龐曉奡，張瑤，魏恒，張晶，羅清雙，黃成琳，張淑蘭

（中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽110004）

高遷移率族蛋白1在宮頸癌中的表達及作用

龐曉奡，張瑤，魏恒，張晶，羅清雙，黃成琳，張淑蘭

（中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽110004）

目的探討高遷移率族蛋白1（HMGB1）與鱗狀上皮細胞癌抗原（SCC-Ag）在宮頸癌中的表達及臨床意義。方法免疫組化法檢測HMGB1蛋白在60例宮頸癌、51例宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及16例正常宮頸組織中的表達情況，并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。免疫放射測定法檢測48例宮頸鱗癌患者血清中SCC-Ag的表達情況，并分析其與HMGB1的相關(guān)性。結(jié)果HMGB1在宮頸癌中陽性表達率為83.3%（50/60），在CIN中陽性表達率為54.9%（28/51），在正常宮頸組織中陽性表達率為12.5%（2/16）。HMGB1的表達與FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，并且HMGB1的表達與血清中SCC-Ag的水平呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論HMGB1的表達水平隨著宮頸病變級別的遞增呈升高趨勢，且與臨床相關(guān)參數(shù)密切聯(lián)系。HMGB1可能作為宮頸癌診斷、預(yù)測及評估治療效果的判定指標之一。

高遷移率族蛋白1；鱗狀上皮細胞癌抗原；宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；人乳頭瘤病毒

高遷移率族蛋白1（high-mobility group box 1，HMGB1）是19世紀60年代被人們發(fā)現(xiàn)的，其分子量約為25 kDa，在聚丙烯酞胺凝膠電泳中遷移速率較快。HMGB1主要存在于真核細胞核內(nèi)，是一種非組蛋白染色體結(jié)合蛋白。HMGB1是在結(jié)構(gòu)上高度保守的單鏈多肽，大概含有215個氨基酸殘基。HMGB1在DNA復(fù)制、重組、修復(fù)和基因轉(zhuǎn)錄中起重要的輔助作用［1］。國內(nèi)外現(xiàn)關(guān)于HMGB1在腫瘤中的作用的相關(guān)報道越來越多，隨著研究的深入，HMGB1在不同疾病中的不同作用也被探討，在缺血再灌注損傷、腫瘤、休克及自身免疫性疾病中，HMGB1都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在一些惡性腫瘤中，HMGB1與腫瘤細胞的增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移能力有關(guān)，也與臨床分期和不同的預(yù)后結(jié)局相關(guān)，其中包括卵巢癌、胰腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤［2～7］。在宮頸癌中也有HMGB1的相關(guān)報道，但對于HMGB1與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系及具體作用機制尚不清楚。本研究采用免疫組化的方法檢測HMGB1蛋白的表達情況，采用免疫放射測定法檢測鱗狀上皮細胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCC-Ag）的表達情況，以了解HMGB1與SCC-Ag之間的相互關(guān)系，同時分析HMGB1與不同臨床病理特征的關(guān)系，從而為提高宮頸癌的診斷率和判斷預(yù)后提供幫助。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院2011年11月至2013年7月間手術(shù)治療的宮頸癌患者60例，年齡19～74歲，平均43.97歲。按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）臨床分期：Ⅰ期33例，Ⅱ期27例。病理類型：鱗癌54例，腺癌6例。分化程度：高分化11例，中分化42例，低分化7例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：陽性15例，陰性45例。宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）51例，其中CINⅠ/Ⅱ26例，CINⅢ25例。正常宮頸組織16例，取自行全子宮切除術(shù)的子宮肌瘤患者。同時采集48例宮頸鱗癌患者的血清標本。入選患者均為初次手術(shù)治療，術(shù)前未經(jīng)過任何放療、化療，無代謝性疾病。

1.2 免疫組化

采用免疫組織化學SP法進行檢測。HMGB1單克隆抗體為美國R&D公司產(chǎn)品，HMGB1一抗工作濃度1∶40，二抗即免疫組化HistostainTM染色試劑盒由中杉金橋公司提供，免疫組化SP方法按說明書進行，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明和封固。以PBS代替一抗作為陰性對照。每張切片取5個400倍視野，由2名資深病理科醫(yī)生盲法進行評分。HMGB1主要在細胞核表達，染色呈棕褐色者為3分；黃色為2分；淡黃色為1分；無染色為0分。陽性細胞率＞75%為4分；51%～75%為3分；26%～50%為2分；≤25%為1分；無陽性細胞為0分［8］。

1.3 免疫放射測定法

SCC-Ag檢測采用SCC檢測試劑盒，由美國Imx公司提供，檢測方法按說明書進行。參考值設(shè)置為1.5 ng/mL，試劑盒的檢測靈敏度為0.1 ng/mL。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。免疫組化結(jié)果與臨床病理特征間的關(guān)系采用χ2檢驗和單因素方差分析，HMGB1表達強度與SCC-Ag水平的關(guān)系采用Spearman秩相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果

HMGB1的表達率在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中分別為83.3%（50/60）、54.9%（28/51）和12.5%（2/16）。陽性顆粒主要位于細胞核中，細胞質(zhì)中也有微弱著色。HMGB1在宮頸癌組織中的表達率明顯高于CIN和正常宮頸組織（P＜0.05）。見圖1。

圖1 不同程度宮頸病變中HMGB1的表達情況×400Fig.1 Expression of HMGB1 in different degree of cervical lesions×400

2.2 HMGB1與臨床病理特征間的關(guān)系

不同表達強度的HMGB1與FIGO分期（P＜0.016）及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.002）情況存在相關(guān)性。HMGB1表達程度從正常宮頸組織、CIN到浸潤性宮頸癌呈升高趨勢（三者間兩兩比較，均P＜0.05），這提示HMGB1的表達情況與宮頸腫瘤的惡變潛質(zhì)有著明顯的關(guān)系。然而，本研究未發(fā)現(xiàn)HMGB1的表達情況與病理類型鱗癌和腺癌比較，（P=0.511）和分化程度（高、中、低分化間兩兩比較，均（P＞0.05））相關(guān)。通過這些結(jié)果我們推測，HMGB1可能作為宮頸癌診斷和預(yù)測的良好指標之一。見表1。

2.3 HMGB1與SCC-Ag間的關(guān)系

48例進行血清SCC-Ag檢測的宮頸鱗癌患者中，檢測結(jié)果在0.6～35.5 ng/mL之間（平均為4.25 ng/mL）。我們將1.5 ng/mL設(shè)置為參考值，其中26例（54.2%）患者SCC-Ag水平≤1.5 ng/mL，22例（45.8%）患者SCC-Ag水平＞1.5 ng/mL。在宮頸鱗癌中，SCC-Ag水平和HMGB1呈明顯正相關(guān)（r=0.523，P＜0.05）。見表2。

表1 HMGB1和臨床病理特征間的關(guān)系Tab.1 Relationship between HMGB1 and clinicopathological parameter

表2 HMGB1表達水平和SCC?Ag間的關(guān)系Tab.2 Correlation between HMGB1 expression and SCC?Ag level

3 討論

宮頸癌是僅次于乳癌的第二位常見女性惡性腫瘤，嚴重威脅婦女生命。近幾年國內(nèi)外報道宮頸癌發(fā)病率及病死率均明顯下降，但有年輕化的傾向，35歲以下的婦女宮頸癌發(fā)病率明顯上升。宮頸癌的早期診斷及早期治療對于患者至關(guān)重要。HMGB1在多種腫瘤中發(fā)揮作用，促進腫瘤細胞的侵襲、擴散和轉(zhuǎn)移。一些研究表明，在復(fù)發(fā)性宮頸鱗狀細胞癌中也有高表達的HMGB1存在，在血清中具有較高的特異性，相對于SCC-Ag、角蛋白19片段、癌胚抗原等腫瘤標記物，血清中的HMGB1特異性最高。因此HMGB1的表達水平可作為評價宮頸鱗狀細胞癌患者病情轉(zhuǎn)歸和預(yù)后的特異性標志［9］。HMGB1基因在應(yīng)用基因干擾技術(shù)有效抑制其表達后能夠抑制宮頸癌HeLa細胞增殖、侵襲和遷移的能力，也為基因治療方面對宮頸癌進行治療提供新的靶點［10］。

本研究通過免疫組化方法檢測60例宮頸癌、51例CIN及16例正常宮頸組織中HMGB1的表達情況。研究發(fā)現(xiàn)HMGB1在宮頸癌組織中的表達率明顯高于CIN和正常宮頸組織；CIN組織中HMGB1的表達率明顯高于正常宮頸組織。HMGB1的表達與臨床FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。但是，HMGB1的表達情況與病理類型和分化程度未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)，這可能與實驗組織標本的數(shù)量有限相關(guān)。這提示我們HMGB1可作為一種風險因子來估測腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，可能為宮頸病變進展過程中的重要作用因子。

宮頸鱗癌患者血清SCC-Ag的水平現(xiàn)已成為宮頸癌診斷和評估的重要標志性指標。本研究主要分析了HMGB1與SCC-Ag間的關(guān)系，在宮頸浸潤癌中，SCC-Ag水平和HMGB1有著明顯的正相關(guān)。這提示我們HMGB1可以作為評估宮頸病變進展及生物學行為的重要標識之一，可能與SCC-Ag聯(lián)合診斷宮頸癌，提高檢測的靈敏度和精確度。為宮頸癌預(yù)防提供新的策略，也為宮頸癌的治療以及后期效果的評估提供新的依據(jù)。

［1］Volp K，Brezniceanu ML，Bosser S，et al.Increased expression of high-mobility group box l（HMGB1）is associated with an elevated level of the antiapoptotic c-IAP2 protein in human colon carcinomas［J］.Gut，2006，55（2）：234-242.

［2］Sparatore B，Patrone M，Passalacqua M，et al.Activation of A431 human carcinoma cell motility by extracellular high-mobility group box 1 protein and epidermal growth factor stimuli［J］.Biochem J，2005，389（Pt1）：215-221.

［3］Dan HC，Jiang K，Coppola D，et al.Phosphatidylinositol-3-OH kinase/AKT and survivin pathways as critical targets for geranylgeranyltransferaseⅠinhibitor-induced apoptosis［J］.Oncogene，2004，23（3）：706-715.

［4］Yuan ZQ，F(xiàn)eldman RI，Sussman GE，et al.AKT2 inhibition of cisplatin-induced JNK/p38 and Bax activation by phosphorylation of ASK1：implication of AKT2 in chemoresistance［J］.J Biol Chem，2003，278（26）：23432-23440.

［5］Jiao Y，Wang HC，F(xiàn)ans J.Growth suppression and radio sensitivity increase by HMGB1 in breast cancer［J］.Acta Pharmacol Sin，2007，28（12）：1957-1967.

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［8］Qiu YY，Wang HY，Hao Q.Effect of HMGB1 expression suppressed by siRNA on cell cycle and proliferation of human cerviceal cancer cell line HeLa［J］.Clin Oncol Cancer Res，2010，5（7）：128-133.

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（編輯 陳姜）

Expression of High-mobility Group Box 1 and Its Significance in CervicalCancer

PANGXiao-ao，ZHANGYao，WEIHeng，ZHANGJing，LUO Qing-shuang，HUANGCheng-lin，ZHANGShu-lan
（DepartmentofObstetrics and Gynecology，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the significance of high-mobility group box 1（HMGB1）and serum squamous cell carcinoma antigen（SCCAg）in cervical cancer，and explore their prognostic value.MethodsHMGB1 protein expression was analyzed in 127 cervical tissue samples including cervical cancer，cervical intraepithelial neoplasia（CIN），and healthy control samples using immunohistochemistry.Serum squamous cell carcinoma antigen（SCC-Ag）was immunoradiometrically measured in 48 serum samplesfrom squamous cervicalcancerpatients.HMGB1 and SCCAg were then correlated to clinicopathological characteristics.ResultsPositive HMGB1 immunoreactivity was detected in 83.3%（50/60）cancer cases，54.9%（28/51）CIN cases，and 12.5%（2/16）control cases.HMGB1 expression tends to increase as cervical cancer progresses and it was found to be significantly correlated to FIGO stage and lymph node metastasis.In addition，HMGB1 expression and levels ofSCC-Ag were significantly correlated in SCC（P＜0.05）.ConclusionHMGB1 expression tends to increase as cervical cancer progresses，and it was significantly correlated to clinicopathologicalparameter.HMGB1 may be a usefulbiomarkerforpatientprognosis and cervicalcancerprediction.

high-mobility group box 1；squamous cell carcinoma antigen；cervical cancer；cervical intraepithelial neoplasia；human papillomavirus

R246.3

A

0258-4646（2014）12-1075-04

國家自然科學基金（81372776，81202048）；遼寧省高等學校博士學科點專項科研基金（12012210411004）

龐曉奡（1988-），女，博士研究生.

張淑蘭，E-mail：zsl0909@sina.com

2014-08-29

網(wǎng)絡(luò)出版時間：