付弘赟，周佰成

（青海省畜牧總站，西寧 810001）

青海高原毛肉兼用半細(xì)毛羊血清淀粉酶多態(tài)性研究

付弘赟，周佰成

（青海省畜牧總站，西寧 810001）

采用聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法研究了青海高原毛肉兼用半細(xì)毛羊的血清淀粉酶（AMY）的多態(tài)性。結(jié)果表明：青海高原毛肉兼用半細(xì)毛羊AMY存在AMY1、AMY2和AMY3三種同工酶，但只有AMY2具有多態(tài)性；AMY2同工酶具有顯現(xiàn)酶活性的AMY2 A和不顯現(xiàn)酶活性的AMY2 O兩種表型，其表型分布分別為27.59%和72.41%，以AMY2 O為優(yōu)勢(shì)基因型；青海半細(xì)毛羊AMY2受1對(duì)等位基因AMY2A和AMY2O的支配，其等位基因頻率分別為0.149 1和0.850 9，基因雜合度和基因均質(zhì)度指數(shù)分別為0.253 8和0.737 4。

青海高原毛肉兼用半細(xì)毛羊；血液淀粉酶；多態(tài)性

青海高原毛肉兼用半細(xì)毛羊（以下簡(jiǎn)稱青海半細(xì)毛羊）是青海省于20世紀(jì)80年代培育的綿羊新品種，對(duì)青藏高原獨(dú)特的自然環(huán)境具有良好的適應(yīng)性，抵抗力強(qiáng)，產(chǎn)毛量和凈毛率高，生長(zhǎng)發(fā)育快，肉用性能好，深受廣大農(nóng)牧民喜愛。血清淀粉酶的多態(tài)性最早由Ashton［1］在牛中報(bào)道的，當(dāng)時(shí)他將其命名為線蛋白，后來才證實(shí)它是一種α淀粉酶［2］。此后，佐佐木清綱［3］證實(shí)綿羊的AMY存在多態(tài)性，有9種電泳表型。Poжkoв及其同事對(duì)有蹄動(dòng)物AMY進(jìn)行了比較電泳研究，提出了有蹄動(dòng)物血清AMY有AMY1、AMY2和AMY3三種同工酶。張才駿等［4］的研究也證實(shí)，綿羊AMY存在有AMY1、AMY2和AMY3三種同工酶，其中只有AMY2同工酶具有多態(tài)性，而且受AMYA和AMYO一對(duì)等位基因的控制。有關(guān)青海半細(xì)毛羊AMY多態(tài)性的研究報(bào)道甚少。鑒此，研究青海半細(xì)毛羊AMY多態(tài)性，為青海半細(xì)毛羊的遺傳特性、品種選育、品種改良等方面提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇29只青海省海晏縣哈勒景鄉(xiāng)牧民自繁的成年青海高原毛肉兼用半細(xì)毛羊（全部臨床健康）作為試驗(yàn)動(dòng)物，終年放牧飼養(yǎng)，冬季給予適量的草料補(bǔ)飼。

1.2 血樣采集及處理

出牧前從試驗(yàn)羊頸靜脈采取非抗凝血5 mL，立即送實(shí)驗(yàn)室，3 000 r/min離心10 min，分離血清，并保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 電泳

按胡能書等［5］記載的聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法分離所有試驗(yàn)羊的AMY同工酶酶譜，同一樣本進(jìn)行兩次電泳，分別用加鈣和不加鈣的兩種pH值為5.0，濃度0.15 mmol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液孵育。AMY同工酶譜分析根據(jù)區(qū)帶泳動(dòng)速度、酶活性顯現(xiàn)與否、鈣離子的影響，參考張才駿等［4，6］的記載命名AMY同工酶、判定表型和分析酶譜。

1.4 數(shù)據(jù)分析

根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算基因頻率，根據(jù)AMY1、AMY2電泳變異體受顯隱性等位基因控制的假設(shè)，由所顯示的電泳表型直接推斷基因型，計(jì)算基因頻率。

基因雜合度：

式中Pi為某一位點(diǎn)第i個(gè)等位基因頻率。

基因均質(zhì)度指數(shù)：

式中n為等位基因數(shù)，P1，P2，…，Pn為基因頻率。

有效等位基因數(shù)：

式中Pi為某一位點(diǎn)第i個(gè)等位基因頻率。

2 結(jié)果

2.1 同工酶酶譜

被檢羊的血清經(jīng)電泳分離出AMY1、AMY2和AMY3三種表型，即AMY1的泳動(dòng)速度最快，全部試驗(yàn)羊都顯現(xiàn)一條酶活性區(qū)帶（見圖1）；AMY2在沒有鈣離子的孵育液中不顯現(xiàn)酶活性，在含有鈣離子的孵育液中，8只試驗(yàn)羊顯現(xiàn)酶活性區(qū)帶，而其余21只不顯現(xiàn)酶活性（見圖2）。

圖2 青海高原毛肉兼用半細(xì)毛羊AMY2電泳圖譜

2.2 基因型頻率、基因頻率

被檢青海高原毛肉兼用半細(xì)毛羊AMY基因型頻率、基因頻率見表1。

表1 青海半細(xì)毛羊AMY基因型頻率、基因頻率、基因雜合度和基因均質(zhì)度指數(shù)

3 討論

1）由試驗(yàn)結(jié)果可見，青海半細(xì)毛羊血清AMY存在AMY1、AMY2和AMY3三種同工酶，AMY2同工酶只在加鈣的孵育液中顯現(xiàn)酶活性，AMY1和AMY3同工酶只有一條酶活性區(qū)帶而呈單態(tài)，AMY2同工酶具有顯現(xiàn)酶活性的AMY2 A和不顯現(xiàn)酶活性的AMY2 O兩種表型而表現(xiàn)出多態(tài)性，該結(jié)果與張才駿等［7-9］、雷良煜［10］對(duì)青海歐拉型藏羊、青海細(xì)毛羊AMY多態(tài)性的研究結(jié)果一致。

2）張才駿等［4］通過交配和系譜資料進(jìn)行分析，證實(shí)綿羊AMY2位點(diǎn)受AMY2A和AMY2O一對(duì)等位基因的控制，其中AMY2A對(duì)AMY2O呈顯性，顯現(xiàn)酶活性的AMY2A應(yīng)包括AMY2A/AMY2A和AMY2A/AMY2O兩種基因型，而不顯現(xiàn)酶活性的AMY2O的表型即為AMY2O/AMY2O型，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。然而本試驗(yàn)結(jié)果與佐佐木清綱利用淀粉凝膠電泳對(duì)美利奴羊、薩?？搜蚝投嗯裂虻裙?00只羊的AMY研究中發(fā)現(xiàn)有A、B、C、AB、AC、BC、AA、BB、CC九種電泳表型［3］，以及尹鎮(zhèn)華等［11］對(duì)3個(gè)品種150只羊AMY的研究中提出綿羊AMY受AMY1、AMY2、AMY3、AMY4、AMY5和AMY6六個(gè)等位基因的控制，存在12種基因型假設(shè)的報(bào)道均不一致。但是，不論是佐佐木清綱還是尹鎮(zhèn)華等都沒有通過配種資料分析確定AMY的遺傳模式。作者等認(rèn)為，本試驗(yàn)與上述兩項(xiàng)研究結(jié)果不同的主要原因是他們均沒有通過系譜資料進(jìn)行后裔測(cè)定和分析，而將本應(yīng)屬于受3個(gè)基因座等位基因控制的3種AMY同工酶混合在一起分析和命名的結(jié)果。此外，因本次試驗(yàn)樣本較少，可能某些位點(diǎn)的蛋白多態(tài)性沒有表現(xiàn)出來。

［1］Ashton G C.A genetic mechanism for thread-protein polymorphism in cattle［J］.Nature，1958，182：65-66.

［2］Ashton G C.Serum amylase（thread protein）polymorphism in cattle［J］. Genetics，1965，51(3)：431-437.

［3］佐佐木清綱.家畜的血液型及其應(yīng)用［M］.李世安，譯.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1982：207-209.

［4］張才駿，張武學(xué)，張貞林，等.青海細(xì)毛羊血清淀粉酶的多態(tài)性研究［J］.中國(guó)養(yǎng)羊，1994（4）：22-24.

［5］胡能書，萬國(guó)賢.同工酶技術(shù)及其應(yīng)用［M］.長(zhǎng)沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1985：112-117.

［6］張才駿，李軍祥.青海藏羊血清淀粉酶多態(tài)性的研究［J］.青海畜牧獸醫(yī)雜志，1994，24（5）：7-9.

［7］張才駿，李清軍，楊殿斌，等.青南藏羊血清酯酶的多態(tài)性［J］.中國(guó)養(yǎng)羊，1992（4）：31-33.

［8］張才駿，王勇，盧福山.歐拉羊血清粉酶同工酶酶譜的研究［J］.青海畜牧獸醫(yī)雜志，2007，37（1）：3-5.

［9］張才駿.青海半細(xì)毛羊血液生化遺傳多態(tài)性的研究［J］.青海畜牧獸醫(yī)雜志，2004，34（1）：3-5.

［10］雷良煜.歐拉型藏綿羊血清淀粉酶的多態(tài)性研究［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013，11（1）：66-67.

［11］尹鎮(zhèn)華，謝曼琳，文浴蘭，等.綿羊血液蛋白質(zhì)多態(tài)性的研究［C］//中國(guó)畜禽遺傳育種進(jìn)展.長(zhǎng)沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1993：147-151.

S826.1

A

2095-3887（2014）06-0027-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.06.007

2014-09-12

青海加什科羊選育技術(shù)研究項(xiàng)目（2008-N-115）

付弘赟（1984-），女，畜牧師，碩士研究生。