＝9），and Clozapine was Y＝0.31172966X－3.215692，r＝0.99795（n＝9），respectively.Conclusion The method is sensitive，accurate，simple and quick，which can be used for clinical drug monitoring and pharmacokinetic studies of Quetiapine and Clozapine.

Quetiapine，Clozapine；Plasma concentration；RP－HPLC

R914

A

1007－8517（2013）03－0043－02

2013.01.05）