楊宇 姚陽(yáng) 劉坤 劉暢 張宇平 魏昭 沈晶晶

c-fos基因被激活并表達(dá)的Fos蛋白可作為研究神經(jīng)傳導(dǎo)通路的一個(gè)有意義的標(biāo)志物，可用來(lái)判斷、追蹤傷害性刺激信號(hào)的傳導(dǎo)通路。文獻(xiàn)報(bào)道谷氨酸參與傷害性信息引起c-fos基因表達(dá)[1]，脊髓后角作為疼痛信息處理的初級(jí)中樞，其神經(jīng)遞質(zhì)的成分和受體的分布、來(lái)源等信息，是打開(kāi)脊髓神經(jīng)元信號(hào)傳導(dǎo)和疼痛傳遞的前提基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料 Wistar大鼠40只，體重(250±20)g；c-fos抗體；ABC免疫組化試劑盒。

2 結(jié)果

2.1傷害性刺激SN對(duì)脊髓神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)的影響 正常狀態(tài)下大鼠脊髓神經(jīng)元僅有少量Fos蛋白表達(dá)，其主要分布在胞核內(nèi)，經(jīng)過(guò)DAB顯色后，陽(yáng)性神經(jīng)元的Fos蛋白胞核被染成棕褐色，多為圓形或橢圓形，大小不等。與空白對(duì)照組比較，電刺激SN后30 min，誘發(fā)脊髓神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)顯著增加，P<0.05，見(jiàn)圖1、表1。

2.2CNQX對(duì)傷害性刺激SN誘發(fā)脊髓神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)的影響 CNQX實(shí)驗(yàn)組，誘發(fā)脊髓神經(jīng)元Fos蛋白的表達(dá)輕度增加，但與空白對(duì)照組相比較，陽(yáng)性細(xì)胞面積百分比和積分光密度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而CNQX對(duì)照組，誘發(fā)脊髓神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)明顯增加，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1、表1。

結(jié)果顯示，CNQX拮抗了電刺激SN引起脊髓神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)的顯著增加，提示非NMDA受體參與了SN引起軀體痛的形成過(guò)程。

圖1 電刺激SN及靜脈注射CNQX后脊髓Fos蛋白的表達(dá)

分組時(shí)間(min)積分光密度陽(yáng)性細(xì)胞百分比空白對(duì)照組307.176±0.6621.982±0.706電刺激SN實(shí)驗(yàn)組309.481±1.243ab3.336±0.834ab注射CNQX+電刺激SN308.059±0.5012.114±0.638注射N(xiāo)S+電刺激SN309.374±1.147ab3.286±0.678ab

注：aP<0.05，與空白組對(duì)比；bP<0.05，與注射CNQX +電刺激SN組對(duì)比

3 討論

當(dāng)中樞神經(jīng)元受到各種化學(xué)、物理等原因刺激后，誘導(dǎo)c-fos基因翻譯成Fos蛋白進(jìn)入細(xì)胞核與目的基因結(jié)合而對(duì)刺激作出相應(yīng)反應(yīng)，因此，F(xiàn)os蛋白表達(dá)被廣泛用作神經(jīng)元功能活動(dòng)的指標(biāo)[3]。實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照組見(jiàn)到脊髓神經(jīng)元Fos蛋白的少量表達(dá)，提示正常狀態(tài)下，正常細(xì)胞確實(shí)有低水平的Fos蛋白表達(dá)，傷害性電刺激隱神經(jīng)后30～60 min時(shí)，F(xiàn)os蛋白數(shù)量很多，表達(dá)明顯增加，高峰出現(xiàn)在電刺激后60 min[4]。

各種類(lèi)型谷氨酸受體均參與了傷害性信息引起疼痛的過(guò)程，一般認(rèn)為NMDA則受體介導(dǎo)持續(xù)性痛，非NMDA受體主要介導(dǎo)一過(guò)性痛。本研究觀察到，CNQX阻斷了傷害性電刺激隱神經(jīng)引起的脊髓Fos蛋白表達(dá)的顯著增加，提示非NMDA受體參與到SN傷害性傳入信息引起脊髓Fos蛋白表達(dá)增加的過(guò)程，為鎮(zhèn)痛機(jī)理的研究提供新的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

[1] 曾文泓,劉德明.c-fos基因與脊髓損傷.四川解剖學(xué)雜志,2008,16(1):20-22.

[2] 楊宇,楊靜玉,等.電刺激隱神經(jīng)對(duì)大鼠脊髓c-fos基因表達(dá)的影響.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010,12(2):69-72.

[3] 郭新華,劉凌云,李清君.不同類(lèi)型的谷氨酸受體在脊髓痛覺(jué)過(guò)敏產(chǎn)生中的作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制.河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005,26(3):218-220.

[4] 商麗宏,代秋竹,陳魁敏.等.CNQX對(duì)截?cái)辔材┒撕笮∈笸捶磻?yīng)變化的影響.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，40(1):48-52.