劉紅煜，劉樹民，于棟華，李偉，王加志

(1．黑龍江生物科技職業(yè)學院，黑龍江 哈爾濱 150025;2．黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040;3．黑龍江中醫(yī)藥大學佳木斯學院，黑龍江 佳木斯 154007)

松針(Pineneedles)為松科(Pinaceae)松屬(Pinus)植物的針狀葉?，F(xiàn)代研究表明，松針提取物中富含黃酮類化合物，有抗氧自由基作用［1－4］。本研究試圖通過探討松針總黃酮對飲食誘導肥胖大鼠自由基和血脂代謝的影響，為松針的減肥作用機制的研究提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 實驗對象 清潔級Wistar(4月齡)大鼠40只，雌雄各半，體質量(200±20)g，購于上海斯萊克實驗動物中心。適應性喂養(yǎng)1周后隨機分為4組，每組10只，分別為空白對照組(空白組)、膳食誘導肥胖組(模型組)、藥物治療組(治療組)和維生素E對照組(對照組)。

1．2 實驗材料 樟子松松針，采自黑龍江省大興安嶺塔河，經(jīng)植物專家檢驗、鑒定為樟子松松針。

1．3 總黃酮的制備 新鮮松針洗凈，干燥后稱取200g，置具塞圓底燒瓶中，加入70%乙醇10倍量回流提取2次，2h/次。減壓收干，熱蒸餾水分散，靜置后得棕黃色溶液及黑綠色沉淀，取棕黃色濾液減壓蒸干，經(jīng)聚酰胺柱處理，50%醇水洗脫組分為受試樣品［5］。蒸餾水溶解，配成含生藥1g/ml受試液備用。

1．4 動物實驗預處理 高脂飼料配方如下:基礎飼料50%、豬油10%、蔗糖20%、豬膽鹽1%、雞蛋10%、奶粉9%。每周稱重，飼養(yǎng)12周。松針總黃酮灌胃給藥4周，于末次給藥后，禁食不禁水12h，烏拉坦腹腔注射麻醉，門靜脈采血，4500 轉離心15min分離得血清，測定血脂水平;立即摘取肝臟并用預冷的生理鹽水洗凈血液，濾紙吸干，按體積比1:9 加入低溫預冷pH7．2的磷酸鹽緩沖液勻漿，4℃離心(5000r/min)15min，取上清液測定抗氧化酶水平。

1．5 檢測指標和方法 丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)和過氧化氫酶(CAT)，血清總膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)、血清極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL－C)，測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，嚴格按試劑盒說明進行測定。

1．6 統(tǒng)計學處理

用SPSS 13．0 軟件對所有實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，對數(shù)據(jù)進行方差分析和t檢驗，結果以均數(shù)±標準差(±s)表示。顯著性水平定為P＜0.05 或P＜0.01。

2 實驗結果

2．1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響

與模型組比較，治療組SOD、GSH－Px和CAT的活性顯著增強，MDA含量顯著降低(P＜0．05)。見表1。

表1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響(±s)

表1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0．05。

nSOD(u/ml)GSH－Px(u/ml)MDA(μmol/L)CAT(u/mgprot)空白組 10 369．15 ±40．65393．75 ±45．16 4．80 ±0．11 269．66 ±29．70模型組 10 323．08 ±39．39356．16 ±42．12 6．01 ±0．13 142．82 ±26．33治療組 10 371．88 ±41．87*432．03 ±65．02*4．89 ±0．20*210．29 ±13．37*對照組 10 358．80 ±40．08*412．33 ±62．12*4．82 ±0．18*201．81 ±11．77*

2．2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響

結果顯示，治療組大鼠血清血脂水平與模型組相比，LDL－C、VLDL－C、TC、TG 都顯著降低，差異顯著(P ＜0．05)。見表2。

表2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響(±s)

表2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響(±s)

注:與模型組相比，*P ＜0．05。

組別 nLDL－C(mmol/L)VLDL－C(mmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)10 0．20 ±0．09 1．04 ±0．11 1．27 ±0．15 0．24 ±0．11模型組 10 1．74 ±0．71 8．94 ±2．6810．21 ±2．49 1．93 ±0．66治療組 10 0．79 ±0．07*5．35 ±1．37*6．27 ±1．70*0．77 ±0．39*對照組 10 0．36 ±0．10*2．96 ±0．67*3．36 ±0．72*0．42 ±0．29空白組*

3 討論

肥胖癥是一種機體能量代謝障礙性疾病，是心腦血管疾病和糖尿病的高發(fā)危險因素，因為生活習慣的改變而在發(fā)達國家中高發(fā)［6］。

有研究顯示，肥胖本身會造成自由基生成過多和消除不足［7－8］，氧自由基使細胞產(chǎn)生脂質過氧化，進一步導致其功能受損，產(chǎn)生多種臟器功能障礙。通過體外培養(yǎng)3T3 脂肪細胞的研究顯示，H2O2 作用于培養(yǎng)的脂肪細胞，會使細胞氧化應激標記物上升［9］。而機體內存在著自由基防御酶，通過SOD歧化O－2 生成的H2O2，并在CAT作用下分解為H2O和O2，阻斷毒性更強的羥自由基產(chǎn)生，GSH－Px主要作用是以GSH為底物，與SOD、CAT協(xié)同作用清除機體內的各種氧自由基，以減輕或阻斷脂質過氧化反應，保護細胞免受氧化損傷。

本實驗采用飲食性高脂血癥動物模型實驗方法。主要用于降血脂藥物的篩選和評價，以及對人類高脂血癥的研究。因大鼠對外源性膽固醇的吸收率高，對血脂的清除能力低，且便于采血和飼養(yǎng)管理，是一種比較理想的研究模型。

天然抗氧化劑松針總黃酮可以使大鼠抗氧化酶SOD、GSH－Px、CAT活性上升，MDA 含量下降，抑制脂質過氧化反應和自由基產(chǎn)生，并能調節(jié)血脂代謝，對諸如糖尿病、高血壓、動脈硬化等一系列并發(fā)癥有較好的防治作用。

［1］ 邢雁霞，劉斌鈺，李麗芬．松針對小鼠應激能力和自由基代謝的影響［J］．中國預防醫(yī)學雜志，2010，11(3):298－300．

［2］ 曾明，李守漢，郭層城，等．松針提取液對小鼠骨骼肌自由基代謝和運動能力的影響［J］．北京體育大學學報，2006，29(4):484－485．

［3］ 孔慶峰，楊金宇，潘西芬．松針藥理作用研究進展［J］．中國醫(yī)藥導報，2010，7(26):16－17．

［4］ 俞靈鶯，李向榮．植物黃酮類抗糖尿病及其并發(fā)癥的研究進展［J］．國外醫(yī)學·衛(wèi)生學分冊，2000，27(6):331－335．

［5］ 樊鐵波，劉紅煜，湯青，等．HPLC法測定松針中二氫槲皮素含量［J］．中國藥師，2009，12(8):1046－1048．

［6］ 支滌靜，沈水仙．肥胖的危害及預后［J］．中國全科醫(yī)學，2003，6(4):2821－2822．

［7］ 王焰山．松針提取液對實驗性高脂血癥及過氧化作用的影響［J］．北京中醫(yī)大學學報，2001，24(2):35－37．

［8］ 羅蓉．肥胖與自由基［J］．國外醫(yī)學·內分泌分冊，2004，31(24):9－10．

［9］ JeBailey L．Ceramide－and oxidant－induced insulin resistanceinvolve loss of insulin－dependent rac－activation and actinremodeling in muscle cells［J］．Diabetes，2007，56:394－403．