陳雅慧 李寶莉 符兆英 高 楓 朱 梅 (延安大學醫(yī)學院，陜西 延安 76000)

學習記憶是大腦最基本也是最重要的高級神經功能，即是認知活動的組成部分，也是重要的智力因素。學習主要是指人或動物通過神經系統(tǒng)接受外界環(huán)境信息而影響自身行為的過程;記憶是指獲得的信息或經驗在腦內貯存和提取再現(xiàn)的神經活動過程〔1〕。酸棗仁、梔子配伍成藥對制成復方酸棗仁油梔子油，觀察其促學習記憶作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD大鼠，雌雄不限，陜醫(yī)動字第08-004，二級合格動物，體重200～250 g，由西安第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。

1.2 實驗藥品儀器 酸棗仁油、梔子油由超臨界CO2萃取;復方酸棗仁梔子油膠囊由酸棗仁油與梔子油按2∶1混合而成制成軟膠囊;腦復康利君制藥廠，批號:050318，與生理鹽水配成0.1%水溶液備用;一氧化氮(NO)測試盒、乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒，南京建成生物工程研究所，批號:200808150。Morris水迷宮由成都泰盟醫(yī)藥設備有限公司生產。

1.3 方法

1.3.1 動物分組 將動物隨機分為五組，每組10只，分別給生理鹽水組(3 mg/kg)和腦復組(3 ml/kg)，復方酸棗仁油梔子油大劑量組(2.8 ml/kg)、中劑量組(1.4 ml/kg)、小劑量組(0.7 ml/kg)，均經灌胃給藥，各組小鼠每天上午9:00給藥1次，連續(xù)給藥15 d。保持室溫20℃ ～25℃，自由飲水和攝食。

1.3.2 Morris水迷宮檢測 第16天各組大鼠開始分別進行Morris水迷宮檢測，連續(xù)6 d。水迷宮測試主要包括定位航行實驗和空間探索實驗。定位航行實驗用來檢測大鼠對水迷宮學習和記憶的能力。Morris水迷宮為一圓形水池，直徑120 cm，高50 cm，水深30 cm，水溫控制在22～24℃。池壁標明4個入水點，由此將水池分為4個象限，任選其中一個象限，正中放置一個直徑15 cm，高30 cm的平臺。計算機可以自動跟蹤并記錄下大鼠游泳軌跡，當設定的訓練時間已到或大鼠已爬上平臺，計算機停止跟蹤，軟件自動計算出大鼠在水池中所游過的路徑長度，找到平臺所需的時間 (即潛伏期)和游泳速度等指標。大鼠在訓練的前1 d，在池中沒有可逃離的暗藏平臺時自由游泳180 s，以適應水溫和環(huán)境。訓練時池中被白色泡沫顆粒覆蓋。每天將實驗大鼠按東、南、西、北四個入水點依次放入水池中，如果大鼠在水中游泳一段時間爬上平臺，并在站臺上停留時間超過3 s，則認為大鼠找到平臺，同時記錄尋找平臺的時間(逃避潛伏期)，如果120 s仍未找到平臺，則人為引導大鼠到達平臺，并停留60 s，本次成績記作120 s。Morris水迷宮測試每天一次，共訓練5 d，實驗第6天將平臺撤走，進行大鼠120 s內穿越原平臺位置的次數(shù)測試，用空間探索實驗，用于測試大鼠學會尋找平臺之后對平臺空間位置的記憶能力。水迷宮訓練及測試時，保持周圍環(huán)境參照物的相對固定，避免人員的隨意走動。

1.3.3 AchE活性和NO含量的測定 末次測試結束后大鼠直接斷頭處死，冰盤上快速取腦，將右側腦組織用冰生理鹽水沖洗，分離右側海馬，加入預冷的生理鹽水，用勻漿器按1∶9的比例制成10%的組織勻漿，于4℃ 在3 000 r/min離心10 min。提取上清液－20℃凍存待測。檢測方法為比色法，嚴格按試劑說明書操作。

2 結果

2.1 復方酸棗仁油梔子油對大鼠定位航行能力的影響 隨著訓練次數(shù)增加各組大鼠尋找平臺的潛伏期明顯減少，腦復康組和小劑量組尤為明顯見表1。第16天各組的潛伏期相比差異無顯著性(P＞0.05)。從第17天各組大鼠尋找平臺的潛伏期開始逐漸縮短。在第18天，腦復康組和大、中、小劑量組的潛伏期明顯較正常對照組縮短(P＜0.05)。第19、20天腦復康組和大、中、小劑量組的潛伏期明顯較正常對照組縮短(P＜0.05)。

2.2 復方酸棗仁油梔子油對大鼠空間搜索試驗結果的影響Morris水迷宮空間探索實驗在第20天水迷宮訓練后的24 h(第21天)進行，可以反映海馬的長期記憶能力。復方酸棗仁油梔子油對大鼠空間搜索試驗結果統(tǒng)計見表2，復方酸棗仁油梔子油大鼠在平臺所在象限游泳時間長于對照組，平臺所在象限游泳距離占總距離百分比明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，P＜0.01)，而且復方酸棗仁油梔子油各組大鼠穿越平臺次數(shù)與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，P＜0.01)。復方酸棗仁油梔子油大鼠在平臺所在象限游泳時間、平臺所在象限游泳距離占總距離百分與腦復康組比較，無顯著差異(P＞0.05)。

表1 各組大鼠尋找隱匿平臺的潛伏期(± s，s，n=10)

表1 各組大鼠尋找隱匿平臺的潛伏期(± s，s，n=10)

與生理鹽水組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組別 第16天 第17天 第18天 第19天 第20天生理鹽水組 94.50±40.01 85.41±42.02 60.05±38.03 59.33±40.08 57.65±48.28腦復康組 90.06±43.30 48.24±42.261) 41.15±44.141) 36.51±31.361) 20.67±19.071)小劑量組 88.06±33.53 44.33±39.061) 25.13±23.122) 38.96±22.172) 21.15±17.362)中劑量組 90.15±36.54 64.74±48.50 44.17±40.121) 33.70±22.961) 23.52±16.182)大劑量組 91.14±36.09 68.88±36.94 38.53±33.202) 41.53±31.232) 26.56±21.262)

2.3 對大鼠腦中AchE和 NO含量的影響 生理鹽水組大鼠海馬組織中AchE的含量較復方酸棗仁油梔子油組大鼠AchE的含量均明顯升高(P＜0.05);生理鹽水組大鼠海馬組織中NO的含量較復方酸棗仁油梔子油組大鼠腦中NO的含量降低(P＜0.05)。復方酸棗仁油梔子油組大鼠腦中AchE和NO的含量與腦復康組比較，無明顯差異(P＞0.05)。見表3。

表2 Morris水迷宮空間探索實驗結果(± s，n=10)

表2 Morris水迷宮空間探索實驗結果(± s，n=10)

與生理鹽水組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組別 穿越平臺次數(shù) 平臺所在象限游泳距離占總路徑(%)平臺所在象限游泳時間(s)生理鹽水組3.61±2.41 25.83±9.56 28.48±9.64腦復康組 3.75±2.71 36.67±7.851) 31.89±13.66小劑量組 4.19±2.871) 41.09±11.321) 30.39±13.681)中劑量組 3.95±3.13 39.49±16.511) 29.93±10.49大劑量組 5.85±1.151) 44.10±6.752) 33.46±10.311)

表3 復方酸棗仁油梔子油對大鼠腦中AchE和NO的含量(± s，n=10)

表3 復方酸棗仁油梔子油對大鼠腦中AchE和NO的含量(± s，n=10)

與生理鹽水組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組別 AhE(U/mg) NO(μmol/mg)生理鹽水組0.94±0.61 0.99±0.30腦復康組 0.85±0.42 1.24±0.261)小劑量組 0.60±0.381) 1.47±0.141)中劑量組 0.59±0.401) 1.36.51±0.361)大劑量組 0.57±0.281) 1.67±0.071)

3 討論

本實驗說明復方酸棗仁油梔子油可以增強大鼠的空間記憶能力，其增強記憶的作用可能與酸棗仁油、梔子油含有多種不飽和脂肪酸有關。該膠囊主要有超臨界CO2萃取的酸棗仁油、梔子油的組成，主要成分為不飽和脂肪酸占84.1%，且油酸和亞油酸為82%〔1〕。油酸可在體內?；捎王０罚阎王０肪哂杏绊憣W習記憶的作用〔2〕。亞油酸在體內可轉化成亞麻酸、花生四烯酸等?；ㄉ南┧崾侨梭w中含量最高、分布最廣的一種多不飽和脂肪酸。在維持膜的物理特性和功能方面起著非常重要的作用?；ㄉ南┧徇€參與神經內分泌，調節(jié)多種激素和神經肽如加壓素的分泌?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)花生四烯酸的代謝產物—加壓素可提高長時學習記憶功能〔3，4〕。

已有研究認為，Ach為促進學習記憶的神經遞質，中樞膽堿能系統(tǒng)與學習記憶關系密切。ACh是海馬的主要神經遞質，海馬主要與空間記憶有關，尤其在空間工作記憶的獲得、儲存和提取中發(fā)揮重要作用〔5〕。研究認為NO作為氣體神經遞質，它也參與空間記憶并可以鞏固記憶〔6〕。本實驗證明，復方酸棗仁油梔子油可以減少大鼠海馬組織中AchE的活性，增加NO的含量。降低AchE的活性意味著Ach的滅活減少，反而增加大腦組織中Ach的水平，在大腦記憶和長時程增強中Ach和NO中起到一定作用，是鞏固記憶的一個關鍵的組分。目前尚不清楚復方酸棗仁油梔子油促學習記憶作用的作用機制，還有待進一步研究。

1 張正祥，李寶莉，陳雅慧，等.復方酸棗仁油梔子油軟膠囊脂肪酸成份測定〔J〕.陜西醫(yī)學，2009;38(7):792-3.

2 蘇定馮，繆朝玉，王佑銘.2004藥理學進展〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:305-12.

3 Engflmann M，Wotjak CT，Ebner K，et al.Behavioural impact of intraseptally released vasopressin and oxytocin in rats〔J〕.Exp Physiol，2000;85(1):125-30.

4 謝湘林，周 鳴，劉宏雁.苦碟子口服液對小鼠及大鼠學習記憶的影響〔J〕.吉林大學學報:醫(yī)學版，2004;30(5):721-3.

5 Chang Q，Gold PE.Switching memory systems during learning:changes in patterns of brain acetylcholine release in the hippocampus and striatuill in rats〔J〕.J Neurosci，2003;23(7):3001-5.

6 Lope Z，Jaramillo P，Teran E.Improvement in functions of the central nervous system by estrogen replacement therapy might be related with an increased nitric oxide production〔J〕.Endothelium，1999;6(4):263-6.