張廣梅，任世存，王仁嬡，趙協(xié)慧，灑玉萍，趙艷霞，康文娟，李永平

(青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，青海 西寧 810001)

卵巢早衰是婦科內(nèi)分泌領(lǐng)域的常見病，是一種病因復(fù)雜、治療困難、給患者造成巨大痛苦的疾病，目前還沒有明確的、有效的針對(duì)恢復(fù)卵巢自然功能的治療方法。西醫(yī)多采用雌孕激素的人工周期療法，但用藥后的副作用使患者難以長(zhǎng)期堅(jiān)持，使用的禁忌證又使一部分患者無法治療。臨床和實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，中藥對(duì)卵巢有多系統(tǒng)、多環(huán)節(jié)的整體調(diào)節(jié)作用。因此，辨證論治運(yùn)用中藥比單純應(yīng)用西藥針對(duì)雌激素水平降低的干預(yù)措施有著明顯優(yōu)勢(shì)并且能夠避免性激素帶來的不良反應(yīng)與依賴性。

我們選用明末清初著名的醫(yī)學(xué)家傅山的《傅青主女科》中治療“年未老經(jīng)水?dāng)唷钡囊娼?jīng)湯［1］，對(duì)雷公藤多苷片灌胃導(dǎo)致的卵巢早衰模型大鼠進(jìn)行治療，并通過與空白組、中藥對(duì)照組及模型組間FSH、E2的檢測(cè)、卵巢組織形態(tài)學(xué)變化的觀察，了解益經(jīng)湯對(duì)卵巢早衰的作用效果，揭示益經(jīng)湯治療卵巢早衰的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

雷公藤多苷片(每片10mg，湖南協(xié)力藥業(yè)有限公司，批號(hào)20101201，國(guó)藥準(zhǔn)字Z43020138);益經(jīng)湯(青海省中醫(yī)院藥劑科提供)組成:熟地黃30g，白術(shù)30g，山藥 15g，當(dāng)歸 15g，白芍 15g，生棗仁 9g，沙參 9g，牡丹皮6g，黨參6g，柴胡6g，杜仲3g，水煎后去渣，濃縮至每毫升含生藥1g，4℃冰箱恒溫保存;六味地黃丸(青海寶鑒堂國(guó)藥有限公司，批號(hào) WJ631059，國(guó)藥準(zhǔn)字Z63020070);性激素化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒(西門子公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD雌性大鼠，12周齡，體質(zhì)量250～270g，由青海省地方病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)2～3天，連續(xù)5～10天做陰道涂片，有動(dòng)情周期的大鼠納入實(shí)驗(yàn)組。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組 將納入實(shí)驗(yàn)組的動(dòng)物隨機(jī)分組，每組10只，即空白組，模型組，益經(jīng)湯高、低劑量組，中藥對(duì)照組。

1.3.2 造模 空白組每天生理鹽水20mL/kg灌胃，其余各組均用雷公藤多苷片50mg/kg灌胃造模，每日1次，連續(xù)灌胃14天。

1.3.3 給藥方法

空白組:喂普通飼料+生理鹽水9mL/kg灌胃;模型組:造模后喂普通飼料+生理鹽水9mL/kg灌胃;益經(jīng)湯低、高劑量組:造模后喂普通飼料+益經(jīng)湯水煎液(按人鼠換算計(jì)量)灌胃。高劑量組造模結(jié)束后24h用益經(jīng)湯24g/kg灌胃，每日1次;低劑量組造模結(jié)束后24h用益經(jīng)湯12g/kg灌胃，每日1次。中藥對(duì)照組:造模后喂普通飼料+六味地黃丸水溶液20mL/kg/d灌胃。

益經(jīng)湯高、低劑量組和中藥對(duì)照組分別連續(xù)治療20天，在末次治療24h后，五組大鼠腹主動(dòng)脈取血測(cè)檢測(cè)指標(biāo)，斷頸處死大鼠，剖腹取卵巢。

1.4 觀測(cè)指標(biāo)

1.4.1 觀察大鼠動(dòng)情周期

光鏡觀察大鼠陰道脫落細(xì)胞的變化來判定動(dòng)情周期。

1.4.2 大鼠血清性激素(FSH、E2)水平檢測(cè)

大鼠用20%的烏拉坦2～5ml麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，置一干凈試管中，放入室溫自然靜置30min后，以3 000r/min速度離心，取上清液于－80℃冰箱保存，用化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定FSH、E2值。

1.4.3 大鼠卵巢組織形態(tài)學(xué)觀察

采血后斷頭法處死動(dòng)物，摘取卵巢，剔除脂肪和其他組織，放入天平精確稱取其重量;并將卵巢固定、包埋、切片、HE染色，進(jìn)行組織學(xué)檢查。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。

2 結(jié)果

2.1 大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片

將細(xì)棉簽用生理鹽水浸濕，插入大鼠陰道內(nèi)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)后取出。將分泌物涂在玻片上，95%乙醇固定20min，巴氏染色法染色?？瞻捉M見大而無核的角化細(xì)胞為動(dòng)情期，每只大鼠的動(dòng)情期為平均每次4～5天;模型組為平均每次7～8天。中藥高、低劑量、六味地黃丸組依次為平均每次4～5天，6～7天，5～6天。

2.2 血清性激素水平檢測(cè) 結(jié)果見表1。

表1 大鼠血清E2、FSH結(jié)果(±s)

表1 大鼠血清E2、FSH結(jié)果(±s)

注:與空白組比較，*P＜0.05;與模型組比較，▲P＜0.05;與六味地黃丸組比較，#P＜0.05。

組別 n E2(pg/mL) FSH(mIU/mL)空白組0.0209 ±0.0034 10 84.47 ±22.67 0.0279 ±0.0028模型組 10 53.79 ±26.02* 0.0143 ±0.0014六味地黃丸組 10 64.85±30.41▲ 0.0160±0.0038益經(jīng)湯低劑量組 10 69.82±27.58▲ 0.0124±0.0013益經(jīng)湯高劑量組 10 78.54±22.91▲#

由表1可知，模型組E2水平降低與空白組比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治療后E2水平升高，以益經(jīng)湯高劑量組為最顯著(P＜0.05);FSH各組與空白組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 卵巢組織形態(tài)學(xué)結(jié)果

光鏡觀察:大鼠卵巢組織形態(tài)學(xué)病理分析:1)空白組:卵巢體積大，卵巢皮質(zhì)內(nèi)見多量初級(jí)卵泡及生長(zhǎng)卵泡，黃體發(fā)育好，體積大，黃體細(xì)胞豐富，間質(zhì)及纖維血管少、間質(zhì)腺少見(圖1)。2)模型組:卵巢體積縮小，卵巢皮質(zhì)內(nèi)見少量初級(jí)卵泡及生長(zhǎng)卵泡，黃體數(shù)量少，閉鎖卵泡多，可見較多間質(zhì)、纖維血管、間質(zhì)腺(圖2)。3)中藥高劑量組、中藥低劑量組、六味地黃丸組:卵巢皮質(zhì)內(nèi)見大量初級(jí)卵泡及生長(zhǎng)卵泡，較多近成熟卵泡，黃體數(shù)多，黃體生長(zhǎng)良好(圖3～5)。以中藥高劑量組最為明顯。

圖1 正常組HE染色圖(40×)

圖2 模型組HE(染色圖40×)

圖3 益經(jīng)湯高劑量組HE染色圖(40×)

圖4 益經(jīng)湯低劑量組HE(染色圖40×)

圖5 六味地黃丸組HE(染色圖40×)

3 討論

中醫(yī)學(xué)中雖無卵巢早衰病名，但古醫(yī)書籍有相似證散見于閉經(jīng)、血枯、年未老經(jīng)水?dāng)?、早發(fā)絕經(jīng)、不孕等證的記載之中。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，月經(jīng)的產(chǎn)生和肝、脾、腎三臟密切相關(guān)。腎藏精，主生殖，為先天之本，所以腎臟對(duì)月經(jīng)的產(chǎn)生及生理活動(dòng)起主導(dǎo)作用;肝腎同源，肝藏血，主升發(fā)、疏泄，條暢全身氣機(jī)，具有排泄月經(jīng)功能，對(duì)月經(jīng)有重要的調(diào)節(jié)作用;脾主運(yùn)化，為氣血生化之源、后天之本，為月經(jīng)提供物質(zhì)基礎(chǔ)。而心通過胞脈與胞宮相通，且心氣下通于腎，心腎相交，血脈流暢，月事如常。若腎陰虧虛，水不涵木可致肝陽上亢，水不上濟(jì)心火則心腎不交;脾失健運(yùn)，氣血生化乏源，心失所養(yǎng)。以上原因都會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)一系列軀體及精神心理癥狀。因此，現(xiàn)代醫(yī)家認(rèn)為腎精虧乏、腎氣不足是其根本病機(jī)，而心肝脾功能失常與卵巢早衰發(fā)病密切相關(guān)。本虛標(biāo)實(shí)、虛多實(shí)少是本病的病機(jī)特點(diǎn)。所以對(duì)于卵巢早衰基本治則應(yīng)為益腎健脾，養(yǎng)心調(diào)肝，活血通經(jīng)。

益經(jīng)湯出自明末清初著名的醫(yī)學(xué)家傅山的醫(yī)著《傅青主女科》上卷調(diào)經(jīng)篇“年未老經(jīng)水?dāng)唷敝?，方劑由熟地黃、白術(shù)、山藥、當(dāng)歸、白芍、生棗仁、牡丹皮、沙參、柴胡、杜仲、人參組成。傅山在益經(jīng)湯方后注明“此方心肝脾腎四經(jīng)同治藥也。妙在補(bǔ)以通之，散以開之……”，且云此方“連服八劑而經(jīng)通矣，服三十劑而經(jīng)不再閉，兼可受孕”?？梢姳痉骄哂辛己玫闹委熉殉苍缢サ呐R床功效。而現(xiàn)代臨床應(yīng)用也證實(shí)，益經(jīng)湯對(duì)于繼發(fā)性閉經(jīng)、不孕癥、圍絕經(jīng)期綜合征都有著顯著的療效［2－4］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雷公藤可明顯損傷大鼠卵巢組織萎縮，使各級(jí)卵泡減少，尤其是成熟卵泡減少，因此雌激素分泌減少，故E2水平比較，模型組較空白組明顯降低，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明造模成功。而FSH各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。益經(jīng)湯可使實(shí)驗(yàn)性卵巢早衰大鼠降低的雌激素水平升高并接近正常水平，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且療效以益經(jīng)湯高劑量組為最好。說明益經(jīng)湯具有促進(jìn)各級(jí)卵泡發(fā)育，尤其是促使優(yōu)勢(shì)卵泡成熟化從而促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖，增加雌激素分泌，對(duì)卵巢早衰有較好的治療效果。

［1］傅山.傅青主女科［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991:27.

［2］宋永秀，解祥麗.益經(jīng)湯治療繼發(fā)性閉經(jīng)28例［J］.中國(guó)民間療法，2004，12(3):45 －46.

［3］張秀梅，和嵐.益經(jīng)湯加減治療虛性閉經(jīng)34例體會(huì)［J］.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，31(5):585 －587.

［4］張素香，陳燕妮.中西醫(yī)結(jié)合治療卵巢早衰［J］.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2010，10(1):38 －40.