周玉霞　程櫟菁　張美鑫　翟立峰　洪霓　王國(guó)平　王利平

摘 要：【目的】為了對(duì)我國(guó)梨腐爛病病原菌進(jìn)行初步鑒定和序列分析，【方法】從我國(guó)15個(gè)?。ㄊ校├娈a(chǎn)區(qū)采集腐爛病樣品并觀察其田間危害癥狀，通過(guò)組織分離法分離獲得168份梨腐爛病菌分離株，從中選取72份進(jìn)行單孢純化，共獲得79份梨腐爛病菌純化分離株；觀察在PDA、25 ℃黑暗條件下病原菌菌落形態(tài)以及產(chǎn)孢體形態(tài)，并對(duì)其在梨枝條上產(chǎn)生的分生孢子器徒手切片置顯微鏡下觀察其結(jié)構(gòu)特征和分生孢子形態(tài)；采用菌絲塊接種法測(cè)定梨腐爛病菌在‘翠冠梨離體枝條上的致病力。對(duì)部分菌株rDNA-ITS進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序，利用BLAST軟件與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行序列相似性分析，并用MEGA 4.1和鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)?！窘Y(jié)果】根據(jù)梨腐爛病菌各分離株在PDA上的菌落形態(tài)特征可分為Ⅰ型和Ⅱ型兩種菌落類型，不同梨腐爛病菌分離株在PDA上產(chǎn)生多種類型的產(chǎn)孢體，不同梨腐爛病菌菌株在離體梨樹(shù)枝條上的致病力存在差異，我國(guó)梨腐爛病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率為99.98%～100%，與蘋(píng)果腐爛病菌分別聚在同一亞組的兩個(gè)分支。【結(jié)論】我國(guó)梨腐爛病病原菌存在不同的菌落類型，其rDNA-ITS核苷酸序列分析顯示均為V. mali var. pyri。

關(guān)鍵詞： 梨腐爛??； 蘋(píng)果腐爛??； rDNA-ITS； 致病力

中圖分類號(hào)：S661.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1009-9980？穴2013？雪01-0140-07

梨腐爛?。╒alsa canker of pear）又名爛皮病，主要危害梨樹(shù)的主枝和側(cè)枝，導(dǎo)致梨樹(shù)勢(shì)衰弱，果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)下降。該病具有發(fā)生區(qū)域廣、發(fā)病率高、難以控制的特點(diǎn)。在我國(guó)梨主產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，尤以新疆、西北、華北、東北等地發(fā)生嚴(yán)重[1]。發(fā)病嚴(yán)重的梨園，樹(shù)體病疤累累、枝干殘缺不全，造成大量死樹(shù)或毀園。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)梨腐爛病病原菌種類及其歸屬尚未十分明確，起初，我國(guó)學(xué)者根據(jù)病原菌的形態(tài)學(xué)特征鑒定為梨黑腐皮殼菌[Valsa ambiens （Pers.） Fr.][2-3]，后來(lái)通過(guò)比較其與蘋(píng)果腐爛病菌形態(tài)學(xué)性狀以及酯酶同工酶譜和致病性方面的異同，認(rèn)為梨腐爛病菌是蘋(píng)果黑腐皮殼梨變種（Valsa mali var. pyri）[4]。日本學(xué)者Kobavashi[5]認(rèn)為V. mali與V. ceratosperma是同一種菌的兩個(gè)異名。在很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，V. mali和V. ceratosperma 均被用作梨和蘋(píng)果腐爛病菌的名稱[6-9]，之后更多采用V. ceratosperma。王旭麗等[10]通過(guò)對(duì)病菌的ITS序列測(cè)定分析并結(jié)合培養(yǎng)特征鑒定認(rèn)為，梨腐爛病菌和蘋(píng)果腐爛病菌可統(tǒng)稱為V. ceratosperma。WANG等[11]認(rèn)為V. mali是引起我國(guó)梨腐爛病和蘋(píng)果腐爛病的主要病原菌，V. mali中又分為兩個(gè)變種，梨腐爛病菌為V. mali var. pyri，它既可以引起梨腐爛病也可以引起蘋(píng)果腐爛??；蘋(píng)果腐爛病菌為V. mali var. mali，它則主要是引起蘋(píng)果腐爛病。此外蘋(píng)果腐爛病的病原除了V. mali外，還發(fā)現(xiàn)少部分為V. malicola。

研究通過(guò)對(duì)我國(guó)梨產(chǎn)區(qū)梨腐爛病的調(diào)查、采集、分離獲得梨腐爛病菌分離株，對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)特性的觀察、致病力的鑒定、測(cè)定并分析其rDNA-ITS基因序列，分析我國(guó)梨腐爛病病原菌分離株的生物學(xué)特性與其基因組rDNA-ITS基因序列是否存在相關(guān)性，我國(guó)梨腐爛病菌不同分離株致病力的差異與寄主種類及地理來(lái)源之間是否存在相關(guān)性，旨在明確我國(guó)梨腐爛病病原菌的種類組成。

1 材料和方法

1.1 材料

2010年5月至2012年5月，依托于國(guó)家梨產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系21個(gè)綜合試驗(yàn)站，根據(jù)梨樹(shù)腐爛病在田間的病害癥狀特征，在我國(guó)15個(gè)省市（黑龍江、遼寧、吉林、新疆、河北、北京、山西、陜西、甘肅、山東、河南、湖北、安徽、福建、云南）的梨產(chǎn)區(qū)采集梨腐爛病病樣，共分離獲得168份梨腐爛病菌株（表1）。另從山西蘋(píng)果樹(shù)腐爛病病樣上共分離獲得7份蘋(píng)果腐爛病菌株作為參照菌株。

1.2 方法

1.2.1 病原菌株的分離、純化 采用常規(guī)組織分離法[12]，從病斑邊緣病健交界處取樣分離、培養(yǎng)獲得梨腐爛病菌分離株。選取不同省份部分分離株在25 ℃、黑暗條件下于PDA平板上進(jìn)行培養(yǎng)至產(chǎn)生分生孢子角，挑取分生孢子角制備孢子懸浮液涂于PDA平板上培養(yǎng)，孢子膨大后挑取單孢置于新的PDA平板上培養(yǎng)獲得純化菌株[13]，將純化菌株保存于PDA斜面試管中，于4 ℃貯存?zhèn)溆谩Ｋ胁蛹熬N保存于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹(shù)脫毒種質(zhì)資源室內(nèi)保存中心。

1.2.2 病原菌株形態(tài)觀察 將接種不同純化分離株的PDA平板置于25 ℃、黑暗條件進(jìn)行培養(yǎng)， 觀察菌落的顏色、形狀、氣生菌絲的疏密程度和產(chǎn)孢體的形態(tài)特征，記錄產(chǎn)孢體的大小及分布情況。將病菌在PDA平板上培養(yǎng)至產(chǎn)生分生孢子角，挑取分生孢子角制備孢子懸浮液涂于PDA平板上于25 ℃、黑暗條件下培養(yǎng)，觀察孢子萌發(fā)特征。

選取梨1 a生離體枝條，將梨腐爛病菌接種枝條上（用直徑為5 mm的打孔器在梨枝條上打孔，將用同樣大小打孔器打孔獲得的菌絲塊接種其上，保鮮膜覆蓋保濕），待發(fā)病3周后，發(fā)病枝條上產(chǎn)生黑色小點(diǎn)，挑取黑點(diǎn)制作徒手切片，置光學(xué)顯微鏡（NIKON JAPAN）下觀察其形態(tài)特征并拍照、記錄。

1.2.3 致病性測(cè)定方法 將‘翠冠梨離體1 a生枝條用清水洗凈晾干，再用酒精消毒并晾干，將其剪成約15 cm長(zhǎng)的小段，兩端用石蠟封口。用直徑為5mm的打孔器在小段枝條的中央打孔，從各分離株在PDA平板上生長(zhǎng)2 d時(shí)的菌落邊緣打取大小一致的菌絲塊進(jìn)行接種，同時(shí)用接種空白PDA培養(yǎng)基的枝條作為對(duì)照，然后附上滅菌濕棉花并將其置于用酒精消過(guò)毒且鋪有滅菌濕紗布的白色塑料盤中，用保鮮膜封口，將其置于25 ℃、光暗交替（12 h/12 h）環(huán)境下，每份菌株4次重復(fù)。培養(yǎng)至2 d，將棉花和菌絲塊去掉并觀察其發(fā)病情況，培養(yǎng)至4d，調(diào)查、記錄枝條發(fā)病狀況，測(cè)定病斑長(zhǎng)度。數(shù)據(jù)分析采用SPSS軟件分析，處理間的差異顯著性采用Duncans Multiple Range Test。

1.2.4 DNA的提取 將菌株轉(zhuǎn)入鋪有滅菌玻璃紙的PDA平板中央培養(yǎng)，3 d后收集菌絲，液氮研磨，采用CTAB法[14]提取其基因組DNA。1%瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)DNA的質(zhì)量并估計(jì)其濃度。

1.2.5 rDNA-ITS基因的擴(kuò)增、克隆及測(cè)序 以梨腐爛病菌分離株基因組DNA為模板進(jìn)行rDNA-ITS基因的PCR擴(kuò)增。采用引物為真菌基因組轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)通用引物ITS1和ITS4[15]，ITS1：5-TCCGTAGGTG AACCTGCGG-3；ITS4：5-TCCTCCGCTTATTGA TATGC-3。rDNA-ITS區(qū)域PCR擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性4 min；進(jìn)入循環(huán)94 ℃變性45 s，54 ℃退火45 s，72 ℃延伸45 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min。

純化的PCR產(chǎn)物連接到PMD18-T載體（TaKaRa），轉(zhuǎn)化到E.coli 菌株DH5α感受態(tài)細(xì)胞，涂布于含Amp的LB平板上，37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜，挑選單菌落， PCR擴(kuò)增鑒定陽(yáng)性克隆，由南京金斯瑞生物技術(shù)有限責(zé)任公司自動(dòng)測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序。在GenBank（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov）BLAST中搜索黑腐皮殼屬及相近屬真菌的分離物，與本研究測(cè)定的腐爛病菌分離株的ITS基因區(qū)域序列進(jìn)行比較分析。采用DNAMAN、Clustalx W（1.83）（http：//clustalw.genome.jp） 軟件對(duì)其核苷酸序列進(jìn)行多重比對(duì)和分析，遺傳進(jìn)化分析軟件MEGA 4.1，采用鄰接法（Neighbor-Joining）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)， 重復(fù)1 000次[16]。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間腐爛病癥狀觀察結(jié)果

梨腐爛病危害梨樹(shù)主干、主枝、側(cè)枝及小枝的樹(shù)皮，致使樹(shù)皮表現(xiàn)腐爛癥狀。病皮外觀初期紅褐色，水漬狀，稍隆起，用手按壓有松軟感，多呈橢圓形或不規(guī)則形，常滲出紅褐色汁液，有酒糟氣味。用刀削掉病皮表層，可見(jiàn)病皮內(nèi)呈黃褐色，濕潤(rùn)、松軟、糟爛（圖版-A1）。發(fā)病后期，表面密生小粒點(diǎn)為梨腐爛病病原菌的分生孢子器，刮開(kāi)病斑表皮可見(jiàn)分生孢子器暗褐色、錐形、埋生（圖版-B1），分生孢子器多腔室，形狀不規(guī)則，器壁暗褐色，有一共同孔口，孔口處黑色，通到表皮外（圖版-C1）。雨后或空氣濕度大時(shí)，從分生孢子器中可涌出病菌淡黃色的分生孢子角（圖版-D1）。

2.2 梨腐爛病菌形態(tài)特征觀察結(jié)果

選取來(lái)源于不同地區(qū)的72份梨腐爛病菌分離株進(jìn)行單孢分離、純化培養(yǎng)共獲得79份菌株。將其在PDA平板25 ℃、黑暗條件下培養(yǎng)至5 d進(jìn)行菌落形態(tài)觀察，可將梨腐爛病菌分為2種不同的菌落類型，分別稱為Ⅰ型和Ⅱ型；其中Ⅰ型菌落類型72份，Ⅱ型菌落類型7份。Ⅰ型菌落在PDA上培養(yǎng)至5 d時(shí)表現(xiàn)為菌落羽狀、乳白色、質(zhì)地柔韌、結(jié)構(gòu)致密，并具有乳白色的氣生菌絲，在菌絲的生長(zhǎng)過(guò)程中分泌膠狀物質(zhì)使菌絲緊貼培養(yǎng)基生長(zhǎng)（圖版-A2）；5 d后培養(yǎng)至20 d，菌株的培養(yǎng)基顏色均為乳白色。Ⅱ型菌落在PDA上培養(yǎng)至5 d時(shí)表現(xiàn)為菌落羽狀，菌絲乳白色，質(zhì)地柔韌、結(jié)構(gòu)致密，分泌膠狀物質(zhì)和色素，色素使培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃綠色（圖版-B2）；Ⅱ型菌株培養(yǎng)至20 d時(shí)，分泌的色素使PDA培養(yǎng)基顯現(xiàn)出淺黃色、橙黃色、灰色、黃褐色的變化。

對(duì)梨腐爛病菌菌株在PDA上培養(yǎng)產(chǎn)生的產(chǎn)孢體形態(tài)及分布情況進(jìn)行了觀察記錄，結(jié)果表明梨腐爛病菌在PDA上培養(yǎng)至40 d時(shí)，菌株出現(xiàn)菌絲團(tuán)或不同類型的產(chǎn)孢體，分別稱為A、B、C、D、E、F、G和H型（圖版-A3， B3， C3， D3， E3， F3， G3， H3）。A型為菌株產(chǎn)生菌絲團(tuán)；B型產(chǎn)孢體大小在0.8～2.8 mm之間，外圍分布的產(chǎn)孢體密集且大小均有，分布于培養(yǎng)皿中心的產(chǎn)孢體大而疏散；C型產(chǎn)孢體大小在0.1～0.2 mm之間，在整個(gè)皿中均勻密集分布；D型產(chǎn)孢體大小在0.1～2mm之間，稀疏分散分布；E型產(chǎn)孢體大小在0.1～4mm之間，大多數(shù)產(chǎn)孢體集中在3.5 mm左右，稀疏均勻分布；F型產(chǎn)孢體大小在0.1～1.5 mm，小產(chǎn)孢體均勻密集分布，大產(chǎn)孢體均勻稀疏分布；G型產(chǎn)孢體大小在0.5～2.2 mm，它們集中在2 mm左右，呈中央密集，邊緣稀疏分布；H型產(chǎn)孢體大小在0.2～0.8 mm，稀疏分散分布。B、E、F、G

型產(chǎn)孢體均在培養(yǎng)基上形成，前期分泌灰綠色透明的黏狀物，后期孔口處被菌絲包住呈半包埋狀，有多個(gè)孔口，形成白色球狀的產(chǎn)孢體。C、D型產(chǎn)孢體均在培養(yǎng)基表面形成，先形成小的菌絲團(tuán)，后期逐漸露出黑色小點(diǎn)。H型產(chǎn)孢體成黑色的小點(diǎn)，一般是2～3個(gè)小點(diǎn)聚在一起。

對(duì)梨腐爛病菌在PDA培養(yǎng)基上分子孢子動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了觀察，結(jié)果表明分生孢子香蕉形，大小為 3.5～8 μm×0.65～1.2 μm。分生孢子萌發(fā)時(shí)先膨大，至12 h左右時(shí)，有些分生孢子可膨大至原孢子大小的數(shù)倍，成球形或近似球形，至48 h左右膨大的孢子向外伸出芽管，伸出芽管的數(shù)目為1～4根。對(duì)梨腐爛病菌接種在梨樹(shù)枝條上產(chǎn)生的黑點(diǎn)進(jìn)行了徒手切片顯微觀察，結(jié)果顯示腐爛病菌的分生孢子器具有多個(gè)腔室，共用一個(gè)孔口，集于分生孢子器中央，腔壁內(nèi)部凹陷，形成多個(gè)小室。

2.3 來(lái)源于我國(guó)不同梨產(chǎn)區(qū)的梨腐爛病菌rDNA-ITS基因核苷酸序列分析

選取我國(guó)不同梨產(chǎn)區(qū)的38份梨腐爛病菌分離株和7份蘋(píng)果腐爛病菌分離株進(jìn)行rDNA-ITS基因的PCR擴(kuò)增，電泳檢測(cè)結(jié)果表明：38份梨腐爛病菌分離株和7份蘋(píng)果腐爛病菌分離株的rDNA-ITS序列擴(kuò)增均得到大小約為544 bp的特異性片段，與預(yù)期目標(biāo)片段大小一致，而陰性對(duì)照無(wú)任何條帶。

將來(lái)源于我國(guó)12個(gè)省（市）（黑龍江、云南、安徽、河北、遼寧、新疆、甘肅、北京、山西、山東、河南、福建）梨產(chǎn)區(qū)的38份梨腐爛病菌株以及來(lái)源于山西、山東的7份蘋(píng)果腐爛病菌株，并選取有代表性的在GenBank上登錄的來(lái)源于不同國(guó)家地區(qū)、不同寄主的腐爛病菌株基因核苷酸序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析，結(jié)果表明：來(lái)自我國(guó)的38份梨腐爛病菌株其rDNA-ITS核苷酸序列一致率為99.98%～100%，與來(lái)源于意大利的梨樹(shù)腐爛病菌（GenBank， Acc.No.， DQ241769）聚為同一分支為V. mali var. pyri[11]（圖1）；來(lái)自山東煙臺(tái)、山西運(yùn)城蘋(píng)果樹(shù)上的7份蘋(píng)果腐爛病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率為100%，并與來(lái)源于日本的蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌株（GenBank， Acc.No.， AF192326）聚為另一分支V. mali var. mali[11]（圖1）。這2個(gè)分組之間的菌株有7個(gè)堿基的差異，但它們同屬于V. mali組。來(lái)自不同國(guó)家和地區(qū)（日本、烏干達(dá)、美國(guó)、南非）以及不同寄主（桉樹(shù)、橡樹(shù)、桃）來(lái)源的腐爛病菌株與來(lái)自我國(guó)梨樹(shù)和蘋(píng)果樹(shù)寄主上的腐爛病菌分別聚為不同的亞組，其中來(lái)自不同地區(qū)的桉樹(shù)寄主上的腐爛病菌聚為同一亞組，來(lái)自不同地區(qū)桃樹(shù)寄主上的腐爛病菌聚為同一分支，來(lái)自橡樹(shù)寄主上的腐爛病菌自成一個(gè)獨(dú)立分支，而我國(guó)的梨樹(shù)和蘋(píng)果樹(shù)寄主上的腐爛病菌聚為同一個(gè)亞組，表明腐爛病菌菌株與地域、寄主種類間存在一定的相關(guān)性。

2.4 梨和蘋(píng)果腐爛病菌致病性測(cè)定結(jié)果

將梨和蘋(píng)果腐爛病菌接種‘翠冠梨離體枝條，接種1 d后均開(kāi)始發(fā)病，4 d時(shí)梨腐爛病菌在枝條上形成潰瘍狀病斑，病斑中間呈紅褐色，邊緣黑褐色，組織軟化；蘋(píng)果腐爛病菌在枝條上形成黑褐色潰瘍斑，病斑處表皮均因?yàn)槭櫩s（圖版-A4， B4， C4， D4， E4， F4， G4）。采用SPSS軟件對(duì)梨腐爛病菌菌株接種至4d的病斑長(zhǎng)度進(jìn)行顯著性差異分析將我國(guó)梨腐爛病菌菌株致病力分為3個(gè)等級(jí)，病斑長(zhǎng)度命名為L(zhǎng)D，LD≧4.10 cm為強(qiáng)致病力菌株，4.10 cm﹥LD﹥2.50 cm為中等致病力菌株，LD≦2.50 cm為弱致病力菌株。按照劃分標(biāo)準(zhǔn)，本研究獲得強(qiáng)致病力菌株18份，中等致病力菌株50份，弱致病力菌株9份。來(lái)源于不同省份的Ⅰ型和Ⅱ型菌落類型的梨腐爛病菌株在致病力上均存在強(qiáng)、中、弱的差異。蘋(píng)果腐爛病菌株的致病力在梨樹(shù)離體枝條上比梨腐爛病菌株弱（圖2）。

3 討 論

本研究從我國(guó)15個(gè)?。ㄊ校┑睦娈a(chǎn)區(qū)采集分離培養(yǎng)共獲得168份梨腐爛病菌菌株，對(duì)來(lái)源于不同地區(qū)的72份菌株進(jìn)行單孢分離、純化，共獲得79份梨腐爛病菌分離株。梨腐爛病菌分離株在PDA上培養(yǎng)的菌落形態(tài)表現(xiàn)為2種菌落類型，分別為Ⅰ型和Ⅱ型，均與作為參照菌株的蘋(píng)果腐爛病菌在PDA上培養(yǎng)的菌落形態(tài)不同。對(duì)梨腐爛病菌的產(chǎn)孢體形態(tài)特征的觀察結(jié)果表明，我國(guó)梨腐爛病菌分離株的產(chǎn)孢體類型存在多樣性。來(lái)源于不同地區(qū)的梨腐爛病菌株以及作為參照菌株的蘋(píng)果腐爛病菌株分別在‘翠冠離體梨樹(shù)枝條上接種測(cè)定致病性的結(jié)果表明，梨腐爛病菌菌株產(chǎn)生的病斑與蘋(píng)果腐爛病菌分離株明顯不同，其致病力存在差異，梨腐爛病菌的致病力強(qiáng)于蘋(píng)果腐爛病菌。本實(shí)驗(yàn)室還對(duì)這兩種病菌在蘋(píng)果枝條上接種測(cè)定了致病力，結(jié)果顯示，蘋(píng)果腐爛病菌的致病力強(qiáng)于梨腐爛病菌株。這些結(jié)果暗示，梨腐爛病菌致病力的強(qiáng)弱可能與寄主種類有一定的相關(guān)性。梨腐爛病菌在‘翠冠梨離體枝條上的致病力測(cè)定結(jié)果顯示，來(lái)源于我國(guó)不同梨產(chǎn)區(qū)的梨腐爛病菌致病力的差異與其地域來(lái)源及菌落類型均無(wú)明顯的相關(guān)性。深入了解我國(guó)梨腐爛病菌致病力的分化特征，還需用不同梨系統(tǒng)品種材料做進(jìn)一步研究。

基于梨腐爛病菌分離株生物學(xué)形態(tài)特征的多樣性，本研究對(duì)來(lái)源于我國(guó)梨產(chǎn)區(qū)腐爛病菌菌株的rDNA-ITS基因序列進(jìn)行分析，結(jié)果顯示來(lái)源于我國(guó)的梨腐爛病菌分離株在ITS基因進(jìn)化樹(shù)中聚集為獨(dú)立分支，表明我國(guó)梨腐爛病菌分離株組成比較單一，均為V. mali var. pyri[11]，與蘋(píng)果腐爛病菌分離株聚集為同一亞組的2個(gè)不同分支。據(jù)報(bào)道，蘋(píng)果腐爛病菌分離株組成除了V. mali，還發(fā)現(xiàn)有V. malicola[11]，我國(guó)梨腐爛病菌分離株組成除了V. mali var. pyri，是否還存在其他病原菌，以及I型和II型梨腐爛病菌在其基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平上是否有差異，目前正在深入研究之中。

綜上所述，本研究對(duì)來(lái)源于我國(guó)梨主產(chǎn)區(qū)的腐爛病菌分離株進(jìn)行了田間癥狀特征觀察、在PDA上的培養(yǎng)形態(tài)觀察、rDNA-ITS基因序列分析以及離體梨樹(shù)枝條致病力測(cè)定，初步鑒定并分析了我國(guó)梨腐爛病菌分離株病原菌種類組成，該研究結(jié)果為深入研究我國(guó)梨腐爛病發(fā)生流行規(guī)律以及防治策略的制定奠定了一定的基礎(chǔ)。

4 結(jié) 論

通過(guò)對(duì)79份純化菌株培養(yǎng)特性的觀察，發(fā)現(xiàn)我國(guó)梨腐爛病菌存在Ⅰ型和Ⅱ型2種菌落類型，2者的致病力沒(méi)有明顯的差異；基于rDNA-ITS基因核苷酸序列的分析結(jié)果，我國(guó)梨腐爛病菌的分離株聚為一組，均屬于V. mali var. pyri。（本文圖版見(jiàn)封底）

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