蔣 瑩，石秀菊

(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院，濟(jì)南250021)

反流性食管炎繼續(xù)進(jìn)展可發(fā)展為Barrett食管，出現(xiàn)腸上皮化生、低級別上皮內(nèi)瘤變、高級別上皮內(nèi)瘤變，甚至進(jìn)展為腺癌［1］。程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)是一個腫瘤抑制因子，參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤血管形成［2，3］。多項研究發(fā)現(xiàn)PDCD4在多種人類腫瘤組織以及腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)明顯下調(diào)，而且下調(diào)程度高者預(yù)后較差［4～9］。為探討 PDCD4在反流性食管炎進(jìn)展為食管腺癌過程中發(fā)揮的作用［10］，2010年6月～2012年12月，我們檢測并比較了從反流性食管炎到食管腺癌不同階段食管組織中的PDCD4表達(dá)情況?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 88例患者進(jìn)入本研究，其中男47例，女41例，年齡21～78歲。均有消化不良癥狀并行內(nèi)窺鏡檢查，鏡下可見反流性食管炎表現(xiàn)。病理活檢結(jié)果為非腸上皮化生25例(A組)、腸上皮化生25例(B組)、低級別上皮內(nèi)瘤變16例(C組)、高級別上皮內(nèi)瘤變組12例(D組)、腺癌10例(E組)。另取25例消化不良患者的正常食管黏膜組織作為對照組(N組)。

1.2 PDCD4檢測方法 采用免疫組化法。組織塊常規(guī)石蠟包埋，切片，梯度酒精脫水，PBS振洗3次，5 min/次。標(biāo)本置于3%H2O2溶液中室溫孵育30 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。PBS振洗3次，5 min/次。用抗原修復(fù)液在微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)，先用高火使之沸騰，再用低火使之保持于94℃～98℃，維持15 min，自然降至室溫。PBS振洗3次，5 min/次。加正常山羊血清封閉液(中山生物公司)，室溫放置30 min，甩去多余液體。滴加1∶30稀釋的兔抗人PDCD4多克隆抗體，置于濕盒內(nèi)，4℃過夜。PBS振洗3次，5 min/次。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔二抗工作液(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，37℃孵育30 min。PBS振洗3次，5 min/次。DAB顯色(中山生物公司)2～5 min，自來水沖洗終止顯色。

1.3 結(jié)果判定及評分方法 細(xì)胞核及核周染成淡黃或棕黃色為陽性細(xì)胞。在400倍光鏡下觀察20個視野，每個視野計數(shù)200個細(xì)胞，陽性細(xì)胞比例＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分;染色強(qiáng)度淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分;兩項得分的乘積≥1為陽性，其中1～8為弱陽性，＞8為強(qiáng)陽性，＜1為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。組間計量資料比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用Fisher確切概率法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

N 組 PDCD4 表達(dá)量為10.623 ±0.202，其中強(qiáng)陽性25例、弱陽性0例、陰性0例;A組分別為10.569 ±0.128 和 24、1、0 例;B 組分別為 9.423 ±0.025和 23、2、0 例;C 組分別為 6.051 ±0.233 和10、6、0 例;D 組分別為0.902 ±0.201 和0、0、12 例;E 組分別為0.723±0.224和0、0、10例。PDCD4 表達(dá)量D組＜C組＜B組＜A組(P均＜0.05)，E組與D組、A組與N組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。PDCD4表達(dá)陽性率 D、E 組均為 0，N、A、B、C 組均為100%，P ＜0.05。

3 討論

在越來越多的關(guān)于腫瘤進(jìn)展的研究中，PDCD4基因已經(jīng)被認(rèn)為是一種新的腫瘤抑制基因［4］。PDCD4能夠抑制腫瘤誘導(dǎo)物TPI所介導(dǎo)的細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化以及對于這種轉(zhuǎn)化所必需的AP-1依賴性的轉(zhuǎn)錄的激活［5］。還有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤誘導(dǎo)物TPA可以通過磷脂酰肌醇激酶3(PI3K-Akt)和p70s6k以及促分裂原活化蛋白/細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)通路來使PDCD4降解增加［8］。根據(jù)現(xiàn)有的研究，PDCD4蛋白被認(rèn)為扮演著mRNA翻譯抑制物的角色。這一作用是通過PDCD4與翻譯起始因子eIF4A相連接來完成的。PDCD4包含兩個MA3拷貝區(qū)域負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)其與翻譯起始因子eIF4A的緊密連接，而這一連接將導(dǎo)致 eIF4A 解旋活性被抑制［14，15］。PDCD4的N端部分至今還沒有被很好的分析其特性，在體外試驗(yàn)中被證實(shí)該部分可與RNA相連接，但是到目前為止，RNA與PDCD4的連接在體內(nèi)環(huán)境下是否有意義還不明確［6～8］。雖然 PDCD4抑制翻譯的底物未明確，但是這是目前發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制物中惟一的一個可以直接作用于蛋白翻譯過程的。并且一系列研究發(fā)現(xiàn)PDCD4在幾種人類常見腫瘤，如乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等的組織中含量減少，這提示我們PDCD4作為腫瘤抑制物，它的減少對于腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能是必需的［6］。特別是血清剝奪可以激活p70s6k導(dǎo)致PDCD4磷酸化，然后被降解的發(fā)現(xiàn)，更給PDCD4在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的轉(zhuǎn)歸提供了重要線索。這其中涉及了多條信號通路［11，12］。

在反流性食管炎、Barrett食管、食管腺癌的進(jìn)展過程當(dāng)中，食管黏膜組織出現(xiàn)了明顯的組織學(xué)改變。不典型增生被認(rèn)為是病變進(jìn)展為腺癌前最具有侵襲性意義的改變。本研究中筆者檢測了不同病理階段食管黏膜標(biāo)本中PDCD4表達(dá)情況。結(jié)果顯示在高級別上皮內(nèi)瘤變以及腺癌食管組織樣本中，PDCD4蛋白表達(dá)明顯降低或缺失。與正常組織樣本相比，低、高級別上皮內(nèi)瘤變及腺癌樣本組織中PDCD4的核表達(dá)明顯下調(diào)。提示在細(xì)胞內(nèi)PDCD4參與食管黏膜癌變過程，PDCD4表達(dá)程度和食管病變病理分期有關(guān)，檢測食管黏膜組織中PDCD4表達(dá)水平可能有助于判斷食管黏膜病變程度。

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