蔣悅

[摘要] 目的 探討E-Cadherin和CD44v6在腎臟惡性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義。 方法 選擇腎臟惡性腫瘤組織30例和正常腎組織10例，采用免疫組織化學(xué)法檢測腎臟惡性腫瘤組織和正常腎組織中E-Cadherin、CD44v6的表達(dá)，比較兩組之間的差異，并分析E-Cadherin和CD44v6與腎臟惡性腫瘤的臨床分期、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 結(jié)果 腎臟惡性腫瘤組織E-Cadherin表達(dá)顯著低于對照組（P < 0.01），CD44v6表達(dá)顯著高于對照組（P < 0.05）。E-Cadherin表達(dá)在不同病理分級之間差異不顯著（P > 0.05），CD44v6表達(dá)在不同病理分級之間差異顯著（P < 0.01）。E-Cadherin、CD44v6表達(dá)在不同臨床分期之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；E-Cadherin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎臟惡性腫瘤組織表達(dá)顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P < 0.05）。 結(jié)論 E-Cadherin表達(dá)下調(diào)和CD44v6升高在腎臟惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤等過程中發(fā)揮重要的作用。

[關(guān)鍵詞] 上皮鈣黏附素；CD44基因含v6外顯子的變異體；腎臟惡性腫瘤

[中圖分類號] R737.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）08-0014-03

腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程，是腫瘤患者病情惡化、死亡的主要原因之一。近年來，關(guān)于細(xì)胞黏附能力在腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲過程中的作用逐漸受到醫(yī)學(xué)界的重視，因此關(guān)于與細(xì)胞黏附相關(guān)的分子的研究逐漸增多。上皮鈣黏附素（E-Cadherin）是與細(xì)胞黏附能力相關(guān)的重要分子之一[1]。CD44是細(xì)胞表面的跨膜蛋白，也是一種黏附分子，能夠介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)間相互作用。CD44基因含v6外顯子的變異體（CD44v6）的變異部分位于胞外近膜，對黏附作用具有重要的影響。有研究顯示，CD44v6能夠促使腫瘤浸潤生長和轉(zhuǎn)移。本文探討E-Cadherin和CD44v6在腎臟惡性腫瘤中的表達(dá)，并探討其與臨床分期、病理分級等關(guān)系?，F(xiàn)將實驗結(jié)果分析報道如下。

1 資料與方法

1.1 病理資料

腎臟惡性腫瘤組30例腎臟惡性腫瘤病理標(biāo)本來自于2007～2012年在我院進(jìn)行手術(shù)治療患者的石蠟標(biāo)本?；颊?0例，其中男23例，女7例，年齡36～70歲，平均61歲。所有患者均經(jīng)病理診斷明確。采用Fuhman[2]病理分級法進(jìn)行分級，Ⅰ級10例，Ⅱ級15例，Ⅲ級5例。采用Robson腫瘤分期法進(jìn)行分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期9例，Ⅳ期3例。10例患者存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。選擇正常腎組織標(biāo)本10例作為對照組。

1.2 標(biāo)本制作

腎組織采用福爾馬林液固定，然后石蠟包埋。5 μm厚連續(xù)切片，共4張。1張采用HE染色，核實診斷。余3張行免疫組織化學(xué)染色，檢測E-Cadherin、CD44v6。

1.3 實驗方法

1.3.1 試劑 采用免疫組化法，S-P免疫組化試劑盒由上?；顦飞锟萍加邢薰咎峁?，E-Cadherin、CD44v6鼠抗人單克隆抗體由福州邁新生物有限公司提供。

1.3.2 方法 切片脫蠟，100%的酒精浸泡15 min，按照95%-90%-80%-70%的酒精濃度梯度依次進(jìn)行浸泡，各5 min，然后蒸餾水沖洗。pH為6.0的檸檬鹽緩沖液1 L置于壓力鍋中，加熱沸騰后，將組織切片放置在切片架上放入沸騰的緩沖液中，扣上壓力閥，從噴氣開始計時，2 min后關(guān)火，冷卻，取出玻片。蒸餾水沖洗，PBS緩沖液沖洗，各2次，每次沖洗3 min。所有切片均加入50 μL的過氧化酶阻斷液，室溫下放置10 min，PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min。甩掉PBS緩沖液后，所有切片均加入50 μL解非免疫性動物血清，室溫下孵育10 min。甩掉血清，所有切片均分布加50 μL的鼠抗αE-Cad血清（第一抗體），室溫孵育60 min，PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min。甩掉PBS緩沖液，每片加入50 μL生物素標(biāo)記的第二抗體，室溫孵育10 min，PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min。甩掉PBS緩沖液，每片加入50 μL的鏈親和素，室溫孵育10 min，PBS緩沖液沖洗3 min，共3次。甩掉PBS緩沖液，每片加入100 μL的AEC溶液，顯微鏡下觀察，10 min后蘇木素復(fù)染，然后進(jìn)行自來水沖洗，最后封片。

1.4 病理特點

E-Cadherin位于細(xì)胞膜上，陽性：鏡下細(xì)胞膜出現(xiàn)均勻一致的顆粒，呈棕黃色；陰性為無棕黃色顆粒，或者著色區(qū)和無色區(qū)相間，且陽性染色的細(xì)胞少于90%。CD44v6也定位于細(xì)胞膜，陽性細(xì)胞細(xì)胞膜呈現(xiàn)出棕黃色，陽性細(xì)胞超過10%為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗。P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E-Cadherin和CD44v6在腎臟惡性腫瘤中表達(dá)的病理結(jié)果

腎臟惡性腫瘤組織E-Cadherin表達(dá)可見細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色均勻一致的顆粒，見圖1。腎臟惡性腫瘤組織CD44v6表達(dá)可見陽性細(xì)胞呈棕黃色，見圖2。

2.2 E-Cadherin和CD44v6在腎臟惡性腫瘤和正常腎組織中的表達(dá)差異

腎臟惡性腫瘤組織E-Cadherin表達(dá)8例陽性，占26.7%，正常腎組織7例陽性，占70.0%，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。腎臟惡性腫瘤CD44v6表達(dá)17例陽性，占56.7%，正常腎組織2例陽性，占20.0%，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.3 E-Cadherin和CD44v6在不同病理分級中的表達(dá)差異

病理分級為Ⅰ級腎臟惡性腫瘤組織E-Cadherin表達(dá)3例陽性，占30.0%，Ⅱ級4例陽性，占26.7%，Ⅲ級1例陽性，占20.0%，不同病理分級間比較，差異不顯著（P > 0.05）。病理分級為Ⅰ級腎臟惡性腫瘤組織CD44v6表達(dá)3例陽性，占30.0%，Ⅱ級11例陽性，占73.3%，Ⅲ級3例陽性，占60.0%，不同病理分級間比較，差異顯著（P < 0.01）。見表2。

2.4 E-Cadherin和CD44v6在不同臨床分期中的表達(dá)差異

臨床分期為Ⅰ期的腎臟惡性腫瘤組織中E-Cadherin表達(dá)4例陽性，占50.0%，Ⅱ期2例陽性，占20.0%，Ⅲ期1例陽性，占11.1%，Ⅳ期1例，占33.3%。不同臨床分期之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。臨床分期為Ⅰ期的腎臟惡性腫瘤組織中CD44v6表達(dá)3例陽性，占37.5%，Ⅱ期6例陽性，占60.0%，Ⅲ期7例陽性，占77.8%，Ⅳ期3例，占100.0%。不同臨床分期之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。見表3。

2.5 E-Cadherin和CD44v6與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎臟惡性腫瘤組織1例陽性，占10.0%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者7例陽性，占35.0%，兩組間比較，差異顯著（P < 0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎臟惡性腫瘤組織6例陽性，占60.0%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者11例陽性，占55.0%，兩組間比較，差異不顯著（P > 0.05）。見表4。

3 討論

Cadherin家族（Ca2+ dependent cell adhesion molecules family）是一組介導(dǎo)細(xì)胞間相互聚集的黏附分子，對于生長發(fā)育過程中細(xì)胞的選擇性聚集具有至關(guān)重要的作用。Cadherin分子均為單鏈糖蛋白，約由723～748個氨基酸構(gòu)成，為Ⅰ型膜蛋白，由胞膜外區(qū)、穿膜區(qū)和胞漿區(qū)三部分組成。Cadherin家族共有3個成員，E-Cadherin是其中之一，主要分布在上皮組織內(nèi)，主要介導(dǎo)同型細(xì)胞的黏附，對維持上皮細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)具有重要的意義，具有抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用。E-Cadherin在原發(fā)病灶中的表達(dá)表現(xiàn)為4種形式，均質(zhì)性在全部腫瘤細(xì)胞表達(dá)，據(jù)造型或均質(zhì)性降低，完全無表達(dá)，在細(xì)胞口表達(dá)，但沒有黏附功能。因此，當(dāng)E-Cadherin在細(xì)胞中表達(dá)下降導(dǎo)致功能障礙時，腫瘤細(xì)胞呈浸潤生長，容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。有研究顯示，在乳腺導(dǎo)管癌中，高分化組E-Cadherin成均質(zhì)性全部表達(dá)，而低分化組表達(dá)減少或缺如[3]。海鷗等[4]研究E-Cadherin與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系，結(jié)果顯示，胃癌E-Cadherin的表達(dá)率顯著低于正常胃黏膜，其與胃癌的分型、細(xì)胞分化程度、胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等均有相關(guān)性。孟繼虹[5]研究E-Cadherin在白血病細(xì)胞中的表達(dá)，白血病患者的E-Cadherin表達(dá)顯著低于正常人。本文的研究結(jié)果也顯示，腎臟惡性腫瘤組織中E-Cadherin的表達(dá)顯著低于正常腎組織，而其與病理分級關(guān)系不明顯。但是其表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，臨床分期Ⅰ期的患者表達(dá)最高，而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者表達(dá)低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，說明E-Cadherin表達(dá)下調(diào)，功能障礙，導(dǎo)致癌細(xì)胞的黏附功能下降，促進(jìn)了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，促進(jìn)腫瘤的生長[6]。

CD44為分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，主要參與異質(zhì)性黏附，即腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞和宿主基質(zhì)的黏附，異質(zhì)性黏附在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中起促進(jìn)作用[7]。CD44蛋白的主要功能主要有介導(dǎo)淋巴細(xì)胞與毛細(xì)血管后小靜脈中的高柱狀內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，使淋巴細(xì)胞穿過血管壁回到淋巴組織，參與淋巴細(xì)胞的激活過程，與細(xì)胞外基質(zhì)中的透明質(zhì)酸、層黏連蛋白等基質(zhì)分子結(jié)合，與細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞偽足形成，并與細(xì)胞的遷移運(yùn)動有關(guān)[8]。CD44v6在惡性腫瘤組織中陽性表達(dá)率高低不一，但陽性表達(dá)者較易發(fā)生脈管浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良。有研究認(rèn)為，CD44v6與細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、浸潤生長等有關(guān)。丁雪松[9]對非小細(xì)胞肺癌中CD44v6的表達(dá)進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，陽性表達(dá)高達(dá)69.23%，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，而與病理分期、主治分化關(guān)系不大，其在良性肺疾病中無表達(dá)。徐玉雪[10]對卵巢上皮性腫瘤中的CD44v6表達(dá)進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，卵巢上皮性腫瘤組織中CD44v6表達(dá)高達(dá)78.26%，顯著高于良性腫瘤，而正常卵巢的表達(dá)率為0，其與臨床分期關(guān)系不大，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，與腹水也有相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，腎臟惡性腫瘤組織CD44v6的表達(dá)顯著高于正常人，并且與病理分級、臨床分期相關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不相關(guān)，考慮可能與本文納入的研究對象較少有關(guān)。

綜上所述，多種因素參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移，而E-Cadherin表達(dá)的下降和功能下調(diào)及CD44v6異常高表達(dá)都對腫瘤的發(fā)展、浸潤具有重要的意義。本研究的不足之處是納入的標(biāo)本較少，進(jìn)一步的研究還需要后續(xù)大樣本的分析。

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（收稿日期：2013-01-17）