任艷艷

（濰坊護理職業(yè)學院，山東 青州 262500）

趨化因子受體CXCR4與食管鱗癌生物學行為的臨床研究

任艷艷

（濰坊護理職業(yè)學院，山東 青州 262500）

目的 探討趨化因子受體CXCR4與食管鱗癌生物學行為的關系。方法 對37例食管鱗癌患者實施趨化因子受體CXCR4 mRNA與蛋白相對表達量測定，并探討其與食管鱗癌的生物學行為關系。結(jié)果 趨化因子受體CXCR4 mRNA與蛋白相對表達量，與侵及外膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)及TNM分期有關。結(jié)論 檢測CXCR4對預測食管鱗癌的侵襲、轉(zhuǎn)移有重要的臨床價值。

食管鱗癌；趨化因子受體CXCR4；檢測

趨化因子受體是指一種介導趨化因子行使功能的GTP蛋白偶聯(lián)的跨膜受體。研究發(fā)現(xiàn)，CXC類趨化因子受體CXCR4的配體CXCL12多表達于乳腺癌的特異轉(zhuǎn)移部位，如肺、肝臟等，與患者腫瘤生長狀態(tài)有關，可影響腫瘤的侵襲、生長及轉(zhuǎn)移狀態(tài)[1]。但關于這類型趨化因子受體在食管鱗癌方面的報告并不多見，本研究基于這一背景，簡要分析了兩者間的生物學行為，旨在為臨床觀察提供幫助。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2010—2013年收治的食管鱗癌患者37例，所有患者均行手術切術腫瘤，其中男21例、女16例；年齡38～74歲，平均(54.5±8.3)歲。所有患者在行食管鱗癌切除手術之前均經(jīng)過化療或放療治療。收集37例患者的癌組織及癌旁組織，所有收集物均經(jīng)病理學檢查確定為食管鱗癌。TNM病理分期為Ⅱa、Ⅱb及Ⅲ期。在實施手術后0.5 h內(nèi)采集樣本，在最短時間內(nèi)將樣本放置于液氮中保存，液氮保存1 h后迅速轉(zhuǎn)移至-80℃冷柜中保存。

表1 CXCR4蛋白表達與食管鱗癌病理參數(shù)關系

1.2 方法

1.2.1 CXCR4 mRNA相對表達量的測定 取冰凍樣本0.1 g并用Trizol試劑勻漿。提取出樣本組織總RNA，將MMLV通過逆轉(zhuǎn)錄酶使之成為cDNA，使用試劑盒PCR將CXCR4擴增，同時還可將β-actin擴增使之成為內(nèi)參照。PCR產(chǎn)物放置于2%瓊脂凝膠上電泳，實施EB染色操作，通過凝膠成像分析系統(tǒng)對所得到的圖像進行研究，相對量的表達采用實驗得到的吸光度與β-actin密度之間的比值來表示[2]。

1.2.2 CXCR4蛋白相對表達量的測定 取少許樣本組織，將其加入到0.5 mL勻漿液中實施勻漿操作，采用BCA法對樣本蛋白進行定量測定。將獲得的蛋白采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠進行電泳分離，并通過電轉(zhuǎn)儀將分離出的蛋白轉(zhuǎn)印在硝酸纖維素膜上。將5%脫脂奶粉靜置5 h(需處于封閉狀態(tài)，避免與空氣過多接觸)，加入到CXCR4一抗，在4℃環(huán)境中孵育一整晚，利用TBST多次洗膜后將二抗加入其中，在正常溫度(室溫)下孵育2 h。之后染色20 min，利用凝膠成像分析系統(tǒng)了解條帶的吸光度，同時將內(nèi)參照選為β-actin。相對量的表達采用電泳條帶密度與相對內(nèi)參密度之間的比值來表示[3]。

2 結(jié)果

CXCR4蛋白表達與食管鱗癌病理參數(shù)關系研究見表1。本研究選取腫瘤大小、分化程度、侵及外膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)及TNM分期對其相關參數(shù)展開研究，了解這些因素下相對表達量的差異性。

3 討論

趨化因子受體CXCR4可在多種實體腫瘤中表達，許多研究已證實CXCL12/CXCR4軸在腫瘤的遷移、浸潤、轉(zhuǎn)移及預后中具有重要作用，對腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用主要包括以下幾方面。①CXCL12/CXCR4軸可以調(diào)控腫瘤細胞的增殖與凋亡：CXCL12/CXCR4軸多以自分泌刺激腫瘤及間質(zhì)細胞，促進腫瘤細胞的生長增殖。②CXCL12/CXCR4軸可以促進腫瘤血管的生成：血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)能將多種骨髓細胞從骨髓募集到外周血，CXCL12能捕獲血液循環(huán)中骨髓血管生成前體細胞的某些亞型，如RBCCs，并將其準確定位到正在生長的血管周圍，促進內(nèi)皮細胞芽生；CXCR4與VEGF還可以通過相互上調(diào)對方在內(nèi)皮細胞及腫瘤細胞上的表達來促進腫瘤血管的生成[4-5]。

由于食管鱗癌早期癥狀不明顯，就診時多偏中、晚期，雖然目前以手術為主的綜合治療取得了較好的療效，但復發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是制約延長生存期和降低病死率的主要原因。本研究初步證實，趨化因子受體CXCR4表達與食管鱗癌的浸潤、轉(zhuǎn)移相關，但其確切作用機制尚需進一步深入研究。鑒于目前對胸中段食管癌尚無公認的標準手術方式，Ivor-Lewis手術和主動脈弓上水平吻合術均可作為對胸中段食管鱗癌治療的候選手術方式。由于采取該兩種手術方式治療的患者，即使實現(xiàn)了完全切除，長期生存期腫瘤復發(fā)率較高，有必要對有選擇的食管鱗癌患者采用有針對性的手術后輔助治療措施。

[1] 宋亮．趨化因子受體CXCR4、CCR7與食管鱗癌生物學行為的臨床研究[D]．濟南：山東大學，2012．

[2] 尹東，劉靜，賈詠存，等．口腔鱗癌中趨化因子受體CXCR4和CCR7表達及其與臨床病理特征的關系[J]．口腔醫(yī)學，2013(1)：8-12．

[3] 陳鋼．趨化因子受體CCR7、CXCR4與肺癌器官轉(zhuǎn)移關系的臨床研究[D]．濟南：山東大學，2010．

[4] 宋亮，王洲．趨化因子受體CXCR4和CCR7及其配體與食管癌轉(zhuǎn)移相關性的研究進展[J]．中華腫瘤防治雜志，2010(20)：1694-1699．

[5] 吉茹．CXCR4、CCR7及其配體在乳腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織芯片中的表達及意義[D]．天津：天津醫(yī)科大學，2010．

1672-7185（2014）15-0072-02

10.3969/j.issn.1672-7185.2014.15.042

2014-06-12）

R735.1

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