徐金鳳，呂書(shū)勤，劉宏炳，張 倩，楊建波，孫 薇，張震中

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院神內(nèi)二科，烏魯木齊 830001)

目前，腦中風(fēng)的高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率嚴(yán)重危害人類(lèi)健康，特別是老年人，一直受到廣大臨床和基礎(chǔ)科研工作者的高度重視。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，57%～80%為缺血性腦卒中[1]。本研究使用維藥強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嗉词菑恼{(diào)節(jié)異常黑膽質(zhì)體液辨證，使用傳統(tǒng)蜜膏制劑治療腦血栓疾病，主要基于對(duì)這種異常體液質(zhì)進(jìn)行基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究,試圖發(fā)現(xiàn)其有效的作用機(jī)制和治療途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

維藥強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嘤尚陆S吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院藥劑科負(fù)責(zé)執(zhí)行制備；步長(zhǎng)腦心通膠囊0.4 g/粒購(gòu)自咸陽(yáng)步長(zhǎng)制藥有限公司(批號(hào)20120622)；腫瘤壞死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)試劑盒由中國(guó)人民總軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免所提供；細(xì)胞黏附因子(ICAM-1)試劑盒購(gòu)自晶美生物工程有限公司；瑞士 HAMILT MICROLAB STAR 酶聯(lián)儀由江蘇省醫(yī)療電子研究所提供；YZ20T4型手術(shù)顯微鏡購(gòu)自蘇州醫(yī)療器械總廠(chǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型制備 SD雄性大鼠60只，體質(zhì)量250±20 g，由新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。參照 Longa 等[2]報(bào)道的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，改良后制作MCAO(大腦中動(dòng)脈栓塞)模型。模型組大鼠的制備與腦梗死模型的制備基本相同,其區(qū)別在于栓線(xiàn)由頸外動(dòng)脈的斷端插入頸內(nèi)動(dòng)脈后,保留1 min左右,就將栓線(xiàn)拔出,將頸外動(dòng)脈斷端結(jié)扎,其余同腦梗死模型組的制備。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組 將 60 只SD 雄性大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組(15只),給予正常飼料，自由飲水;模型組(15只)造模成功后生理鹽水灌胃;陽(yáng)性藥物組造模成功后步長(zhǎng)腦心通水溶液灌胃;治療藥物組(15只)造模后給予強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹喙辔福?組造模采用線(xiàn)栓法制成MCAO(大腦中動(dòng)脈栓塞)模型(15只)。

1.2.3 標(biāo)本采取與觀察指標(biāo) 造模成功后動(dòng)物分組，分別連續(xù)灌胃7 d。末次灌胃后1 h，用氯胺酮、安定及阿托品各1支配伍稀釋至10 ml(0.75 ml/100 g)腹腔注射麻醉，打開(kāi)腹腔，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血3～4 ml，待其凝固后以3000 r/min離心 10 min，血清分離，用移液器吸取血清移入 EP 管，-80 ℃冰箱保存，以備測(cè)ICAM-1活性、IL-1β、TNF-α的含量和水平。經(jīng)腹主動(dòng)脈取血后，斷頭開(kāi)顱取出腦組織，用生理鹽水沖洗，將殘血洗凈用濾紙吸干水分，部位選右側(cè)大腦額葉皮層同一部位取腦組織 100 mg 左右，按照 100 mg/1 ml 比例加入生理鹽水用勻漿器溶漿 3～5 min，同樣方法離心并保存，以備測(cè)定腦組織ICAM-1的活性、IL-1β、TNF-α的含量及水平。

大鼠斷頭取腦后，各組隨機(jī)留取2只SD大鼠，切除其額極和枕極，于-20 ℃冰箱中速凍2～3 min后，再行冠狀切片, 以2 mm的間距切片，將其浸入2%TTC的磷酸鹽緩沖溶液中，避光染色30 min，在37 ℃的水浴箱中進(jìn)行。將制作好的腦片取出后放入10%的甲醛溶液中固定24 h，再用數(shù)碼相機(jī)拍照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 對(duì)局灶性腦缺血大鼠血清中TNF-α、IL-1β、ICAM-1的測(cè)定

表1顯示，治療藥物組強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嘟M和陽(yáng)性藥物組步長(zhǎng)腦心通組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)，但治療藥物組強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嘟M和陽(yáng)性藥物組步長(zhǎng)腦心通組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 對(duì)血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1含量的影響

注：與假手術(shù)組比較：*P<0.001；與模型組比較：**P<0.05，△P<0.01

2.2 對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織溶漿TNF-α、IL-1β、ICAM-1的測(cè)定

表2顯示，藥物組強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嘟M和陽(yáng)性藥物組步長(zhǎng)腦心通組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)，但藥物組強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嘟M和陽(yáng)性藥物組步長(zhǎng)腦心通組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 對(duì)腦組織溶漿TNF-α、IL-1β、ICAM-1含量的影響

注：與假手術(shù)組比較：*P<0.001；與模型組比較：**P<0.05，△P<0.01

2.3 大鼠TTC染色比較

圖1～3顯示，大鼠腦組織切片可見(jiàn)，腦組織呈紅白區(qū)域交界，缺血壞死區(qū)顏色呈白色，正常腦組織區(qū)域呈紅色。模型組可見(jiàn)白色區(qū)域較多，提示缺血面積較大(見(jiàn)圖1)；步長(zhǎng)腦心通膠囊組白色區(qū)域較模型組明顯縮小，提示腦組織缺血面積較模型組有明顯減少(見(jiàn)圖1、2)；維藥強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嘟M白色區(qū)域較模型組明顯縮小，較步長(zhǎng)腦心通膠囊組白色區(qū)域變化不大，提示較模型組其缺血面積較明顯減少，較陽(yáng)性藥物步長(zhǎng)腦心通膠囊組腦組織缺血面積變化不大。

圖1 模型組

圖2 步長(zhǎng)腦心通膠囊組

圖3 維藥強(qiáng)力組

3 討論

缺血性腦中風(fēng)是一種高發(fā)病，嚴(yán)重危害人類(lèi)尤其是老年人的身體健康，給家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)，而臨床上缺血性腦中風(fēng)最常見(jiàn)的發(fā)病部位是大腦中動(dòng)脈的閉塞，這與大腦中動(dòng)脈特殊的生理解剖結(jié)構(gòu)相關(guān)[3,4]。對(duì)于缺血性腦中風(fēng)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究有很多成果，但目前尚沒(méi)有確切快捷有效的治療方法。缺血性腦中風(fēng)急性期對(duì)腦組織的損害程度不同，結(jié)果也不同，它影響到以后病情的發(fā)展及機(jī)體功能康復(fù)的程度。如何減輕早期腦損傷對(duì)于缺血性腦中風(fēng)死亡率的降低、致殘率的減少、各類(lèi)并發(fā)癥的出現(xiàn)減少發(fā)生具有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。當(dāng)前有關(guān)腦損傷急性期的相關(guān)原因很多，也有不少研究者發(fā)現(xiàn)這種情況,許多細(xì)胞因子介導(dǎo)出現(xiàn)在炎癥反應(yīng)之前，如ICAM-1、IL-1β、TNF-α的表達(dá)。在目前現(xiàn)狀下,中醫(yī)民族醫(yī)治療本病具有一定優(yōu)勢(shì), 對(duì)此我們從維吾爾醫(yī)角度進(jìn)行研究,用藥干預(yù)后再深入探討缺血性中風(fēng)病的病理機(jī)制,從而尋找安全、有效的治療方法，這樣緩解腦中風(fēng)引起的神經(jīng)功能缺損癥狀、預(yù)防腦中風(fēng)的復(fù)發(fā)有著很重要的意義[5]。

為研究缺血性腦中風(fēng)的發(fā)病規(guī)律和發(fā)病機(jī)制，研究者依據(jù)臨床缺血性腦中風(fēng)病人的一般情況，成功創(chuàng)建了很多局灶性的腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?。MCAO大腦中動(dòng)脈線(xiàn)栓法是由Zea Longa首創(chuàng)的，該模型的目的是阻斷流向基底節(jié)區(qū)、額頂皮質(zhì)區(qū)的大部分血供，通過(guò)阻斷解剖結(jié)構(gòu)特殊的大腦中動(dòng)脈，將栓線(xiàn)通過(guò)頸內(nèi)動(dòng)脈達(dá)到大腦中動(dòng)脈，阻塞MCA的開(kāi)口處[6]。按照大腦中動(dòng)脈線(xiàn)栓法制備大鼠局灶性腦缺血模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物狀態(tài)穩(wěn)定，重復(fù)性好、成模率高。

“維藥強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹唷背鲎跃S醫(yī)經(jīng)典醫(yī)著《如意處方》,屬《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·維吾爾藥分冊(cè)》1999年第一版收載品種，是維醫(yī)臨床常用傳統(tǒng)古方[7]。本藥是由新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院藥劑科負(fù)責(zé)執(zhí)行制備，在傳統(tǒng)醫(yī)方基礎(chǔ)上，經(jīng)現(xiàn)代生產(chǎn)工藝加工制成的現(xiàn)代維藥。 維藥強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嗍怯筛山?、胡?黑)、蓽撥、肉桂、余甘子、毛訶子肉、白花丹、廣防

己、中亞白及、奶桃、白皮松子仁、洋甘菊、洋甘菊子、葡萄干(紅)流浸膏等藥物組成，性狀為棕色蜜膏，氣特異、味甜、辛、微辣，具有強(qiáng)壯肌體、止痛、益腎、補(bǔ)腦之功效，用于偏癱、關(guān)節(jié)骨痛、癡呆舌重、腰酸陽(yáng)痿、齒松等。

本研究利用藥物組強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嘟M和陽(yáng)性藥物組步長(zhǎng)腦心通組治療腦血栓，結(jié)果證實(shí)維藥強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嗫筛纳芃CAO大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀，減少腦梗死面積，減輕腦組織病理學(xué)損傷的改變;可以通過(guò)抑制TNF-α、IL-1β、ICAM-1的產(chǎn)生,達(dá)到緩解缺血缺氧后炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng),從而控制局部組織水腫和壞死的發(fā)生,間接地達(dá)到保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用，可能是維藥強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹嘀委熌X缺血疾病的基礎(chǔ)。

綜上所述，維藥強(qiáng)力瑪?shù)猛亮Π喬孛鄹鄬?duì)SD大鼠局灶性腦缺血模型具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制腦缺血后多種炎癥相關(guān)細(xì)胞因子ICAM-1、IL-1β、TNF-α、的級(jí)聯(lián)性表達(dá)有關(guān)。

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