徐慶儀

（安徽省六安市中醫(yī)院藥劑科，六安237000）

養(yǎng)陰清咽顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

徐慶儀

（安徽省六安市中醫(yī)院藥劑科，六安237000）

目的研究養(yǎng)陰清咽顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對(duì)顆粒中玄參、桔梗進(jìn)行定性鑒別，并用高效液相色譜法對(duì)顆粒中的金銀花進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)論薄層色譜分離清晰，陰性無(wú)干擾。綠原酸在0.372～3.348μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。平均加樣回收率為99.00%，RSD 1.62%（n=6）。結(jié)論該方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于該顆粒的質(zhì)量控制。

養(yǎng)陰清咽顆粒；薄層色譜法；綠原酸；HPLC

養(yǎng)陰清咽顆粒是我院的醫(yī)院制劑，由金銀花、蘆根、玄參、桔梗、生地黃、甘草等組成，適用于鼻咽癌及其他頭頸部惡性腫瘤、極性放射性口腔、咽部黏膜損傷，表現(xiàn)為熱毒熾盛，陰津耗傷所致陰虛熱毒，或毒傷血絡(luò)，甚則熱壅肉腐等證。本實(shí)驗(yàn)對(duì)養(yǎng)陰清咽顆粒中的組方藥材玄參、桔梗建立了專屬性強(qiáng)的薄層鑒別方法，對(duì)君藥金銀花的主要有效成分綠原酸進(jìn)行了定量控制，建立了養(yǎng)陰清咽顆粒的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)），紫

外檢測(cè)器，Sartorius BT125D電子天平，KQ5200DA超聲儀，CAMAG紫外觀察箱，YOKO-XR薄層加熱器。

玄參對(duì)照藥材（121008-200505），桔梗對(duì)照藥材（121028-200608），甲醇（色譜純），水為雙重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 玄參的薄層鑒別［1］取本品5g，加甲醇25mL，超聲30min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次30mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?mL，作為供試品溶液。另取不含玄參的陰性樣品同法制得陰性對(duì)照品溶液。再取玄參對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)（中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB），吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（12∶4∶1）的下層溶液為展開(kāi)劑，置用展開(kāi)劑預(yù)飽和15分鐘的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品對(duì)應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾。

2.2 桔梗的薄層鑒別［2］取本品5g，加7%硫酸乙醇-水（1∶3）的混合溶液20mL，加熱回流3h，放冷，過(guò)濾，濾液用三氯甲烷提取兩次，每次30m L，合并三氯甲烷液，加水洗滌2次，每次30mL，棄去洗液，三氯甲烷液用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取不含桔梗的陰性樣品同法制得陰性對(duì)照品溶液。再取桔梗對(duì)照藥材1g，同法制得對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)（中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB），吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚（1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材對(duì)應(yīng)位置上，顯相同顏色的黃色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾。

圖1 玄參薄層鑒別圖1.對(duì)照品溶液 2.供試品溶液3.陰性對(duì)照品溶液

圖2 桔梗薄層鑒別圖 1.對(duì)照藥材溶液2.供試品溶液3.陰性對(duì)照品溶液

2.3 HPLC測(cè)定綠原酸［3］

2.3.1 色譜條件色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（13∶87）；流速：1.0mL／min；檢測(cè)；波長(zhǎng)：327nm；柱溫：25℃。

2.3.2 溶液制備稱取本品5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇40mL，超聲30min，過(guò)濾，濾液用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得供試品溶液。稱取處方中除金銀花外的藥材，按制備工藝制得空白樣品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，用50%甲醇制成1mL含0.186mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察

2.3.3.1 陰性干擾試驗(yàn)吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10μL，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果供試品溶液與對(duì)照品溶液在相同時(shí)間處有相同的色譜峰出現(xiàn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾。見(jiàn)圖3。

圖3 養(yǎng)陰清咽顆粒色譜A對(duì)照品；B供試品；C陰性

2.3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備綠原酸對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣2μL、4μL、8μL、12μL、16μL、18μL，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），以綠原酸的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=2863X+ 75.232（r=0.9999）。結(jié)果表明，綠原酸進(jìn)樣量在0.372～3.348μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.3.3.3 精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μL連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果對(duì)照品溶液的RSD= 0.05%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液10μL分別于0h、2h、4h、8h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果供試品溶液的RSD =1.35%（n=4），表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品6份，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法處理，測(cè)定，綠原酸含量為1.574mg／g，RSD為1.95%。

2.3.3.6 加樣回收試驗(yàn)精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加入到已知含量的6份樣品中，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

回收率%=（測(cè)得量-樣品含量）／對(duì)照品加入量*%

2.4 樣品測(cè)定結(jié)果取不同批號(hào)的樣品，分別按前述供試品溶液制備法及色譜條件，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 綠原酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6，%）

表2 養(yǎng)陰清咽顆粒中綠原酸含量測(cè)定（n，%）

3 討論

在本制劑的薄層鑒別試驗(yàn)摸索中，對(duì)方中的其他藥味均進(jìn)行了試驗(yàn)條件摸索，但最終未能達(dá)到符合要求的結(jié)果，故只將玄參和桔梗列入定性鑒別中，實(shí)驗(yàn)證明，玄參和桔梗薄層鑒別的斑點(diǎn)清晰，重復(fù)性良好。

銀花為方中君藥，為藥典收載品種，成分清楚，其測(cè)定方法成熟，且其主要成分綠原酸的含量較高，并為處方中主要藥效成分。因此對(duì)其確定為含量測(cè)定項(xiàng)，能有效地控制本顆粒的質(zhì)量。在對(duì)制劑中綠原酸含量進(jìn)行測(cè)定時(shí)分別采用了不同提取溶劑，最終發(fā)現(xiàn)采用50%甲醇進(jìn)行超聲提取，較為完全。由于綠原酸的性質(zhì)不穩(wěn)定，處理的樣品需置于棕色瓶，為確保含量測(cè)定的準(zhǔn)確性，處理的樣品應(yīng)盡量在8h內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。

［1］洛英霞.健心顆粒中丹參、黃芪、甘草、玄參的薄層色譜鑒別［J］．實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2006，（1）：91．

［2］鐘永康．桔梗、連翹、五倍子薄層色譜鑒別方法的研究與改進(jìn)［J］．中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2007，6（1）：13-14．

［3］胡生俊，徐岳鑫，董賽文，等．高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方金銀花顆粒中綠原酸含量［J］．中國(guó)藥業(yè)，2011，20（3）：23．

Quality Standard for Yangyinqingyan Granules

Xu Qingyi
（Pharmacy Department,TCM Hospital of Liuan City,Liuan 237000,China）

ObjectiveTo establish the quality standard for Yangyinqingyan Granules．MethodsPlatycodonis Radix and Scrophulariae Radix were identified by TLC．The content of chlorogenic acid was determinated by HPLC．ResultsThe established identification methods were proper and reflecting a good specificity．The experiment showed good linear relationship at the ranges of 0.372～3.348μg for chlorogenic acid．The average recovery rare of chlorogenic acid was 99.00%，RSD was 1.62%（n=6）.ConclusionThe established methods are not only practical but capable of effectively controlling the quality of Yangyinqingyan Granules．

：Yangyinqingyan Granules；TLC；Chlorogenic acid；HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.10.103

1672-2779（2013）-10-0156-03

??韓世輝

2013-04-26）