曾學(xué)平

(?？谑薪夥跑姷?87醫(yī)院輸血科，?？?571159)

現(xiàn)今輸血技術(shù)大大提高了輸血的臨床療效，血液的配合型輸注不單單指ABO血型系統(tǒng)的相互配合，同時(shí)還包括Rh多種少見(jiàn)血型系統(tǒng)的配合，通過(guò)血型鑒定可大大降低速發(fā)型溶血反應(yīng)的概率。不規(guī)則抗體是指血清中除抗-A、抗-B抗體外其他血型的抗體，引起溶血性輸血反應(yīng)，溶血較輕時(shí)會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)發(fā)熱、寒戰(zhàn)癥狀，降低臨床治療效果，嚴(yán)重時(shí)甚至危機(jī)到患者的生命安全。直接抗人球蛋白試驗(yàn)(direct antiglobulin test，DAT)陽(yáng)性表明人體內(nèi)的紅細(xì)胞受到不完全抗體致敏，導(dǎo)致交叉配血過(guò)程出現(xiàn)凝集反應(yīng)，給配血帶來(lái)困難。最近幾年，國(guó)外已經(jīng)廣泛應(yīng)用微柱凝膠技術(shù)。本研究對(duì)收治的住院后需要輸血患者的臨床資料進(jìn)行分析，對(duì)其運(yùn)用微柱凝膠法對(duì)DAT及不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，同時(shí)對(duì)陽(yáng)性患者的血液抗體特異性進(jìn)行鑒定。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇?？谑薪夥跑姷?87醫(yī)院于2010年4月至2013年1月收治的住院后需要輸血的患者3454例，其中男2014例、女1440例，年齡1～88(54.2±6.3)歲。其中1022例有輸血史，2432例無(wú)輸血史；女性患者中235例有妊娠史，1205例無(wú)妊娠史；運(yùn)用微柱凝膠法對(duì)患者的DAT及不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，同時(shí)對(duì)陽(yáng)性患者的血液抗體特異性進(jìn)行鑒定。

1.2儀器與試劑 儀器主要包括專(zhuān)用卡式離心機(jī)、37 ℃孵育箱、微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡等，均由長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司提供。檢測(cè)不規(guī)則抗體的試劑為人紅細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，主要包括C，c，D，E，M，N，e，s，PL，Lea，Leb，k，Jka，Jkb，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb共16種抗原。

1.3方法

1.3.1不完全抗體的鑒定與篩查 將微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡取出，標(biāo)記上Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，將患者50 μL的血清樣本加入孔中，再分別將0.8%的檢測(cè)細(xì)胞(50μL)加入其內(nèi)，保持溫度恒定在37 ℃，經(jīng)過(guò)15 min的孵育，在離心機(jī)的離心半徑26 cm條件下,900 r/min持續(xù)2 min、1500 r/min持續(xù)3 min離心約5 min觀察結(jié)果，檢測(cè)的細(xì)胞如未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象即為陰性，如出現(xiàn)凝集即為陽(yáng)性結(jié)果，進(jìn)而再用譜細(xì)胞鑒定不完全抗體的特異性，操作時(shí)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)及參考文獻(xiàn)執(zhí)行。

1.3.2DAT定性 將50 μL濃度為0.5%～0.8%的待檢紅細(xì)胞懸液加入到微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡(抗IG+C3d)中，立刻在離心半徑24 cm條件下，900 r/min持續(xù)2 min、1500 r/min持續(xù)3 min共離心約5 min，對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察，DAT陽(yáng)性結(jié)果運(yùn)用抗IgG+C3d、抗C3d及抗IgG試劑進(jìn)行分型。

2 結(jié) 果

3454例患者中共檢測(cè)出6例為不規(guī)則抗體，陽(yáng)性率為0.17%，其中2例為抗-E、1例為抗-C、1例為抗-c1、1例為抗-s1、1例為抗-Jka，且有輸血史較無(wú)輸血史者不規(guī)則抗體檢出率高(P<0.01)，女性有妊娠史者較女性無(wú)妊娠史者不規(guī)則抗體檢出率高(P<0.01)；35例為DAT陽(yáng)性，陽(yáng)性率為1.01%，其中18例為IgG型抗體、7例為C3型抗體、10例為IgG+C3型抗體,且有輸血史較無(wú)輸血史者DAT陽(yáng)性率高(P<0.01)，女性有妊娠史者較女性無(wú)妊娠史者DAT陽(yáng)性率高(P<0.01)(表1)。

表1 3454例需輸血患者DAT及不規(guī)則抗體篩選的結(jié)果 [例(%)]

3 討 論

隨著社會(huì)的發(fā)展，醫(yī)療技術(shù)水平的不斷進(jìn)步，以及醫(yī)院實(shí)施的各種節(jié)約用血措施的實(shí)施，同樣的手術(shù)需要輸血的可能性越來(lái)越小，需血量也在逐漸降低，雖然如此，但是用血的不確定性在逐漸升高，因而對(duì)于醫(yī)院來(lái)說(shuō)，手術(shù)通知單下達(dá)的備血數(shù)量只是一個(gè)參考值，并不是提前根據(jù)通知單上的要求備好血液，進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)主要是在術(shù)中隨機(jī)應(yīng)變，但是速度要求快，這樣可以確保手術(shù)的順利實(shí)施[1]。但是，特殊情況時(shí)會(huì)遇到不規(guī)則抗體導(dǎo)致的配血不和現(xiàn)象，短時(shí)間內(nèi)很難找到適合的血液，這樣會(huì)對(duì)臨床用血造成困擾，耽誤患者的最佳治療時(shí)間，嚴(yán)重者甚至危及到患者的生命安全，因此要在輸血前的1～2 d對(duì)患者的血清中的不規(guī)則抗體進(jìn)行篩選，以保證出現(xiàn)緊急情況時(shí)可迅速輸注血液。

輸血在臨床的治療過(guò)程中占據(jù)著重要的位置，輸血的安全性已經(jīng)受到社會(huì)的廣泛關(guān)注。雖然大多數(shù)人不存在不規(guī)則抗體，但是其為導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)及遲發(fā)性免疫反應(yīng)的主要原因，美國(guó)食品藥品管理局對(duì)由于輸血導(dǎo)致死亡的患者進(jìn)行報(bào)道時(shí)指出，死亡患者中約55.5%是由于溶血性輸血反應(yīng)導(dǎo)致的，然而其中的14%是由于不完全抗體導(dǎo)致的[2]。本研究結(jié)果顯示，3454例患者中共檢測(cè)出6例為不規(guī)則抗體，陽(yáng)性率為0.17%，與徐繼勛[3]報(bào)道的有妊娠史或者輸血史的數(shù)值比較偏低，與戴芳等[4]報(bào)道的基本一致。本研究中6例不規(guī)則抗體陽(yáng)性的患者都有過(guò)妊娠史及輸血史，表明不規(guī)則抗體表現(xiàn)為陽(yáng)性主要與患者的妊娠史及輸血史有關(guān)，也說(shuō)明輸血或者妊娠過(guò)程中的免疫刺激導(dǎo)致不規(guī)則抗體的出現(xiàn)，因而對(duì)于曾有過(guò)妊娠史及輸血史的患者要特別注意篩查不規(guī)則抗體。

本文研究的結(jié)果可以看出其中6例患者為不規(guī)則抗體，具體有抗-E、抗-C、抗-c1、抗-s1、抗-JKa，35例為DAT陽(yáng)性，陽(yáng)性率為1.01%，其中包括三型抗體，分別為IgG型抗體、C3型抗體、IgG+C3型抗體。不規(guī)則抗體有輸血史較無(wú)輸血史者不規(guī)則抗體檢出率高，女性有妊娠史者較女性無(wú)妊娠史者不規(guī)則抗體檢出率高；35例為DAT陽(yáng)性，有輸血史較無(wú)輸血史者DAT陽(yáng)性率高；女性有妊娠史者較女性無(wú)妊娠史者DAT陽(yáng)性率高。

本研究對(duì)6例不完全抗體陽(yáng)性的樣本進(jìn)行了特異性抗體鑒定，經(jīng)過(guò)分析得出，不規(guī)則抗體多數(shù)為Rh血型系統(tǒng)，主要以除抗-D以外的抗體為主，如抗-C、抗-E等不規(guī)則抗體的檢出率相對(duì)較高，大多數(shù)醫(yī)院以將D抗原作為輸血前的常規(guī)檢查，防止進(jìn)行輸血過(guò)程中D抗原導(dǎo)致免疫反應(yīng)，因此抗-D產(chǎn)生有所降低，而沒(méi)有對(duì)Rh(C，c，E，e)的檢測(cè)進(jìn)行定性要求，抗-E、抗-C等已經(jīng)成為現(xiàn)今妊娠后及多次輸血后常見(jiàn)的抗體類(lèi)型[5-6]。由此可見(jiàn)，輸血前要常規(guī)對(duì)不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，當(dāng)抗體篩查出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，要對(duì)抗體的特異性類(lèi)型進(jìn)行確定，選擇輸注相應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞，防止出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)，以此來(lái)保證患者的輸血安全性。

DAT是診斷自身免疫性溶血性貧血的重要依據(jù)，但是引起患者紅細(xì)胞DAT陽(yáng)性的因素很多，如溶血性貧血、藥物因素、慢性肝炎、自身免疫性疾病以及癌癥等[7]。DAT陽(yáng)性可導(dǎo)致微柱凝膠法交叉配血主側(cè)、次側(cè)同時(shí)凝集，也可以出現(xiàn)次側(cè)凝集的現(xiàn)象，引起配血有一定難度[8]。運(yùn)用吸收試驗(yàn)將患者血清中的自身抗體清除，再運(yùn)用這個(gè)血清進(jìn)行主側(cè)交叉配血試驗(yàn)，對(duì)患者的紅細(xì)胞做放散試驗(yàn)，將放散掉的自身抗體紅細(xì)胞進(jìn)行交叉配血次側(cè)試驗(yàn)，如果將干擾因素排除，交叉配血試驗(yàn)相合，就可以進(jìn)行輸血，避免由于輸血不相合的血液導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)。

綜上所述，進(jìn)行輸血前要對(duì)DAT及不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，特別是有妊娠史及輸血史的患者，這樣可以確保臨床輸血的安全性，同時(shí)降低出現(xiàn)溶血反應(yīng)的概率，具有重要的臨床意義。

[1] 沈柏濤,謝一唯,陳秉宇.反復(fù)輸血的受血者不完全抗體和直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，12(6)：662-663.

[2] 趙莉.不規(guī)則抗體篩查在預(yù)防溶血性輸血反應(yīng)中的作用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,5(20):2339-2340.

[3] 徐繼勛.輸血前不規(guī)則抗體篩查與臨床安全輸血[J].臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)版，2010，26(4)：464-466.

[4] 戴芳,李建武.微柱凝膠法在不規(guī)則抗體篩檢中的應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2011，3(10)：81-82.

[5] 鄧麗敏,周麗梅.尿毒癥患者反復(fù)輸血對(duì)交叉配血的影響[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè),2010,22(32)：75-76.

[6] 劉宏,李靜,李存剛.輸血前檢測(cè)不規(guī)則抗體的必要性[J].醫(yī)學(xué)信息(內(nèi)·外科版),2009,31(10):721-722.

[7] 蔣麗華,韋海春,黎海瀾.婦幼醫(yī)院開(kāi)展不規(guī)則抗體篩查的價(jià)值和意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,10(16):84-85.

[8] 嚴(yán)根興,查榮寶,周建華,等.微柱凝膠技術(shù)篩檢不規(guī)則抗體的臨床應(yīng)用與分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009,36(4):91-93.