龐玉林，秦桂香

（長春市傳染病院，吉林 長春130123）

結(jié)核菌快速耐藥基因芯片檢查是近年來新開展的結(jié)核診斷技術(shù)，可以直接進行分枝桿菌屬鑒定及耐藥性分析，適用于不同類型標(biāo)本，具有簡便、快速、靈敏度高和特異度高等優(yōu)點［1］。但多數(shù)使用痰標(biāo)本行此項檢查，且多使用結(jié)核菌涂片陽性標(biāo)本進行檢查。對于無痰或者少痰，且需要明確診斷的患者此項檢查則受到限制。我院于2012年4月－2013年2月嘗試使用支氣管肺泡灌洗液作為標(biāo)本做結(jié)核菌耐藥基因芯片檢查，同時行經(jīng)纖支鏡肺活檢?，F(xiàn)回顧分析此期間149例有明確病理結(jié)果的支氣管鏡肺泡灌洗液耐藥芯片檢查結(jié)果，分析其臨床診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 男78例，女71例，年齡在15－71歲，平均37.5歲，其中左上葉病變5例，左舌葉病變25例，左下葉病變34例，右上葉病變12例，右中葉病變30例，右下葉病變43例。

1.2 方法

按常規(guī)進行有關(guān)術(shù)前檢查，用2%利多卡因霧化吸入15分鐘后試用OLYMPUS P60纖維支氣管鏡插入，逐步檢查，在肺CT顯示肺內(nèi)病變的葉或者段支氣管開口注入生理鹽水，每次20毫升，3－4次，收集灌洗液，至少需收集20毫升灌洗液。然后根據(jù)情況行肺活檢。

結(jié)核菌快速耐藥基因芯片試劑盒購自北京博奧生物有限公司，GCT檢測結(jié)核分枝桿菌 收集臨床標(biāo)本，提取核酸、PCR擴增、芯片雜交以及結(jié)果判讀等按北京博奧生物有限公司提供的標(biāo)準(zhǔn)操作說明進行。收集到的灌洗液用15，000轉(zhuǎn)離心10分鐘后去掉上清液。各項檢查嚴(yán)格按照檢查程序進行檢測。

2 結(jié)果

149例患者中經(jīng)病理結(jié)果確診肺結(jié)核70例，支氣管結(jié)核62例，肺癌17例。耐藥芯片診斷肺結(jié)核68例，敏感性97.14%，特異性100%；耐藥芯片診斷支氣管結(jié)核50例，敏感性80.65%，特異性100%；17例肺癌樣本耐藥芯片檢測結(jié)核均陰性；總體診斷符合率90.60%。

表1 耐藥芯片檢測肺結(jié)核、支氣管結(jié)核及肺炎的敏感性及特異性

149例患者的耐藥芯片與病理診斷行比較，共符合者135例（90.60%）；兩種診斷結(jié)果存在一致性，Kappa值為0.849（P＜0.05），可以認為兩種診斷方法一致性較高。

表2 耐藥芯片與病理診斷肺結(jié)核、支氣管結(jié)核及肺炎比較

3 討論

近年來結(jié)核病疫情呈現(xiàn)重新上升的趨勢，已經(jīng)成為傳染病中的第一號殺手和最大的死亡病因。由于抗結(jié)核藥物的不規(guī)范治療，患者體內(nèi)的結(jié)核桿菌對多種抗結(jié)核藥物發(fā)生耐藥，從而形成耐多藥結(jié)核病，這是結(jié)核病疫情重新上升的最主要原因之一［2］。肺結(jié)核診斷主要依賴于痰標(biāo)本中查到分枝桿菌，對于結(jié)核病人標(biāo)本，其結(jié)核分枝桿菌的檢出結(jié)果受多種因素限制：包括病理狀況，例如結(jié)核病變性質(zhì)、病變嚴(yán)重程度、病變是封閉或開放的、病變排出的菌量及排出的間歇時間；結(jié)核分枝桿菌狀態(tài)，例如代謝及繁殖是否旺盛、是否處于休眠狀態(tài)，細菌形態(tài)多樣性等因素［3］，導(dǎo)致大多數(shù)為菌陰肺結(jié)核患者；另外由于部分體檢時發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)陰影患者全身癥狀及呼吸道癥狀輕微或者無癥狀，患者無痰或者少痰，難以使用痰標(biāo)本做出早期診斷及鑒別診斷。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會《肺結(jié)核診斷和治療指南》，支氣管或肺部組織病理檢查證實為結(jié)核性改變?yōu)榫幏谓Y(jié)核診斷的主要指標(biāo)，但經(jīng)纖支鏡肺活檢的病理陽性率也受限于肺內(nèi)病灶位置、大小，也存在局限性，而纖支鏡肺泡灌洗液則擴大了檢查范圍，肺內(nèi)各葉段均可行肺泡灌洗。我院嘗試使用有明確病理結(jié)果的支氣管肺泡灌洗液行耐藥基因芯片檢查，結(jié)果顯示特異性為100%，未發(fā)現(xiàn)假陽性，敏感性較高，對于肺結(jié)核的診斷有明確的臨床意義，同時陽性結(jié)果做耐利福平基因rpoB及耐異煙肼katG基因、inhA基因檢測，對肺結(jié)核患者的治療有指導(dǎo)意義。

假陰性的原因主要考慮灌洗液中存在干擾固相雜交的物質(zhì)，其次考慮同肺泡灌洗的手法、灌洗液的回收等因素導(dǎo)致灌洗液中結(jié)核菌DNA含量少［4］，影響檢查結(jié)果。支氣管結(jié)核肺泡灌洗液敏感性低于肺結(jié)核，原因考慮同支氣管結(jié)核多造成管腔狹窄，灌洗液進入肺泡量少，回收困難，部分為支氣管沖洗液，影響檢查結(jié)果。周揚等對基因芯片診斷耐多藥結(jié)核病的臨床多中心研究認為與傳統(tǒng)絕對濃度法藥敏結(jié)果比較仍存在一定差異，不能完全取代，但仍認為基因芯片法在臨床耐藥結(jié)核病的診斷中有廣闊的應(yīng)用前景，與傳統(tǒng)藥敏方法結(jié)合將為臨床工作提供更可靠的依據(jù)［5］。

支氣管肺泡灌洗液結(jié)核菌快速耐藥基因芯片檢查，敏感性、特異性均較高，無假陽性，同時可做利福平、異煙肼的耐藥基因測定，在一周內(nèi)出結(jié)果，對肺結(jié)核患者的診斷、指導(dǎo)治療均有意義，值得推廣。

［1］唐神結(jié).結(jié)核病臨床診治進展年度報告（2011）.北京：人民衛(wèi)生出版社，2012.6：40－41.

［2］姚春艷，張立群，府偉靈，等.應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌耐藥基因［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010，20（11）：1501.

［3］康麗軍，洪 峰.結(jié)核／非結(jié)核分枝桿菌核酸快速檢測方法臨床應(yīng)用價值［J］.中國防癆雜志，2011，33（5）：263.

［4］唐神結(jié)，高 文.現(xiàn)代結(jié)核病學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011.7：99.

［5］周 揚，歐喜超，等.基因芯片診斷耐多藥結(jié)核病的臨床多中心研究［J］.臨床微生物學(xué)，2011，34（9）：793.