彭麗敏，栗 妍(綜述)，朱 莉(審校)

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，哈爾濱 150001)

女性生殖道三大惡性腫瘤近年來發(fā)病率明顯上升，并呈年輕化的趨勢，由于其病因及發(fā)病機制仍不十分清楚，且缺乏早期診斷方法，大多數(shù)患者確診時已屬晚期，失去了最佳治療時機，嚴(yán)重危害著女性健康。腫瘤的耐藥現(xiàn)象是限制腫瘤成功治療的關(guān)鍵，嚴(yán)重影響患者的生存時間。Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitory protein，RKIP)被認(rèn)為腫瘤的轉(zhuǎn)移抑制因子之一，參與細(xì)胞內(nèi)多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)，與細(xì)胞的增殖和凋亡存在密切的關(guān)系，RKIP減少或丟失破壞了細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，可能引起細(xì)胞生長失控，導(dǎo)致腫瘤等疾病的發(fā)生[1]。

1 RKIP

RKIP是磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白家族中的一種小細(xì)胞質(zhì)蛋白，存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中[2]。RKIP在多種組織和不同類型的細(xì)胞中都有表達，如精子細(xì)胞、睪丸上皮細(xì)胞、附睪、前列腺、輸卵管、卵巢、子宮、腎小管上皮、腸系膜淋巴結(jié)、脾巨核細(xì)胞、肝臟、肺細(xì)支氣管、乳腺腺體、甲狀腺等。人RKIP基因定位于第12號染色體q24.22，長約10 000 bp，含4個外顯子。RKIP可調(diào)節(jié)機體生物膜合成、精子發(fā)生等過程，抑制凝血酶、糜蛋白酶、神經(jīng)絲氨酸蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的活性[3]。RKIP是Raf/促分裂原活化的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶激酶(mitogen-activated/extracellular signal-regulated kinase kinase,MEK)/細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)、G蛋白偶聯(lián)受體、核因子κB、促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)等多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的天然調(diào)節(jié)因子，發(fā)揮著抑制腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移以及促進腫瘤細(xì)胞凋亡等多種生物學(xué)功能，與多種疾病相關(guān)。目前，RKIP已被確定為前列腺癌的轉(zhuǎn)移抑制基因，并參與了糖尿病及阿爾茨海默病等病理發(fā)展過程。

2 RKIP與婦科腫瘤

近年來研究表明，RKIP可通過抑制血管生成而抑制前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、黑色素瘤、肺癌、肝癌、甲狀腺癌、胃癌、非霍奇金淋巴瘤等惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移能力，但RKIP在多種惡性腫瘤中均有不同程度的表達減弱或丟失[4]。RKIP在惡性腫瘤中的作用機制已成為研究熱點。

2.1RKIP與宮頸癌 吳景麗等[5]通過實驗檢測69例宮頸癌組織與宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸組織中RKIP的表達，結(jié)果顯示，RKIP在宮頸癌組織中的表達率較宮頸上皮內(nèi)瘤變及正常宮頸組織中降低，RKIP在Ⅱa、Ⅰb期中的陽性表達率顯著低于Ⅰa期宮頸癌組織，在中、高分化宮頸癌組織陽性表達率顯著高于低分化者，在有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達率相對于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著降低，該研究顯示，RKIP表達的減少或缺失與宮頸癌的組織分化、臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，由此推測RKIP可能參與了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程。既往研究表明，RKIP參與宮頸癌中核因子κB信號通路的調(diào)控，通過抑制RKIP的活性能增強核因子κB的轉(zhuǎn)錄，而過度表達RKIP則能減少核因子κB基礎(chǔ)水平的轉(zhuǎn)錄[6]。RKIP能與核因子κB激活途徑的4種激酶(轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1、核因子κB誘導(dǎo)激酶、核因子κB抑制蛋白激酶β和核因子κB抑制蛋白激酶α)之間發(fā)生相互作用，還可以抑制腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的核因子κB抑制物激酶活性，從而抑制核因子κB激活。以上研究均提示RKIP表達下調(diào)或缺失可能通過上調(diào)核因子κB的表達，促進宮頸癌侵襲和轉(zhuǎn)移。

RKIP也參與Raf-1/MEK/ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控。Yeung等[7]的體外研究顯示，RKIP與Raf-1、MEK-1有很強的結(jié)合能力，但與ERK-2結(jié)合能力很弱。RKIP可干擾Raf-1對MEK-1的磷酸化和激活，但是不干擾Raf-1和MEK-1的底物。因此，RKIP為Raf-1的活性和下游MEK/ERK途徑的激活設(shè)定了一個閾值。Yeung等[8]報道，RKIP可破壞Raf-1和MEK-1形成的復(fù)合物，使Raf-1脫離MEK-1。RKIP可以分別與Raf-l和MEK-1結(jié)合，當(dāng)與其中任意一個結(jié)合時就足以抑制下游信號。MAPK信號通路參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增值、分化及凋亡等多種生物學(xué)功能，30%的腫瘤中該通路發(fā)生改變，并在侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。RKIP基因是MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的天然抑制因子[8]。Trakul等[9]提出，RKIP可與Raf-1的結(jié)合，從而抑制MAPK通路。當(dāng)Raf-1富集到質(zhì)膜后，RKIP與其結(jié)合，阻止Raf-l與p21活化激酶(p21-activated kinase，PAK)結(jié)合，從而阻斷PAK和絲氨酸蛋白酶對Raf-l的磷酸化[10]。在致瘤因素的作用下，細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)加強，促進細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。

孟琴等[11]通過免疫組織化學(xué)的方法檢測30例宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織RKIP的表達情況，RKIP在正常宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變、鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽性表達依次降低，RKIP在中、高分化鱗狀細(xì)胞癌組織陽性表達率顯著高于低分化者，表明從宮頸癌前病變發(fā)展為鱗狀細(xì)胞癌的過程中，RKIP的表達逐漸減少，RKIP的活性下降，對于在形態(tài)學(xué)上尚未達到癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)的重度異型病例中RKIP的表達已經(jīng)下調(diào)。RKIP基因表達的減弱或丟失與宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)，其原因究竟是由于基因缺失或突變的內(nèi)在性機制，還是由于調(diào)節(jié)RKIP信使RNA或蛋白水平的外在性機制，還有待進一步研究。

2.2RKIP與卵巢上皮性癌 卵巢上皮性癌占婦科惡性腫瘤的1/3。早期浸潤轉(zhuǎn)移是卵巢上皮性癌最重要的特征之一，也是患者高病死率和難以治愈的根本原因，但是卵巢上皮性癌發(fā)展及轉(zhuǎn)移機制，目前尚不十分清楚。卵巢上皮性癌和前列腺癌都是內(nèi)分泌相關(guān)性和激素依賴性腫瘤，盡管卵巢上皮性癌和前列腺癌的轉(zhuǎn)移方式是不同的，但是推測其根本調(diào)節(jié)機制轉(zhuǎn)移和定植是守恒的。更重要的是觀察到在人類上皮性卵巢癌中常發(fā)生12q的丟失，而RKIP定位于人類染色體12q24.22[12]。因此,推測RKIP的表達可能與上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移有關(guān)。

有人對三種常見的人卵巢癌細(xì)胞株CAOV-3、OVCAR-3、SKOV-3的RKIP表達水平及其細(xì)胞體外侵襲能力進行分析，提示RKIP的表達水平與其體外侵襲能力呈明顯負(fù)相關(guān)[13]。有研究表明，RKIP的過度表達可以抑制卵巢癌的轉(zhuǎn)移能力，其在卵巢癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和黏附過程中均起到重要作用，RKIP參與了腫瘤轉(zhuǎn)移的調(diào)控，RKIP功能的喪失能增強轉(zhuǎn)化細(xì)胞的浸潤能力，從而促進轉(zhuǎn)移的發(fā)生[14]。在對RKIP的表達與臨床及病理因素關(guān)系分析中發(fā)現(xiàn)，RKIP的表達與患者年齡、病理類型等無關(guān)，而與組織學(xué)分級、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切的聯(lián)系，提示RKIP表達減少或缺失與卵巢上皮性癌侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，并可能預(yù)示患者預(yù)后不良[15]。

卵巢上皮性癌轉(zhuǎn)移是影響其預(yù)后的主要原因。王越等[16]研究發(fā)現(xiàn)，RKIP基因通過腫瘤細(xì)胞的黏附和侵襲兩個重要環(huán)節(jié)來抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移過程，且對腫瘤細(xì)胞的生長也具有顯著的抑制作用，故提出RKIP基因可能并不是卵巢上皮性癌的轉(zhuǎn)移抑制基因，而是卵巢上皮性癌的抑癌基因，RKIP基因很可能通過MEK/ERK信號通路在卵巢癌細(xì)胞增殖、錨定非依賴性生長、黏附性及侵襲性中發(fā)揮作用；通過對卵巢良性腫瘤、交界性腫瘤及卵巢癌組織的免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，RKIP基因在卵巢癌表達減弱或丟失的程度較良性腫瘤和交界性腫瘤顯著，而良性腫瘤和交界性腫瘤之間無顯著差異，因此推測RKIP基因在卵巢交界性腫瘤向卵巢癌轉(zhuǎn)變中可能起重要作用。因此，可將RKIP基因作為交界性腫瘤與卵巢上皮性癌鑒別診斷的一個重要指標(biāo)。

宋繼文等[17]將含有人全長RKIP基因的真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人卵巢癌細(xì)胞中，以不同濃度的順鉑處理細(xì)胞，24 h后觀察細(xì)胞的凋亡情況，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組G0/G1期縮短、S期延長，由此推測，可能是RKIP基因參與細(xì)胞周期的某個調(diào)控點作用的結(jié)果。RKIP抑制卵巢癌細(xì)胞增殖是通過改變細(xì)胞周期進程，而不是促進細(xì)胞凋亡[14]。過度表達RKIP可以增加順鉑對腫瘤細(xì)胞增殖抑制率，增加順鉑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的敏感性，并且影響腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期。宋繼文等[17]的實驗顯示，轉(zhuǎn)染組的凋亡率上升，說明RKIP對卵巢癌在順鉑作用下的凋亡起到了增敏作用，提高RKIP的表達和藥物調(diào)控凋亡存在正相關(guān)性，揭示了增加RKIP的表達能使藥物直接介導(dǎo)凋亡或間接提高腫瘤細(xì)胞對化療的敏感性。目前大多數(shù)化療藥物就是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡清除腫瘤細(xì)胞，細(xì)胞凋亡路徑的破壞導(dǎo)致耐藥性[18]。RKIP基因的轉(zhuǎn)染可以增加卵巢癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性，降低化療藥物的多藥耐藥，為卵巢癌的基因治療開拓了新的思路。

2.3RKIP與子宮內(nèi)膜癌 子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，目前對子宮內(nèi)膜癌的治療方式是以根治性手術(shù)聯(lián)合化療和激素治療為主，術(shù)后化療過程中產(chǎn)生的多藥耐藥現(xiàn)象是限制子宮內(nèi)膜癌成功治療的關(guān)鍵因素。因子宮內(nèi)膜癌對化療不敏感，屬于先天性耐藥的腫瘤，因此基因治療顯得尤為重要，并且有望對早期高分化子宮內(nèi)膜癌的年輕患者可考慮保留生育功能的治療。RKIP已被用作前列腺癌的腫瘤標(biāo)志物，是前列腺癌的一種獨立預(yù)后因子，并在多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)有RKIP的表達，RKIP通過對Raf-1/MEK/ERK等途徑的調(diào)節(jié)抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移，其表達減少或消失可使腫瘤的侵襲性、轉(zhuǎn)移性增強，患者預(yù)后差。RKIP對腫瘤有促凋亡的作用，增加RKIP的表達可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，可以逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥性及間接地提高腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性，有很廣泛的應(yīng)用前景。

子宮內(nèi)膜癌早期浸潤和轉(zhuǎn)移的相關(guān)分子機制至今尚不十分清楚，既往研究表明，RKIP在子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮著重要作用[19]。在某種程度上，子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化可通過轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子Snail的組成性激活而被介導(dǎo)，并且，子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化能夠被轉(zhuǎn)移抑制因子RKIP和上皮鈣黏素抑制。Snail的轉(zhuǎn)錄受核因子κB的調(diào)控，并且Snail可依次抑制RKIP和上皮鈣黏素的轉(zhuǎn)錄。Blechschmidt等[20]研究顯示，在子宮內(nèi)膜癌和轉(zhuǎn)移病灶中有轉(zhuǎn)錄因子Snail的過度表達，其表達增加與上皮鈣黏素下調(diào)存在正相關(guān)關(guān)系，還發(fā)現(xiàn)Snail表達陽性的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株具有較高的遷移潛力。RKIP與Snail在子宮內(nèi)膜癌中的表達及兩者的相關(guān)性是未來研究的焦點，需要進一步探討RKIP在子宮內(nèi)膜癌發(fā)展過程中的作用。

2.4RKIP與其他婦科惡性腫瘤 輸卵管癌是一種罕見的女性生殖道惡性腫瘤，臨床癥狀和體征不典型及早期缺乏特異性的腫瘤標(biāo)志物，術(shù)前很難明確診斷，其病理類型和轉(zhuǎn)移方式與卵巢癌類似，但對其本身發(fā)生、發(fā)展的分子機制的基礎(chǔ)研究較少。有研究表明，水通道蛋白1和水通道蛋白5可能與原發(fā)性輸卵管癌的發(fā)生、發(fā)展有一定的關(guān)系[21]。堿性成纖維細(xì)胞生長因子、血管內(nèi)皮生長因子在原發(fā)性輸卵管癌的發(fā)生、發(fā)展中有促進血管形成的作用[22]。Gadducci等[23]報道，原發(fā)性輸卵管癌術(shù)前CA-125水平>35 U/mL者約85.3%(68.7%Ⅰ～Ⅱ期，94.7%Ⅲ～Ⅳ)，故輸卵管癌患者血清CA-125水平與臨床分期有密切相關(guān)性，血清CA125可作為輸卵管癌的腫瘤標(biāo)志物,對治療效果監(jiān)測、判斷有無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移具有重要臨床價值。迄今為止，尚未見RKIP與輸卵管癌、子宮肉瘤、陰道癌及外陰癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的相關(guān)報道，有待研究。

3 小 結(jié)

RKIP基因是一種具有抑制惡性腫瘤侵犯轉(zhuǎn)移和促進腫瘤細(xì)胞凋亡的轉(zhuǎn)移抑制基因，參與多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控。轉(zhuǎn)移抑制基因功能的丟失是腫瘤細(xì)胞發(fā)展為惡性表型的重要標(biāo)志。已有實驗表明，RKIP的水平變化可以通過電離輻射或化療藥物而被誘導(dǎo)[24-25]。通過增加組織中RKIP的水平可以提高多藥耐藥腫瘤對化療藥物的敏感性，減少術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，保留早期高分化的年輕腫瘤患者的生育功能，避免術(shù)后長時間內(nèi)分泌藥物治療及用藥后隨訪困難和藥物毒性反應(yīng)問題。因此，有必要通過試驗進一步驗證是否能夠通過提高RKIP水平來增加治療手段的療效。RKIP被認(rèn)為是一個重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子、轉(zhuǎn)移抑制因子和判定預(yù)后的指標(biāo)，并有可能成為控制婦科惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的治療靶點。

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