黃建龍，王昌建 ，鄧國(guó)華，譚 丹,，范仲鑫，何世成，朱春霞，汪洪冰，劉道新

禽流感是由正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的一種禽類(lèi)(家禽和野禽)傳染病，迄今為止，共有16種HA(H1-H16)亞型和9種NA(N1-N9)亞型被鑒定，根據(jù)禽流感病毒致病性和毒力的不同，將禽流感分為高致病性、低致病性和非致病性禽流感。高致病性禽流感的危害很大，大家對(duì)其高度關(guān)注，但近年來(lái)不斷有國(guó)家和地區(qū)有低致病性禽流感疫情的報(bào)道[1-6]，其流行和傳播呈上升趨勢(shì)。很多報(bào)道顯示H9亞型禽流感是影響我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的主要禽流感病毒亞型，且對(duì)禽的危害越來(lái)越嚴(yán)重，除引起上呼吸道感染、產(chǎn)蛋量嚴(yán)重下降外，個(gè)別毒株可引發(fā)較大的死亡。近年來(lái)我國(guó)南方地區(qū)和香港均出現(xiàn)了人感染H9N2亞型AIV的病例[7]。有報(bào)道稱(chēng)H6亞型禽流感病毒不僅可以向H5亞型高致病性禽流感病毒和H9N2亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因片段，而且還可以感染鼠、水貂和人[8-9]。

為了加強(qiáng)活禽經(jīng)營(yíng)市場(chǎng)管理，規(guī)范活禽經(jīng)營(yíng)行為，為了解環(huán)洞庭湖地區(qū)主要活禽批發(fā)市場(chǎng)低致病性禽流感病毒的分布和流行情況，從而有效預(yù)防和控制禽流感，保護(hù)人體健康和公共衛(wèi)生安全。2009-2011年冬春季節(jié)，我們對(duì)環(huán)洞庭湖活禽批發(fā)市場(chǎng)家禽進(jìn)行低致病性禽流感監(jiān)測(cè)，為該地區(qū)活禽批發(fā)市場(chǎng)低致病性禽流感的防控措施提供一些依據(jù)。

1 材料與方法

1.1樣品采集 按隨機(jī)抽樣的方法,每年的冬季和春季到每個(gè)市場(chǎng)抽取10個(gè)經(jīng)營(yíng)戶(hù)，每戶(hù)采10對(duì)咽喉拭子和泄殖腔拭子，采樣時(shí)詳細(xì)記錄家禽產(chǎn)地、日齡、采樣數(shù)量等信息。

1.2主要試劑 Taq DNA聚合酶、dNTPs和分子量Marker均購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司；反轉(zhuǎn)錄酶、LS TRIzol RNA提取試劑購(gòu)自Invitrogen公司。

1.3雞胚 SPF雞胚購(gòu)自哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.4病原分離和鑒定 拭子樣品1 000 r/min離心5 min，吸取上清液，以每胚0.2 mL的注射劑量由尿囊腔接種9～10 d齡SPF雞胚，每個(gè)樣品接種2～3枚SPF雞胚，37 ℃孵育，每天觀察2次，棄去24 h內(nèi)死亡的雞胚，及時(shí)收集之后死亡雞胚，至96 h收集所有雞胚，置于4 ℃過(guò)夜，收獲雞胚尿囊液，用血凝試驗(yàn)(HA)測(cè)定，陰性者再盲傳1代，如果HA認(rèn)為陰性，則終定為陰性樣品。對(duì)HA測(cè)定有滴度的再進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)(HI)和RT-PCT方法相結(jié)合鑒定病毒的亞型。

2 結(jié) 果

2.1總體檢測(cè)情況 2009-2011年，對(duì)環(huán)洞庭湖區(qū)主要活禽批發(fā)市場(chǎng)禽流感進(jìn)行監(jiān)測(cè)，共采集2 819對(duì)拭子，經(jīng)病原分離和鑒定發(fā)現(xiàn)，有627對(duì)拭子為低致病性禽流感陽(yáng)性拭子，總的分離率為22.2%，其中鴨拭子低致病性禽流感的分離率最高為24.6%，其次是雞拭子，達(dá)21.5%，鵝拭子為11%，見(jiàn)表1。

表1 總體檢測(cè)結(jié)果

2.2各個(gè)活禽批發(fā)市場(chǎng)低致病性禽流感分離率 在所監(jiān)測(cè)的5家活禽批發(fā)市場(chǎng)中都檢出陽(yáng)性樣品,其中益陽(yáng)市學(xué)門(mén)口市場(chǎng)、長(zhǎng)沙市石馬家禽批發(fā)市場(chǎng)和岳陽(yáng)市楓橋胡蛋禽批發(fā)市場(chǎng)低致病性禽流感分離率較高，分別為27.4%、27.3%和23.0%。

2.3不同HA亞型低致病性禽流感分離率 3年的持續(xù)監(jiān)測(cè)過(guò)程中，在活禽批發(fā)市場(chǎng)的禽拭子中分離出了6種亞型的低致病性禽流感病毒，有H3亞型、H4亞型、H6亞型、H9亞型、H10亞型和H11亞型。其中H9亞型、H6亞型和H4亞型比較高，其分離率分別可達(dá)到11%、6.3%和3.4%。

2.4活禽批發(fā)市場(chǎng)低致病性禽流感隱性帶毒種群分布情況 在對(duì)所采集的雞、鴨、鵝拭子中都檢測(cè)到禽流感病毒。在鴨拭子中可以分離到有H3、H4、H6、H9、H10和H11等6種亞型的低病性禽流感病毒，并且AIV H6亞型隱性帶毒率最高，達(dá)到10.2%。在雞拭子中可以分離到有H3、H4、H6和H9型等4種低病性禽流感病毒，其AIV H9亞型隱性帶毒率最高，達(dá)到15.1%。在鵝拭子中可以分離到有H4、H6和H9等3種亞型低病性禽流感病毒，見(jiàn)圖1。

圖1活禽批發(fā)市場(chǎng)中雞、鴨、鵝不同HA亞型低致病性禽流感分離率

Fig.1PositiverateofdifferentHAsubtypesoflowpathogenicavianinfluenzainchickens,ducksandgeeseinlivepoultrywholesalemarket

3 討 論

這3年的持續(xù)監(jiān)測(cè)過(guò)程中，每年環(huán)洞庭湖區(qū)主要活禽批發(fā)市場(chǎng)低致病性禽流感病毒分離率都不低。并在所監(jiān)測(cè)的5家活禽批發(fā)市場(chǎng)中都分離到低致病性禽流感病毒，分離出有H3、H4、H6、H9、H10型和H11等6種亞型的禽流感病毒。表明在活禽批發(fā)市場(chǎng)中低致病性禽流感隱性帶毒的情況普遍存在，活禽批發(fā)市場(chǎng)發(fā)生禽流感疫情的威脅比較大。目前，我們市場(chǎng)的禽流感檢疫水平不是很高，這就需要我們加強(qiáng)對(duì)活禽批發(fā)市場(chǎng)中家禽特別是水禽的病原學(xué)監(jiān)測(cè)和家禽的抗體水平監(jiān)測(cè)。

水禽特別是家鴨是禽流感病毒的儲(chǔ)存庫(kù)和傳染源，由于家鴨經(jīng)常同時(shí)被多個(gè)亞型的禽流感病毒混合感染，這為各亞型的基因重組提供了很好的載體，禽流感病毒在水禽與陸禽間傳播，可加快表面蛋白的變異，不斷豐富內(nèi)部基因的重配，并加速了種間傳播的機(jī)會(huì)[10-11]。因此，其在流感病毒的進(jìn)化和生態(tài)分布的重要地位已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可。在對(duì)洞庭湖區(qū)活禽批發(fā)市場(chǎng)所采集的雞、鴨、鵝拭子檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，鴨拭子低致病性禽流感的分離率最高，達(dá)到24.6%，并且在鴨拭子中可以檢測(cè)到的低致病性禽流感病毒亞型最多，有H3、H4、H6、H9、H10和H11等6種亞型。通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)省內(nèi)低致病性禽流感隱性帶毒鴨拭子主要來(lái)源于長(zhǎng)沙、益陽(yáng)、岳陽(yáng)和常德，表明洞庭湖區(qū)的水禽低致病性禽流感隱形帶毒是很高的，從而較大地威脅該地區(qū)發(fā)生禽流感疫情。因此，必須盡量防止野生水禽、家養(yǎng)水禽及其它野鳥(niǎo)與陸禽間的相互接觸，在市場(chǎng)禽流感的防控方面，水禽和其它禽類(lèi)應(yīng)分別建立市場(chǎng)，獨(dú)立經(jīng)營(yíng)。

在雞拭子中可以檢測(cè)到有5種亞型低致病性禽流感病毒，這說(shuō)明雞低致病性禽流感隱性帶毒也是很?chē)?yán)重的。根據(jù)我們的調(diào)查和分析，活禽批發(fā)市場(chǎng)上的雞低致病性禽流感隱性帶毒如此之高，原因可能有以下2個(gè)方面：第一，市場(chǎng)上的淘汰蛋雞比較多，蛋雞感染H9亞型的幾率比較大，有些養(yǎng)殖場(chǎng)的雞可能感染了H9亞型禽流感導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降而緊急淘汰這部分蛋雞；第二，有些雞可能來(lái)源于運(yùn)輸過(guò)程中的感染或市場(chǎng)內(nèi)陽(yáng)性帶毒鴨把病毒傳播給雞的。有專(zhuān)家預(yù)測(cè)H9N2亞型禽流感病毒可能成為毒力較強(qiáng)的毒株，成為下次流感大流行的亞型[12]。

本次監(jiān)測(cè)中，鵝拭子的監(jiān)測(cè)數(shù)量不是很多，但是在鵝拭子中檢測(cè)到有H4、H6和H9等3種亞型低病性禽流感病毒，說(shuō)明鵝在流感病毒的進(jìn)化和生態(tài)分布的作用同樣不可忽視，須繼續(xù)加強(qiáng)和重視對(duì)各種家禽禽流感的監(jiān)測(cè)。

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