楊秉潛

廣東省梅州市人民醫(yī)院，廣東 梅州 514000

金屬蛋白酶3、抗環(huán)瓜氨酸肽和類風(fēng)濕因子分型對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床檢測(cè)的應(yīng)用

楊秉潛

廣東省梅州市人民醫(yī)院，廣東 梅州 514000

目的：基質(zhì)金屬蛋白酶－3（MPP－3）、抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體、類風(fēng)濕因子分型 （RF）檢測(cè)對(duì)于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者疾病進(jìn)程的臨床預(yù)測(cè)價(jià)值。方法：采用ELISA檢測(cè)法，測(cè)定血清MMP－3、抗CCP抗體、RF lgM、RF lgG、RF lgA的含量。結(jié)果：（1）MMP－3、抗CCP抗體及RF lgM、RF lgG、RF lgA在健康對(duì)照組均有顯著性意義（P＜0.01），抗CCP、RF在RA各組血清水平均高于非RA及對(duì)照組（P＜0.01）；MMP－3在RA組具有較高含量，顯著高于非RA組、健康對(duì)照（P＜0.01）；在RA1組與RA2組中水平比較差別明顯（P＜0.01），在RA2組與RA3組中水平比較差別明顯（P＜0.01）。（2）RA組中MPP－3、抗CCP抗體、RF lgM＋RF lgG＋RF lgA的敏感度分別為65.3%，68.7%，71.8%。（3）MMP－3、抗CCP與RF lgM＋RF lgG＋RF lgA在RA組中特異性分別為70.2%，95.1%，83.1%。（4）五項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)敏感度為32.8%，聯(lián)合特異度為100%。結(jié)論：聯(lián)合檢測(cè)五項(xiàng)指標(biāo)可降低RA的漏診率。動(dòng)態(tài)聯(lián)合測(cè)定抗CCP抗體、RF lgM、RF lgG、RF lgA、MMP－3能更有效地及時(shí)監(jiān)測(cè)RA的疾病進(jìn)展，對(duì)指導(dǎo)臨床診治及干預(yù)有積極意義。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；基質(zhì)金屬蛋白酶－3；抗環(huán)瓜氨酸肽抗體；類風(fēng)濕因子分型

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以對(duì)稱性、多關(guān)節(jié)炎癥為主要表現(xiàn)的慢性、全身性自身免疫性疾病。RA的靶器官主要是關(guān)節(jié)滑膜，病理改變是慢性滑膜炎，出現(xiàn)滑膜炎癥、增厚、血管翳形成、軟骨及軟骨下骨質(zhì)破壞，終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及強(qiáng)直而致殘。其中，軟骨和骨的進(jìn)行性、不可逆性破壞是一個(gè)不可忽視的特點(diǎn)，造成RA關(guān)節(jié)破壞的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明［1］。所以，對(duì)于RA早期診斷和RA治療過程有效監(jiān)測(cè)尤為重要。

試驗(yàn)通過檢測(cè)80例確診RA患者不同時(shí)期血液中抗環(huán)瓜氨酸肽（anticycfic citrullinated peptide，anti－CCP）抗體、類風(fēng)濕因子分型（Rheumatoid factor lgM、lgG、lgA）以及導(dǎo)致軟骨降解的最重要蛋白酶［2］基質(zhì)金屬蛋白酶3（matrix metalloproteinasis－3，MMP－3）等指標(biāo)的含量變化，綜合分析它們?cè)赗A不同時(shí)期臨床應(yīng)用的作用和關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 RA病例均來自本院免疫風(fēng)濕科門診及住院病人，其中男性23例、女性57例，年齡在17～79歲、平均年齡49±11歲，其診斷均符合ACR/EULAR2010年RA的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，并按病程時(shí)期分RA1組 （初次診斷）、RA2組（用藥治療3個(gè)月）、RA3組（用藥治療6個(gè)月）。同時(shí)選擇41例非RA的其他免疫系統(tǒng)疾病，其中男17例，女24例，年齡15～67歲，平均年齡42±9歲；疾病包括骨關(guān)節(jié)炎11例、系統(tǒng)性紅斑狼瘡7例、原發(fā)性干燥綜合癥12例、多發(fā)性肌炎3例、系統(tǒng)性硬化癥8例，且所有患者均符合相應(yīng)的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常對(duì)照組40例，均來自健康體檢者的血清，其中男性17例、女性23例，年齡與RA組結(jié)構(gòu)相配，均無(wú)肝、腎功能損害、自身免疫性疾病、傳染病感染及腫瘤。

1.2 方法 空腹采血，3000r/min離心分離血清，采用ELSIA法定量檢測(cè)MMP－3、抗CCP、RF lgM、RF lgG、RF lgA。

1.3 儀器與試劑 雷勃MK3酶標(biāo)儀，MMP－3、CCP、RF lgM、RF lgG、RF lgA檢測(cè)試劑由德國(guó)AESKU公司提供。MMP－3正常女性濃度范圍為：18 ng/ml－60 ng/ml；正常男性濃度范圍為：24 ng/m l－120 ng/ml；CCP、RF lgM、RF lgG、RF lgA結(jié)果判斷均是＞18U/m l為陽(yáng)性，以上試劑均配有標(biāo)準(zhǔn)品與質(zhì)控品。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)均用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組間率比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 RA組與各對(duì)照組血清MMP－3、抗CCP、RF分型濃度比較 由表1可知，抗CCP、RF在RA各組血清水平均高于非RA及對(duì)照組（P＜0.01），MMP－3、RF在非RA組中水平與正常組比較，（P＜0.01）差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，抗CCP在非RA

組與正常組差別無(wú)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；MMP－3在RA組具有較高含量，顯著高于非RA組、健康對(duì)照（P＜0.01）；在RA1組與RA2組中水平比較差別明顯（P＜0.01），在RA2組與RA3組中水平比較差別明顯（P＜0.01）。

表1 RA組和對(duì)照組血清MMP－3、抗CCP、RF lgM、RF lgG、RF lgA的含量

2.2 四種血清標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)檢測(cè)RA的影響 由表2可知，RA組中MPP－3、抗CCP抗體、RF lgM＋RF lgG＋RF lgA的敏感度分別為65.3%，68.7%，71.8%；MMP－3、抗CCP與RF lgM＋RF lgG＋RF lgA在RA組中特異性分別為70.2%，95.1%，83.1%。

表2 血清MMP－3、抗CCP、RF對(duì)檢測(cè)RA的影響（%）

2.3 五種血清標(biāo)準(zhǔn)物聯(lián)合對(duì)檢測(cè)RA的影響 由表3可見，CCP＋MMP－3二聯(lián)、RF分型三聯(lián)、CCP＋RF分型四聯(lián)、CCP＋MMP－3＋RF隨著類風(fēng)濕因子分型物質(zhì)種類的增多，敏感性由58.9%降低到32.8%，但特異性則相反，表現(xiàn)為有所提高。

表3 RA患者M(jìn)MP－3、抗－CCP與RF聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果（%）

3 討論

RA患者早期臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，若不及時(shí)診治，可導(dǎo)致軟骨和骨破壞，造成不可逆的骨關(guān)節(jié)破壞。RA病情發(fā)展最快階段是在發(fā)病的第一年，此期存在一個(gè)短暫的治療窗口，這期間RA的炎性是可逆的。因此，只有早期診斷和早期治療才能減少致殘。Fiedomzyk［4］發(fā)現(xiàn)早期RA患者治療前血清MMP－3水平較骨性關(guān)節(jié)炎及正常人明顯增高；Hisashi Yamanaka［5］發(fā)現(xiàn)MMP－3增高的早期RA患者，在6～12個(gè)月內(nèi)可出現(xiàn)骨關(guān)節(jié)破壞。Green［6］發(fā)現(xiàn)未接受治療的早期RA患者，MMP－3水平不僅和疾病活動(dòng)性相關(guān)，還參與RA的發(fā)病機(jī)制，與RA關(guān)節(jié)破壞密切相關(guān)。Ribbens發(fā)現(xiàn)［7］關(guān)節(jié)液中MMP－3的水平在具有明顯破壞病變的RA患者與無(wú)關(guān)節(jié)破壞的RA及ReA患者之間無(wú)顯著差別，但是關(guān)節(jié)液中MMP－3的水平與其它的RA活動(dòng)期的炎癥標(biāo)志物如TNF－α、IL－6、ESR、CRP具有顯著相關(guān)性。梁柳琴［8］采用敏感的酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)RA患者血清MMP－3水平，發(fā)現(xiàn)RA患者血清MMP－3水平顯著升高，它可作為疾病活動(dòng)性指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)表明RA治療前MMP－3水平高于非RA組及健康對(duì)照組（P＜0.01），并隨著對(duì)RA患者治療，血清中MMP－3水平降低（P＜0.01）?？笴CP抗體是人工合成的環(huán)化瓜氨酸肽，在RA診斷中的應(yīng)用價(jià)值已得到國(guó)內(nèi)外專家的肯定［9－10］。本實(shí)驗(yàn)抗CCP抗體對(duì)早期RA的診斷敏感性為68.7%，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MMP－3、抗CCP抗體、RF lgM、RF lgG、RF lgA可出現(xiàn)在RA的病程各各個(gè)時(shí)期，且均高于正常對(duì)照組，有顯著性差異（P＜0.01），RA中晚期的血清水平較早期及對(duì)照組均高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），提示三者可能與RA的病程有一定相關(guān)性，動(dòng)態(tài)檢測(cè)可預(yù)示RA疾病的發(fā)展。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)抗CCP抗體和RF分型，能提高RA診斷的準(zhǔn)確性，減少漏診，動(dòng)態(tài)聯(lián)合檢測(cè)，可有效監(jiān)測(cè)RA病情進(jìn)展及評(píng)價(jià)臨床療效。監(jiān)測(cè)血液中的MMP－3的含量，有可能做到早期診斷、及時(shí)治療，對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療及預(yù)后具有較高的評(píng)估意義，防止MMP－3等對(duì)關(guān)節(jié)造成的不可逆破壞。說明MMP－3、抗CCP抗體、RF分型聯(lián)合檢測(cè)可作為RA臨床檢驗(yàn)的指標(biāo)。

［1］Peake NJ，Khawaja K，Myers A，et a1.Levels of matrix meta Uoproteinuse（MMP）－1 in paired ser－8 and synovial fuids of juvenile idiopathic arthritis patients：relationship to inflammatory activity，MMP－3 and tissueinhibitor of metalloproteinases－l in a longitudinal study［J］.Rheumatology，2005，44（11）：1383－1389.

［2］Markku H，Leila R，Jorm aM，et al.Increased type I collagen degradation correlates with disease severity in rheumatoid arthritis［J］.Ann Rheum Dis，1993，52（4）：866－869.

［3］Aletaha D，Neogi T，Silman AJ，etal.2010 rheumatoid arthritis classification criteria：all American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative initiative［J］.Ann Rheum Dis，2010，69（9）：1580－1583.

［4］Fiedorczyk M，Klimiuk PA，Sierakowski S，et al.Serum matrixmetalloproteinases and tissue inhibitors ofmatalloproteinases in patientswith early rheumatoid arthritis［J］.Rheumatol，2006，33（8）：1523－1529.

［5］Hisashi Y，Yuko M，Michi T，et al.Serum matrix metalloproteina－3 as a predictor of the degree of joint destruction during the six months after measurement in patients with early rheumatoid arthritis［J］.Arthritis Rheum，2000，52（4）：852－858.

［6］Green MJ，Gough AK，Devlin J，et al.Serum MMP－3 and MMP－1 and progression of joint damage in early rheumatoid arthritis［J］.Rheumatology，2003，42（1）：83－88.

［7］Ribbens C，Andre B，Kaye O，et a1.Synovial fluid matrix metaIloprotei-Base－3 levels are increased in inflantraatory arthritides whether erosiveor not［J］. Rheumatology（Oxford），2000，39（12）：1357－1365.

［8］梁柳琴，許韓師，楊岫巖，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清基質(zhì)金屬蛋白酶3檢測(cè)及其臨床意義［J］.中山大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，25（3）：128－13.

［9］Schellekens GA，Visser H，de Jong BA，et al.The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide［J］.Arthritis Rheum，2000，43（1）：155－163.

［10］趙金霞，王志敏，栗占國(guó).以抗環(huán)瓜氨酸肽抗體改進(jìn)對(duì)1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)關(guān)于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)的探討 ［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2009，13（4）：236－239.

Objective：Matrix metalloproteinase－3（MPP－3），anti－cyclic citrullinated peptide（CCP）antibodies，rheumatoid factor scores（RF）detection of clinical predictive value for rheumatoid arthritis（RA）patients with disease progression.Method：Using quantitative ELISA serum MMP－3、anti－CCP antibody RF lgM RF lgG、RF lgA.Results（1）MMP－3，anti－CCP antibodies and RF lgM RF lgG，RF lgA in the healthy control group were significantly significance（P＜0.01），resistance to the CCP and RF in RA serum water were higher than those in non－RA and the control group（P＜0.01）；MMP－3 has a higher content in the RA group was significantly higher than the non－RA group and healthy controls（P＜0.01）；RA1 RA2 group level comparison was significantly different（P＜0.01），in comparison with the level of RA3 group RA2 group was significantly different（P＜0.01）.（2）RA group MPP－3，anti－CCP antibodies，RF lgM＋RF lgG＋RF lgA sensitivity of65.3%，68.7%and 71.8%，respectively.（3）MMP－3，anti－CCP and RF lgM＋RF lgG＋RF lgA in the RA group specificity were 70.2%，95.1%，83.1%.（4）The five indicators of joint detection sensitivity of32.8%，joint specificity of100%.Conclusion：Combined detection of five indicators to reduce the rate of misdiagnosis of RA.Dynamic joint determination of anti－CCP antibodies，RF lgM，RF lgG RF lgA of MMP－3 can be more effective timely monitoring of disease progression in RA guiding clinical treatment and intervention.

rheumatoid arthritis；matrix metalloproteinase－3；anti－cyclic citrullinated peptide antibody；rheumatoid factor typing

R593.22

A

1007－8517（2013）12－0029－02

2013.04.13）