林伯全 楊 慧 王 恬

由于抗生素添加劑在畜禽飼料中添加使用存在負(fù)面作用，人們開始不斷尋求和研發(fā)無(wú)污染、低殘留的綠色飼料添加劑來(lái)替代抗生素。酵母多糖和益生素的組合以其優(yōu)良的生物學(xué)功能逐步得到人們的關(guān)注。酵母細(xì)胞壁富含酵母多糖。酵母多糖主要成分是葡聚糖和甘露聚糖。大量的報(bào)道證明有益微生物能促進(jìn)酵母多糖的消化，酵母多糖又可促進(jìn)有益菌的增殖、提高有益菌的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，其組合具益生菌和益生元的雙重作用，能提高外源性活菌的生存率，延長(zhǎng)其作用時(shí)間，刺激有益菌的定植和增殖，吸附病原菌，改善動(dòng)物腸道微生物群落結(jié)構(gòu)［1－2］，二者能對(duì)細(xì)菌、真菌和病毒引起的畜禽疫病以及運(yùn)輸、轉(zhuǎn)群、接種、氣候變化等引起的應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生非特異性免疫力［3］，對(duì)動(dòng)物起保健作用。

王輝田等［4］報(bào)道在肉仔雞飼糧中添加酵母細(xì)胞壁能顯著提高新城疫抗體滴度、血清溶菌酶含量和T淋巴細(xì)胞比例。李志清［5］研究發(fā)現(xiàn)肉仔雞飼糧中添加β－葡聚糖可顯著提高新城疫一免后7 d、二免后5 d血凝抑制(HI)抗體效價(jià)。吳紀(jì)經(jīng)等［6］通過(guò)雞新城疫HI抗體水平和T細(xì)胞增殖的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，以飲服或肌肉注射方式給艾維茵肉雞補(bǔ)充酵母細(xì)胞壁，均可顯著提高其體液免疫和細(xì)胞免疫水平。益生素又稱微生態(tài)制劑或活菌制劑，是近年來(lái)針對(duì)抗生素藥物產(chǎn)生的殘留、抗藥、致癌、致畸、污染等副作用而興起的綠色添加劑［7－8］。目前使用的活菌制劑主要有枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌［9］。阿瑪琪［10］通過(guò)在產(chǎn)蛋雞飼糧中加入芽孢類益生素使得產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋重、產(chǎn)蛋率有一定程度的提高，同時(shí)促進(jìn)了產(chǎn)蛋雞的腸道有益菌的增殖和免疫器官的發(fā)育。Ducle等［11］報(bào)道，芽孢桿菌進(jìn)入腸道后可作用于腸系膜淋巴結(jié)的淋巴組織，顯著提高抗芽孢的免疫球蛋白G(IgG)和分泌型免疫球蛋白A(IgA)的水平?？傊延写罅拷湍讣?xì)胞壁和益生素單獨(dú)在飼料中應(yīng)用的研究，但二者聯(lián)合應(yīng)用的組合效應(yīng)及最佳組合劑量還未見(jiàn)報(bào)道。為此，本研究旨在針對(duì)其二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、免疫功能的影響進(jìn)行探討，得出最佳組合劑量，為二者的科學(xué)聯(lián)合應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 酵母細(xì)胞壁和益生素

酵母細(xì)胞壁，選用英國(guó)聯(lián)合食品集團(tuán)產(chǎn)品［使用德國(guó)面包酵母菌種生產(chǎn)，其甘露寡糖和β－葡聚糖含量均≥(48±3)%］。

益生素，選用上海紐威產(chǎn)品(枯草芽孢桿菌和地 衣 芽 孢 桿 菌 1∶1混 合，含 量 均 ≥ 1.0×1010CFU/g)。

1.2 基礎(chǔ)飼糧

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)［12］和《雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)［13］，并結(jié)合海蘭褐蛋雞飼養(yǎng)手冊(cè)配制?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將19周齡健康的海蘭褐蛋雞512只，隨機(jī)分成4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)32只雞，實(shí)行階梯籠養(yǎng)。預(yù)試期1周，正試期8周，分別飼喂基礎(chǔ)飼糧(對(duì)照組，A 組)、基礎(chǔ)飼糧+0.4 mg/kg酵母細(xì)胞壁+50 mL/t益生素(B組)、基礎(chǔ)飼糧+0.8 mg/kg酵母細(xì)胞壁+100 mL/t益生素(C 組)、基礎(chǔ)飼糧+1.2 mg/kg酵母細(xì)胞壁+150 mL/t益生素(D組)。試驗(yàn)在福清文華蛋品有限公司雞場(chǎng)進(jìn)行;試驗(yàn)從2013年9月29日開始，在預(yù)試期按日統(tǒng)計(jì)產(chǎn)蛋量，根據(jù)實(shí)際情況對(duì)雞群進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，使組間日產(chǎn)蛋量差異不顯著(P＞0.05)，同時(shí)逐漸換上試驗(yàn)飼糧。

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

試驗(yàn)期間每日以重復(fù)為單位記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重，并計(jì)算產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋量、平均蛋重，每周結(jié)1次料并計(jì)算日采食量、料蛋比。

1.4.2 免疫功能

測(cè)定新城疫抗體水平和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率:分別于正試期第1天免疫前、第14天和第28天時(shí)，每組每重復(fù)(籠)隨機(jī)取1只雞，翅靜脈采血，不加抗凝劑，分離血清，參照文獻(xiàn)［14］采用微量HI試驗(yàn)測(cè)定新城疫抗體效價(jià)，抗體水平以log2的平均值表示。翅靜脈采血2 mL，并加抗凝劑，參照文獻(xiàn)［15］用淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)［4－甲基偶氮唑鹽(MTT)法］測(cè)定血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，結(jié)果以刺激指數(shù)(SI)表示。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)在Excel 2003中建表，采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件的one-way ANOVA過(guò)程進(jìn)行單因素方差分析，LSD法進(jìn)行組間多重比較。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同劑量組合對(duì)海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，整個(gè)試驗(yàn)期各組間蛋雞日采食量、平均蛋重沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。與A組相比，B、C和D組蛋雞日產(chǎn)蛋量均有不同程度的提高，其分別提高了 2.76%(P＞0.05)、6.22%(P＜0.05)、2.26%(P＞0.05);產(chǎn)蛋率分別提高了2.83%(P＞0.05)、6.19%(P＜0.05)、2.27%(P＞0.05);料蛋比分別下降了 3.83%(P＜0.05)、6.70%(P＜0.05)、2.87%(P＞0.05)。

與B、D組相比，C組蛋雞日產(chǎn)蛋量分別提高了 3.36%(P＜0.05)、3.86%(P＜0.05);產(chǎn)蛋率分別提高了 3.27%(P＜0.05)、3.84%(P＜0.05);料蛋比分別下降了 2.99%(P＞0.05)、3.94%(P＜0.05)。

表2 蛋雞生產(chǎn)性能Table 2 Performance of laying hens

2.2 不同劑量組合對(duì)海蘭褐蛋雞免疫功能的影響

2.2.1 新城疫抗體效價(jià)

由表3可知，試驗(yàn)第1天，各試驗(yàn)組與對(duì)照組(A組)間蛋雞血清新城疫抗體效價(jià)均差異不顯著(P＞0.05);試驗(yàn)第 14天，與 A 組相比，B、C 和 D組均有不同程度的提高，其分別提高了3.92%(P＜0.05)、6.17%(P＜0.01)、3.14%(P＜0.05);試驗(yàn)第28天，與A組相比，B、C和D組均有不同程度的提高，其分別提高了 6.87%(P＜0.05)、9.94%(P＜0.01)、6.99%(P＜0.05)。與 B、D 組相比，C 組試驗(yàn)第14天和第28天蛋雞血清新城疫抗體效價(jià)均有提高，但差異不顯著(P＞0.05)。

2.2.2 血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率

由表4可知，蛋雞血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率于試驗(yàn)第1天各試驗(yàn)組與對(duì)照組間均差異不顯著(P＞0.05);試驗(yàn)第14天，與A組相比，B、C和D組均有不同程度的提高，其分別提高了 3.83%(P＜0.05)、6.56%(P＜0.01)、3.28%(P＜0.05);試驗(yàn)第28天，與A組相比，B、C和D組均有不同程度的提高，其分別提高了 3.89%(P＜0.05)、7.22%(P＜0.01)、4.44%(P＜0.05)。與 B、D 組相比，C 組試驗(yàn)第14天和第28天蛋雞血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均有提高，但差異不顯著(P＞0.05)。

表3 蛋雞血清新城疫抗體效價(jià)Table 3 Serum antibody titers of Newcastle disease in laying hens log2

表4 蛋雞血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率(刺激指數(shù))Table 4 Lymphocyte transformation rate in blood of laying hens(SI)

3 討 論

3.1 酵母細(xì)胞壁和益生素3種劑量組合對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蛋雞飼糧中額外添加酵母細(xì)胞壁和益生素(枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌)2種生物制劑不同劑量3種組合，雖然蛋雞日采食量、平均蛋重沒(méi)有顯著改善，但不同劑量B、C、D 3種組合都能在一定程度上提高海蘭褐蛋雞的日產(chǎn)蛋量和產(chǎn)蛋率，同時(shí)降低料蛋比。3種劑量組合對(duì)海蘭褐蛋雞日產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率、料蛋比影響存在差異，C組合效果最佳。其原因主要?dú)w結(jié)為益生素可通過(guò)提高胃腸道中有益菌的數(shù)量，降低有害菌的數(shù)量，并能合成多種酶類，在消化道中與動(dòng)物體內(nèi)的消化酶類一同發(fā)揮作用，促進(jìn)機(jī)體消化吸收，達(dá)到提高飼料利用和促生長(zhǎng)的效果［16］。很多研究也都表明酵母細(xì)胞壁對(duì)動(dòng)物有促生長(zhǎng)作用［17］，其作用機(jī)理有以下2個(gè)方面:首先其改善了小腸的黏膜形態(tài)，絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度的比值增大，從而擴(kuò)大了小腸絨毛的吸收面積，加大了對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，從而提高了飼料轉(zhuǎn)化率;其次，甘露寡糖可調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系，促進(jìn)有益菌的增殖，結(jié)合病原微生物，形成腸道內(nèi)合適的微生物區(qū)系，從而提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。甘露寡糖作為一種生長(zhǎng)代謝的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可促進(jìn)一些有益菌的生長(zhǎng)繁殖，對(duì)一些致病菌則有抑制作用［18］。故酵母細(xì)胞壁和益生素聯(lián)合應(yīng)用能提高有益菌在腸道內(nèi)的成活率，改善益生菌的穩(wěn)定性，并促進(jìn)益生素發(fā)揮作用［19］。

3.2 酵母細(xì)胞壁和益生素3種劑量組合對(duì)蛋雞免疫功能的影響

酵母細(xì)胞壁和益生素3種劑量組合均能提升蛋雞血清新城疫抗體效價(jià)和血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。在20世紀(jì)40年代，Pillemer博士首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了酵母細(xì)胞壁中有一種物質(zhì)具有提高免疫力的作用。之后，經(jīng)過(guò)圖倫大學(xué)Diluzio博士的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，酵母細(xì)胞壁中提高免疫力的物質(zhì)是一種多糖——甘露寡糖，并從面包酵母中分離出這種物質(zhì)。大量試驗(yàn)表明，β－葡聚糖可促進(jìn)體內(nèi)免疫球蛋白M(IgM)抗體的產(chǎn)生，以提高體液的免疫能力。益生素中的有益菌也是良好的免疫激活劑，能有效地提高干擾素和巨噬細(xì)胞的活性，通過(guò)產(chǎn)生抗體和提高噬菌活性等刺激免疫系統(tǒng)，激發(fā)機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫，導(dǎo)致機(jī)體免疫力和抗病力的增強(qiáng)。楊玉榮等［20］研究發(fā)現(xiàn)，在雛雞飼糧中添加益生素對(duì)雛雞的免疫系統(tǒng)有一定的影響，能夠促進(jìn)免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育。酵母細(xì)胞壁和益生素的組合能夠更好地抑制大腸桿菌、沙門氏菌的定植、幫助和維持寄主腸道菌群平衡，建立雙歧桿菌的優(yōu)勢(shì)種群、保護(hù)動(dòng)物肝臟、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)化、刺激寄主免疫細(xì)胞的活性、增強(qiáng)免疫功能［21］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示C組效果最佳，這與陳小兵等［22］、Kumprecht等［17］和周映華等［23］試驗(yàn)結(jié)果一致，這可能是因?yàn)檫^(guò)量添加酵母細(xì)胞壁會(huì)引起后腸過(guò)度發(fā)酵，從而使動(dòng)物發(fā)生輕微腹瀉，影響動(dòng)物對(duì)養(yǎng)分的吸收和利用，抑制動(dòng)物生長(zhǎng)，動(dòng)物生產(chǎn)性能與免疫功能沒(méi)有提高，反而略有下降，即過(guò)高的添加酵母細(xì)胞壁和益生素對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和免疫功能不但沒(méi)有進(jìn)一步的改善作用，反而不及較低劑量組。

4 結(jié)論

綜合各項(xiàng)指標(biāo)，在本試驗(yàn)條件下飼糧中按0.8 mg/kg酵母細(xì)胞壁+100 mL/t益生素劑量組合進(jìn)行添加對(duì)提高蛋雞生產(chǎn)性能和免疫功能效果最佳。

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