吳清平, 胡惠娟,2, 張菊梅

(1.廣東省微生物研究所省部共建華南應(yīng)用微生物國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州 510070;2.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院,廣東廣州 510006)

食源性小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生物學(xué)特性和分子分型研究進(jìn)展

吳清平1, 胡惠娟1,2, 張菊梅1

(1.廣東省微生物研究所省部共建華南應(yīng)用微生物國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省菌種保藏與
應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州 510070;
2.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院,廣東廣州 510006)

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersiniaenterocolitica)是一種重要的嗜冷腸道致病菌,研究表明Y.enterocolitica血清型有60多種,我國致病性菌株生物/血清型以3/O:3和2/O:9型為主;另外Y.enterocolitica具有1A、1B、2、3、4、5共6個(gè)生物型,除了1A型可能具有潛在致病性外,其他5個(gè)已確定具有致病性,且1B為高致病性菌株;主要毒力因子有ail、ystA、ystB、yadA和virF,常用來判斷小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的致病性;Y.enterocolitica對(duì)氨芐西林和一代頭孢類抗生素天然耐藥,對(duì)其他抗生素有不同程度耐藥性,并且許多菌株具有多重耐藥性.常用的分子分型方法有脈沖場(chǎng)凝膠電泳、擴(kuò)增基因重復(fù)序列、多位點(diǎn)序列分型等,其中具有操作簡(jiǎn)便和多態(tài)性高的ERIC-PCR在Y.enterocolitica分型中也將發(fā)揮較好作用.

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌;生物特性;分子分型

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersiniaenterocolitica)是一類重要的食源性致病菌,它具有嗜冷性,能在冷藏條件下生長(zhǎng)和繁殖[1],人感染后可引起胃腸道癥狀、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等疾病,甚至引起急性闌尾炎、敗血癥[2],因此致病性Y.enterocolitica被列為重要的食源性病原菌.Y.enterocolitica在環(huán)境中普遍存在,該菌在豬肉、速凍水餃、凍雞翅、熟食等多種食品中常被檢測(cè)到[3-4],近年來,本實(shí)驗(yàn)室在全國范圍系統(tǒng)地進(jìn)行了主要食品中沙門氏菌[5]、大腸桿菌[6]、蠟樣芽孢桿菌[7]、單增李斯特菌[8]、Y.enterocolitica等常見食源性致病菌的污染調(diào)查和分布規(guī)律研究,從食品中分離出大量菌株,初步建立了豐富的菌種資源庫,并展開了生物學(xué)特性和分型相關(guān)的研究.由于Y.enterocolitica具有較多的生物型和血清型,且其致病機(jī)制目前尚不清楚,如生物型1A通常被認(rèn)為不致病,但近年來卻有研究發(fā)現(xiàn)生物型1A有一定程度的致病性[9];另外國內(nèi)外多采用分子分型方法對(duì)該菌進(jìn)行遺傳多樣性研究,但卻尚未建立起系統(tǒng)的分子溯源體系.本文從生物學(xué)特性和分子分型兩方面來闡述Y.enterocolitica的主要研究進(jìn)展,以為該菌的致病性、分子分型建立溯源體系研究提供參考.

1 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生物學(xué)特性

1.1 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生物血清分型

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌抗原構(gòu)造較復(fù)雜,根據(jù)菌體表面O抗原的不同,目前世界上發(fā)現(xiàn)Y.enterocolitica的血清型可以分為60多個(gè)[10],但只有少數(shù)血清型與人類或動(dòng)物的疾病有關(guān),迄今為止經(jīng)證實(shí)對(duì)人有毒力的血清型有O:3、O:9、O:5,27、O:8、O: 13a、O:13b、O:20、O:21等[11],近年來國內(nèi)主要采用O:1,2、O:3、O:5、O:8和O:9這5種抗血清進(jìn)行血清分型.根據(jù)生化反應(yīng)結(jié)果的不同,Y.enterocolitica可以被分為1A、1B、2、3、4、5共6種生物型[12].其中5種生物型已確定具有致病能力,1B型為高致病性菌株,2～5型為低致病性菌株.

已有的研究表明并不是所有的60多種血清型都具有致病性,即使是同一血清型也有致病株和非致病株、致病能力強(qiáng)和致病能力弱之分,通常用生物/血清型聯(lián)合應(yīng)用來表示菌株的生物學(xué)特性. 2010年,肖玉春等[13]對(duì)從我國河南、江蘇、寧夏、福建、吉林等不同省份的腹瀉病人,豬、犬、雞等常見家畜家禽、鼠類、食品與環(huán)境中分離到的427株致病性Y.enterocolitica進(jìn)行生物血清分型,其中213株生物/血清型為2/O:9型,17株為3/O:9型,191株為3/O:3型,6株為4/O:3型;2012年,Liang等[14]從我國生豬屠宰場(chǎng)中分離出850株致病性的Y.enterocolitica,其中有3株生物/血清為2/O:9型,3株4/O:3型,844株3/O:3型,研究表明我國致病性菌株以生物/血清型3/O:3和2/O:9為主.目前在歐洲,致病性Y.enterocolitica以生物/血清型4/O:3為主,2011年,Martinez等[15],從比利時(shí)、意大利和西班牙生豬屠宰場(chǎng)中分離的Y.enterocolitica中,發(fā)現(xiàn)生物/血清型4/O:3在三個(gè)國家都最常見,2/O:5在意大利分離株占1%,3/O:9在比利時(shí)分離株占9%,說明Y.enterocolitica的血清型分布具有地區(qū)差異性.目前,由于Y.enterocolitica血清分型存在血清價(jià)格昂貴、工作量大、不能完全分型等問題,而生物型不能把Y.enterocolitica與中間耶爾森分開,分型結(jié)果不準(zhǔn)等問題,傳統(tǒng)分型方法存在很多弊端,人們已經(jīng)把研究方法從傳統(tǒng)分型轉(zhuǎn)向分子分型方法.

1.2 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌毒力基因

Y.enterocolitica毒力是通過染色體和質(zhì)粒上的毒力基因來調(diào)控的,國內(nèi)外經(jīng)常檢測(cè)其中的5個(gè)主要毒力基因:ail、ystA、ystB、yadA和virF來判斷Y. enterocolitica的致病性[16].

ail是位于染色體上的黏附侵襲位點(diǎn)基因,其作用是幫助細(xì)菌黏附于腸壁,為該菌侵入腸上皮細(xì)胞作準(zhǔn)備,該基因只存在于致病菌株[17],經(jīng)常被用來檢測(cè)Y.enterocolitica是否具有致病性[18].2010年, Huang等[19]對(duì)不同生物/血清型的Y.enterocolitica菌株的ail序列進(jìn)行分析比對(duì),發(fā)現(xiàn)可以將其分為三類,一類是lB/O:8型,具有高致病性的菌株;其他的可分為相近的兩類,均是具有低致病性的菌株,反映出攜帶的ail基因序列不同會(huì)具有不同的致病能力.2011年,Sihvonen等[20]研究發(fā)現(xiàn),有極少數(shù)的被認(rèn)為不具備致病能力的1A生物型Y.enterocolitica也含有ail基因,這表明攜帶ail基因的1A生物型Y.enterocolitica可能具有致病的潛力.

ystA和ystB基因位于染色體上,是耐熱腸毒素基因的兩個(gè)亞型,編碼不同的耐熱腸毒素YstA和YstB,ystA基因主要存在于致病性的菌株[21],在1A生物型菌株中不存在;所有攜帶ystB基因的菌株均為1A生物型,且攜帶ystB基因的Y.enterocolitica均不攜帶其他毒力因子[22].1A生物型Y.enterocolitica,包括大部分?jǐn)y帶ystB基因和極少數(shù)攜帶ail基因兩類,攜帶ail具有致病潛力,攜帶ystB不致病;2004年,Singh等[23]研究發(fā)現(xiàn)在25～30℃體外培養(yǎng)時(shí)Y.enterocolitica產(chǎn)生耐熱性腸毒素,而在37℃時(shí),則沒有該毒素的產(chǎn)生,并且YstA和YstB兩種耐熱腸毒素具有較高的同源性.

yadA和virF是位于質(zhì)粒上的毒力基因,yadA為黏附素基因,編碼黏附素YadA,決定著Y.enterocolitica血清的抗性、自凝、細(xì)胞黏附等免疫作用[24]; virF是yop調(diào)節(jié)子轉(zhuǎn)錄活化因子基因,調(diào)控調(diào)節(jié)蛋白yops的基因表達(dá),與致病性相關(guān)[25],毒力質(zhì)粒存在于致病株中,在培養(yǎng)過程中容易丟失.2013年,孫文魁[26]以從雞、牛、羊、豬等動(dòng)物糞便和生熟肉、蒼蠅中分離到237株Y.enterocolitica為研究對(duì)象,研究發(fā)現(xiàn)分離出的Y.enterocolitica菌株中ystB基因的陽性率最高,為81.4%(193/237),而ail和ystA基因僅在3株菌中檢測(cè)到,陽性率為1.3%(3/237);未檢測(cè)到y(tǒng)adA和virF基因,研究表明ystB基因陽性菌株在不同時(shí)間、地區(qū)和宿主中均為優(yōu)勢(shì)菌株;并按Y.enterocolitica毒力基因攜帶情況分為3個(gè)型別:A型ail-、ystA-、ystB+、virF-、yadA-該型僅含有ystB基因,大部分存在于1A生物型的Y.enterocolitica中,通常被認(rèn)為不致病或致病能力弱;B型為ail-、ystA-、ystB-、virF-、yadA-,該類菌株五種毒力基因均未檢出,通常不會(huì)對(duì)人和動(dòng)物具有致病性; C型為ail+、ystA+、ystB-、virF-、yadA-僅含兩種毒力基因,該型別具有染色體上的兩個(gè)毒力基因,但是質(zhì)粒毒力基因丟失,不具有完整的致病能力.近年來,我們?cè)谑称分蟹蛛x的Y.enterocolitica菌株除了A、B、C毒力基因型外,還分離到菌株為ail+、ystA+、ystB-、virF+、yadA+型別,具有染色體上的兩個(gè)毒力基因和質(zhì)粒上的兩個(gè)毒力基因,致病能力強(qiáng),對(duì)人和動(dòng)物危害大,需要警惕.將Y.enterocolitica按毒力基因攜帶情況分為不同的基因型可以很快識(shí)別該菌的致病能力和危害性,有助于控制該菌的危害.

1.3 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌耐藥性

由于抗菌藥物的廣泛使用,細(xì)菌耐藥性已日益嚴(yán)重,不斷出現(xiàn)的多重耐藥菌株和新的耐藥機(jī)制已成為人類健康面臨的重大挑戰(zhàn).已有研究發(fā)現(xiàn)Y. enterocolitica對(duì)氨芐西林和一代頭孢類抗生素天然耐藥,其機(jī)制主要是Y.enterocolitica可以產(chǎn)生兩種β-內(nèi)酰胺酶BlaA和BlaB[27].BlaA是超廣譜A類酶,可以水解多種青霉素類和頭孢菌素類抗生素,與青霉素和頭孢菌素的耐藥均有關(guān);BlaB是可誘導(dǎo)的C類頭孢菌素酶,具有很強(qiáng)的頭孢菌素酶活性,但不能水解某些青霉素類藥物(氨芐西林、羧芐西林等)與頭孢菌素的耐藥有關(guān)[28].這兩種β-內(nèi)酰胺酶的基因均存在于Y.enterocolitica染色體中,但在不同地區(qū)或者不同生物型菌株的分布情況和表達(dá)水平有所不同.2007年,Baumgartner等[29]的研究發(fā)現(xiàn)部分Y.enterocolitica對(duì)鏈霉素、磺胺類藥物、氯霉素和復(fù)方新諾明等抗生素耐藥,也存在少數(shù)多重(即兩種以上的抗生素)耐藥的菌株.2013年,孫文魁等[30]發(fā)現(xiàn)Y.enterocolitica對(duì)氨芐西林和頭孢唑林的耐藥率超過90%,有71.2%的菌株對(duì)4種及以上的抗菌藥物耐藥.2014年,Bonardi等[31]對(duì)意大利豬屠宰場(chǎng)分離出的22株Y.enterocolitica進(jìn)行耐藥性分析,發(fā)現(xiàn)所有的4/O:3型菌株均對(duì)阿莫西林、環(huán)丙沙星和頭孢他啶耐藥,而對(duì)氨芐青霉素和頭孢噻吩敏感,91%的菌株對(duì)3種以上抗生素耐藥.這些研究表明不同地區(qū)的Y.enterocolitica的抗菌藥物敏感性存在差異,存在耐多種抗菌藥物的“超級(jí)”菌株,并且耐藥性日益嚴(yán)重,需要引起關(guān)注.近年來Y.enterocolitica在臨床各類標(biāo)本中的分離率逐年上升,通過對(duì)分離株耐藥性進(jìn)行檢測(cè),系統(tǒng)建立耐藥性數(shù)據(jù)庫,可提高針對(duì)性和減少抗生素濫用,在臨床中根據(jù)Y.enterocolitica藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用針對(duì)性強(qiáng)的抗生素,可以提高藥效.

2 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌分子分型

2.1 脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型

脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分型法可使用于所有細(xì)菌,被譽(yù)為細(xì)菌分子分型的金標(biāo)準(zhǔn),雖然其分辨力、重復(fù)性等均較好,但這種分型也有許多缺陷,還需要不斷發(fā)展. 2006年,Jin等[32]對(duì)分離的165株致病性Y.enterocolitica的PFGE研究表明,O:3與O:9血清型的主要帶型差異明顯,親緣關(guān)系較遠(yuǎn),O:3血清型三個(gè)主要帶型聚類相似性很高,可能親緣關(guān)系近,而O:9血清型的主要兩個(gè)帶型差異大可能起源于兩個(gè)克隆.2007年,Maria等[33]從豬的扁桃體中分離的72 株Y.enterocolitica,主要生物血清型為4/O:3,用PFGE分析,4/O:3可以分出6個(gè)帶型,其N1和N4為主要帶型.2012年,孫文魁等[34]對(duì)從動(dòng)物糞便和肉制品分離的73株1A生物型Y.enterocolitica菌株用PFGE分析研究,發(fā)現(xiàn)1A生物型有很多克隆,相同或相近的聚類簇中,均包含不同宿主來源的菌株, PFGE分型與宿主未發(fā)現(xiàn)聯(lián)系.2013年,Gilpin 等[35]通過對(duì)432株Y.enterocolitica用PFGE分型研究發(fā)現(xiàn),PFGE對(duì)1A生物型菌株的分辨率很高,分辨力DI為0.997,然而PFGE對(duì)生物型2,3,4分辨力很低,嚴(yán)重限制其分型效果,因此對(duì)從爆發(fā)的耶爾森氏菌病中分離的菌株不能用PFGE進(jìn)行溯源分型.

2.2 擴(kuò)增基因重復(fù)序列分型

擴(kuò)增基因重復(fù)序列(repetitive extragenic palindromic/enterobacterial repetitive intergenic consensuspolymerase chain reaction,(REP/ERIC)-PCR)是通過擴(kuò)增細(xì)菌染色體的基因重復(fù)序列,根據(jù)其數(shù)目及所在位置不同而產(chǎn)生的一種基因指紋分析方法.應(yīng)用于革蘭陰性菌的基因重復(fù)序列主要有兩種:基因外重復(fù)序列(repetitive extragenic palindromic,REP)和基因間重復(fù)序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus sequence,ERIC).2004年,Wojciech 等[36]對(duì)從人、豬和狐貍樣品分離出的35株Y.enterocolitica,分別用ITS-profiling(intergenic transcribed sequence,ITS)、REP-PCR和ERIC-PCR三種方法分型并比較,發(fā)現(xiàn)REP-PCR比另外兩種方法的分辨力高,從豬中分離的菌株與從人分離的菌株有相同的基因型,說明人類感染的Y.enterocolitica有可能來自于豬.同年,Sachdeva等[37]對(duì)分離的81株1A生物型Y.enterocolitica菌株,用 REP-PCR和 ERICPCR進(jìn)行分型,分別可分為19和23個(gè)基因群,其中大多菌株形成兩個(gè)基因群,說明Y.enterocolitica1A生物型主要由兩個(gè)克隆群組成,其中ERIC-PCR分辨力更高.2006年,Falcao等[38]對(duì)從人、動(dòng)物和食品中分離的Y.enterocolitica菌株用PFGE和ERICPCR進(jìn)行分型,分離株主要為4/O:3生物血清型,從人和動(dòng)物分離的4/O:3型菌株基因相似度比從食品分離的高,PFGE分辨力比ERIC-PCR更好.近年來本實(shí)驗(yàn)室先后建立了阪崎腸桿菌[39]、銅綠假單胞菌[40]、蠟樣芽孢桿菌[7]、空腸彎曲菌[41]等的ERIC-PCR分型方法,2013年,在此基礎(chǔ)上建立了Y.enterocolitica的ERIC-PCR分型方法,把從食品中分離的小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌進(jìn)行ERIC-PCR分子分型研究,72個(gè)分離株可分為56個(gè)型共四大簇,其中優(yōu)勢(shì)菌株主要集中在第三簇.該方法操作簡(jiǎn)單、成本較低、分型效果好,克服了傳統(tǒng)分型方法的不足,因此適用于大量的食源性Y.enterocolitica的分型研究,為研究食源性Y.enterocolitica的遺傳多樣性及其分布規(guī)律打下良好的基礎(chǔ).

2.3 多位點(diǎn)序列分型

多位點(diǎn)序列 (multilocus sequence typing, MLST)分型法利用MLST對(duì)研究菌種的少數(shù)幾個(gè)管家基因進(jìn)行等位基因序列分析,重復(fù)性好、可標(biāo)準(zhǔn)化,核酸序列的數(shù)字化存儲(chǔ)方式便于通過網(wǎng)絡(luò)在不同實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行傳輸比對(duì),目前MLST被廣泛應(yīng)用于多種病原菌的分型和進(jìn)化.2005年,Kotetishvili 等[42]對(duì)耶爾森菌屬多個(gè)種的細(xì)菌使用16Sr RNA基因和其他四個(gè)管家基因進(jìn)行MLST分析,發(fā)現(xiàn)鼠疫耶爾森菌與假結(jié)核耶爾森菌具有較近的親緣關(guān)系,是同一譜系的兩個(gè)物種,而魯氏耶爾森菌是和本屬細(xì)菌親緣關(guān)系最遠(yuǎn)的一種.2009年,王鑫等[43]用七個(gè)管家基因?qū).enterocolitica進(jìn)行MLST分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株明顯的形成了致病性菌株與非致病性菌株兩大類別,致病性菌株型別集中,相同血清型致病菌呈現(xiàn)出高度的相似性;而非致病性菌株型別分散,沒有明顯的流行病學(xué)關(guān)聯(lián),呈現(xiàn)明顯的多態(tài)性. 2012年,Sihvonen等[44]對(duì)從人臨床樣本分離的 Y. enterocolitica 1A生物型菌株用16S rRNA基因和七個(gè)管家基因進(jìn)行MLST分析,MLST將菌株分成兩個(gè)不同譜系,基因組1和基因組2,其中基因組1和致病性菌株生物血清4/O:3型相似性更高,這可能表明這些1A生物型菌株存在潛在致病性.2014年, Duan等[45]用52株鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia pestis)、762株假結(jié)核耶爾森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)和201株Y.enterocolitica這三種致病性耶爾森氏菌為研究對(duì)象,用MLST研究它們的物種進(jìn)化關(guān)系,MLST分析顯示這三種耶爾森氏菌分為兩個(gè)組,第一組為 Y.pestis和 Y.pseudotuberculosis,Y. pestis的主要序列型ST90與Y.pseudotuberculosis的ST43有關(guān)聯(lián),它們只有一個(gè)位點(diǎn)的差異,81.25%的ST43菌株血清型為O:1b型,支持了Y.pestis為血清型O:1b的Y.pseudotuberculosis的后裔的觀點(diǎn),第二組為致病性和非致病性的Y.enterocolitica,其中致病性Y.enterocolitica菌株形成了相對(duì)保守的一群,另外血清型O:3、O:8和O:9被分成三個(gè)不同的部分,而非致病性的菌株則很分散.

3 展 望

通過Y.enterocolitica的生物型、血清型和毒力基因可以反映出其致病能力,已有研究表明我國致病性菌株以3/O:3和2/O:9型為主;Y.enterocolitica1A生物型可能具有潛在致病性,攜帶的ail基因序列不同會(huì)具有不同的致病力;近年來,Y.enterocolitica中耐多種抗生素的“超級(jí)”菌株日益普遍,掌握它們對(duì)抗生素的藥敏型別有助于控制其危害;因此摸索該菌生物型、血清型和毒力基因之間的聯(lián)系,找出流行的致病菌株,了解該菌耐藥能力的變化,對(duì)有針對(duì)性的控制致病菌的危害有重大意義,下一步我們將對(duì)從食品污染調(diào)查中分離出的Y.enterocolitica進(jìn)行毒力基因檢測(cè)、生物/血清分型,以了解其致病性;并對(duì)分離株進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn),確定其耐藥性和敏感性的抗生素種類,為進(jìn)一步控制其危害提供依據(jù).

在已建立的許多分子分型方法中,每種分子分型方法都有各自的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),其分辨率、重復(fù)性等水平各有不同,因此應(yīng)根據(jù)研究對(duì)象和目的的不同,選擇一種適合的分型方法.PFGE是分子分型的金標(biāo)準(zhǔn),但對(duì)生物型2,3,4分辨力很低;(REP/ERIC)-PCR操作簡(jiǎn)便,但重復(fù)性不高;MLST通過對(duì)管家基因序列的測(cè)定可以闡述同種間的進(jìn)化關(guān)系,但需實(shí)驗(yàn)費(fèi)用較高;ERIC-PCR操作簡(jiǎn)單、成本低、多態(tài)性高,因此運(yùn)用該方法進(jìn)行Y.enterocolitica的遺傳多樣性研究分析較理想,國外已成功應(yīng)用于Y.enterocolitica[37-38]的分子分型,但國內(nèi)還沒有人將ERICPCR應(yīng)用于Y.enterocolitica的分型,近年來本實(shí)驗(yàn)室在建立一系列食源性致病菌的ERIC-PCR分型方法的基礎(chǔ)上,成功建立Y.enterocolitica的ERIC-PCR反應(yīng)體系并應(yīng)用于大量食品分離株的分型研究,今后需要不斷加強(qiáng)食品中的Y.enterocolitica檢測(cè),獲取更多的菌株,以建立Y.enterocolitica分型數(shù)據(jù)庫,進(jìn)而對(duì)食品安全進(jìn)行溯源和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供支撐.

[1] Annamalai T,Venkitanarayanan K.Expression of major cold shock proteins and genes byYersinia enterocoliticain synthetic medium and foods[J].Journal of Food Protection,2005,68(11):2454-2458.

[2] 邵奎東,鄭威風(fēng),張市,等.耶爾森氏屬主要菌種及其引起疾病概述[J].中國地方病防治雜志,2009,24 (6):417-419.

[3] Lai K T,Peck TO,Kwai L T.Prevalence ofYersinia enterocoliticafrom food and pigs in selected states of Malaysia[J].Food Control,2014,35:94-100.

[4] 張健,劉巧宜,鄧愛志,等.廣州地區(qū)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌分布特性的初步研究[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2008,18(5):875-891.

[5] 陳玲,張菊梅,楊小鵑,等.南方食品中沙門氏菌的污染調(diào)查及分型研究[J].現(xiàn)代食品科技,2013,53 (12):1326-1333.

[6] 賴則冰.食品中大腸桿菌分布規(guī)律及遺傳多樣性研究[D].廣州:暨南大學(xué),2013.

[7] 王君,吳清平,吳克剛,等.蠟樣芽胞桿菌ERIC-PCR分子分型方法的建立[J].現(xiàn)代食品科技,2013,29 (7):1696-1701.

[8] Chen M T,Wu Q P,Zhang JM,et al.Prevalence and characterization of Listeria monocytogenes isolated from retail-level ready-to-eat foods in South China[J].Food Control,2014,38:1-7.

[9] Singh I,Virdi J S.Interaction ofYersinia enterocoliticabiotype1A strains of diverse origin with cultured cells in vitro[J].Japanese Journal of Infectious Diseases,2005, 58(1):31-33.

[10] 李影林.臨床微生物學(xué)及檢驗(yàn)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:1.

[11] Asp lund K,Johansson T,Siitonen A.Evaluation of pulsed-field gel electrophoresis of genomic restriction fragments in the discrimination ofYersinia enterocoliticaO:3[J].Epidemiology and Infection,1998,121(3): 579-586.

[12] Lamps LW,Havens JM,Giibrech L J,et al.Molecular biogrouping of pathogenicYersinia enterocolitica:development of a diagnostic PCR assay with histologic correlation[J].American Journal of Clinical Pathology, 2006,125(5):658-664.

[13] 肖玉春,王鑫,邱海燕,等.中國致病性小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物分型研究[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào), 2010,26(7):651-653.

[14] Liang J,Wang X,Xiao Y,etal.Prevalence ofYersinia enterocoliticain pigs slaughtered in Chinese abattoirs [J].Applied and Environmental Microbiology,2012, 78(8):2949-2956.

[15] Martinez P O,Fredriksson-Ahomaa M,Pallotti A,et al.Variation in the prevalence of enteropathogenic Yersinia in slaughter pigs from Belgium,Italy,and Spain [J].Foodborne Pathogens and Disease,2011,8(3): 445-450.

[16] Karimova TV,BogumiPchik EA,Voskresenskaia E A, et al.Molecular-biological characteristic ofYersinia enterocoliticacirculating in various regions of Russian Federation[J].Europe PubMed Central,2012,1(1):16-21.

[17] Miller V L,Falkow S.Evidence of two genetic loci inYersinia enterocoliticathat can promote invasion of epithelial cells[J].Infection and Immunity,1988,56(5): 1242-1248.

[18] 牛蕾.小腸結(jié)腸炎耶爾森菌快速檢測(cè)體系的建立及應(yīng)用[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2011.

[19] Huang Y,Wang X,Cui Z,et al.Possible use of ail and foxA polymorphisms for detecting pathogenicYersinia enterocolitica[J].BMC Microbiology,2010,10:211.

[20] Sihvonen LM,Hallanvuo S,Haukka K,et al.The ail gene is present in someYersinia enterocoliticabiotype1A strains[J].Foodborne Pathogens and Disease,2011,8 (3):455-457.

[21] Delor I,Kaeckenbeeck A,Wauters G,et al.Nucleotide sequence of yst,theYersinia enterocoliticagene encoding the heat-stable enterotoxin and prevalence of the gene among pathogenic and nonpathogenic Yersinia[J]. Infection and Immunity,1990,58(9):2983-2988.

[22] 王增國.我國部分地區(qū)攜帶ystB基因的小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的分子流行病學(xué)研究[D].鎮(zhèn)江:江蘇大學(xué),2008.

[23] Singh I,Virdi J S.Production of Yersinia stable toxin (YST)and distribution of ystgenes in biotype1A strains ofYersinia enterocolitica[J].Journal of Medical Microbiology,2004,53(11):1065-1068.

[24] Rautemaa R,Meri S.Complement-resistance mechanisms of bacteria[J].Microbes and Infection 1999,1: 785-794.

[25] Fabrega A,Vila J.Yersinia enterocolitica:pathogenesis, virulence and antimicrobial resistance[J]. Enfermedades Infecciosasy Microbiologia Clinica,2012,30 (1):24-32.

[26] 孫文魁.小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物型特征和分子分型研究[D].濟(jì)南:山東大學(xué),2013.

[27] Coraelis G,Abraham E P.β-Lactamases fromYersinia enterocolitica[J].Journal of General Microbiology, 1975,87(2):273-284.

[28] Bent ZW,Young G M.Contribution of BlaA and BlaB β-lactamases to antibiotic susceptibility ofYersinia enterocoliticabiovar 1B[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy,2010,54(9):4000-4002.

[29] Baumgartner A,Kuffer M,Suter D,et al.Antimicrobial resistance ofYersinia enterocoliticastrains from human patients,pigs and retail pork in Switzerland[J].International Journal of Food Microbiology,2007,115(1): 110-114.

[30] 孫文魁,畢振旺,寇增強(qiáng),等.163株小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的抗菌藥物敏感性分析[J].中國人畜共患病學(xué)報(bào),2011,29(4):339-342.

[31] Bonardi S,Alpigiani I,Pongolini S,et al.Detection enumeration and characterization ofYersinia enterocolitica4/O:3 in pig tonsils at slaughter in Northern Italy [J].International Journal of Food Microbiology,2014, 177:9-15.

[32] Jin D,Cui ZG,Xiao Y C,et al.Molecular typing of the pathogenicYersinia enterocoliticastrains with pulsed field gel electrophoresis isolated in China[J].Chinese Journal of Epidemiology,2006,27(8):677-680.

[33] Maria F A,Andreas S,Rogre S.Prevalence of pathogenicYersinia enterocoliticain pigs slaughtered at a Swiss abattoir[J].International Journal of Food Microbiology,2007,119(3):207-212.

[34] 孫文魁,胡彬,畢振旺,等.2008—2009年山東省生物1A型小腸結(jié)腸炎耶爾森菌分子亞型的研究[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2012,46(12):1103-1106.

[35] Gilpin B J,Robson B,Lin S,et al.The limitations of pulsed-field gel electrophoresis for analysis ofYersinia enterocoliticaisolates[J].Zoonoses and Public Health, 2013,15:1-6.

[36] Wojciech L,Staroniewicz Z,Jakubczak A,et al.Typing ofYersinia enterocoliticaisolates by ITS profiling,REP-and ERIC-PCR[J].Journal of Veterinary Medicine, Series B,2004,51(5):238-244.

[37] Sachdeva P,Virdi J S.Repetitive elements sequence (REP/ERIC)-PCR based genotyping of clinical and environmental strains ofYersinia enterocoliticabiotype 1A reveal existence of limited number of clonal groups[J]. FEMSMicrobiology Letters,2004,240(2):193-201.

[38] Falcao J P,Falcao D P,Pitondo S A,et al.Molecular typing and virulence markers ofYersinia enterocoliticastrains from human,animal and food origins isolated between 1968 and 2000 in Brazil[J].Journal of Medical Microbiology,2006,55(11):1539-1548.

[39] Ye Y W,Wu Q P,Zhou Y H,et al.Analysis ofmajor band of Enterobacter sakazakii by ERIC-PCR and development of a species-specific PCR for detection of Ent. sakazakii in dry food samples[J].Journal of Microbiological Methods,2008,75(3):392-397.

[40] 李飛,吳清平,張菊梅,等.礦泉水和山泉水中糞鏈球菌污染調(diào)查及主要污染菌株的ERIC-PCR分型研究[J].微生物學(xué)通報(bào),2013,40(5):881-890.

[41] 鄭揚(yáng)云,吳清平,吳克剛,等.空腸彎曲菌分離株ERIC-PCR分型和生化分型的比較研究[J].現(xiàn)代食品科技,2013,29(8):1834-1850.

[42] KotetishviliM,Kreger A,Wauters G,etal.Multi locus sequence typing for studying genetic relationships among Yersinia species[J].Journal of Clinical Microbiology, 2005,43(6):2674-2684.

[43] 王鑫.中國小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌分子流行病學(xué)研究[D].北京:中國疾病預(yù)防控制中心,2009.

[44] Sihvonen LM,Jalkanen K,Huovinen E,etal.Clinical isolates ofYersinia enterocoliticabiotype 1A represent two phylogenetic lineageswith differing pathogenicity-related properties[J].BMC Microbiology,2012,12:208 -219.

[45] Duan R,Liang JR,Shi JX,et al.Homology analysis of pathogenic Yersinia SpeciesYersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis,and Yersinia pestis based on Multi locus sequence typing[J].Journal of Clinical Microbiology,2014,52(4):20-29.

(責(zé)任編輯:李 寧)

專家論壇專欄

編者按:“切實(shí)保障糧食安全”位居中央經(jīng)濟(jì)工作會(huì)議2014年經(jīng)濟(jì)六大任務(wù)之首.2013年,我國糧食總產(chǎn)量突破6億噸,實(shí)現(xiàn)“十連增”.在連年豐收的背景下強(qiáng)調(diào)“糧食安全”,顯示了中央政府未雨綢繆的態(tài)度.本期專家論壇欄目邀請(qǐng)了2位專家,從種植、收購、儲(chǔ)藏、物流運(yùn)輸?shù)?個(gè)環(huán)節(jié)中可能出現(xiàn)的糧食質(zhì)量安全相關(guān)問題及對(duì)策進(jìn)行闡述.希望通過專家的分析和建議,能為預(yù)警和改善糧食質(zhì)量安全狀況提供有益幫助.

(欄目策劃:李 寧)

Biological Characteristics and M olecular Typing Research Progress ofYersinia enterocolitica

WU Qingping1, HU Huijuan1,2, ZHANG Jumei1
(1.State Key Laboratory of Applied Microbiology in South China(Ministry-Guangdong Province Jointly Breeding Base)/Guangdong Provincial Key Laboratory ofMicrobial Culture Collection and Application/Guangdong Open Laboratory of Applied Microbiology,Guangdong Institute ofMicrobiology,Guangzhou 510070,China;
2.School of Bioscience and Bioengineering/South China University of Technology,Guangzhou 510006,China)

Yersinia enterocoliticais an important psychrophilic pathogenic bacterium in the intestines. There aremore than 60 serotypes in the world.The serotypes of the pathogenic strains are the bioserovars 3/O:3 and 2/O:9 type in China.Y.enterocoliticahas six biotypes including 1A,1B,2,3,4,and 5. Five biotypes among them have been identified being pathogenic and type 1B is high pathogenic.Meanwhile,type 1A has potential pathogenicity.The virulence factors are mainly ail,ystA,ystB,yadA,and virF,which are usually used to determineY.enterocoliticapathogenicity.Y enterocolitica is resistant to penicillins and first generation cephalosporins naturally,and has different resistant rates to other antimicrobial agents and many strainswith multiple drug resistance.Pulsed-field gel electrophoresis(PFGE), repetitive elements sequence(REP/ERIC)-PCR,multi locus sequence typing(MLST)and so on are the most frequently usedmethods forY.enterocoliticamolecular typing nowadays.ERIC-PCR typing has easy operation and high polymorphism,which will also play a good role in themolecular typing ofY.enterocolitica.

Yersinia enterocolitica;biological characteristics;molecular typing

TS201.3

10.3969/j.issn.2095-6002.2014.04.001

2095-6002(2014)04-0001-07

吳清平,胡惠娟,張菊梅.食源性小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生物學(xué)特性和分子分型研究進(jìn)展.食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào), 2014,32(4):1-7. WU Qingping,HU Huijuan,ZHANG Jumei.Biological characteristics and molecular typing research progress ofYersinia enterocolitica.Journal of Food Science and Technology,2014,32(4):1-7.

2014-06-01

國家國際科技合作專項(xiàng)(2013DFH30070);廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012B050800007).

吳清平,男,研究員,博士,主要從事食品微生物安全監(jiān)測(cè)與控制技術(shù)方面的研究.