彭廣軍，楊偉紅，曹國(guó)輝，常海哲，賈雪梅

（河北大學(xué)附屬醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科，河北 保定 071000）

·臨床研究·

急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒與CD8+CD28+T細(xì)胞、CD8+CD28-T細(xì)胞相關(guān)性及意義

彭廣軍，楊偉紅，曹國(guó)輝，常海哲，賈雪梅

（河北大學(xué)附屬醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科，河北 保定 071000）

目的 探討急性甲胺磷農(nóng)藥中毒早期血藥濃度與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系。 方法 選擇河北大學(xué)附屬醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科2007年1月至2013年6月收治的92例口服急性甲胺磷農(nóng)藥中毒患者，按中毒程度分為輕中度中毒組54例和重度中毒組38例，另選同期健康體檢者92例為對(duì)照組，檢測(cè)并分析中毒患者血藥濃度與CD3+、CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-的關(guān)系。 結(jié)果 重度中毒組血藥濃度水平較輕中度中毒組明顯高 （P＜0.01），CD3+、CD8+、CD8+CD28+細(xì)胞數(shù)較輕中度中毒組明顯低（P＜0.01），而CD8+CD28-細(xì)胞數(shù)較輕中度中毒組明顯高（P＜0.01）。 結(jié)論 急性甲胺磷農(nóng)藥中毒早期血藥濃度越高，中毒程度愈重，細(xì)胞免疫受損越嚴(yán)重。

甲胺磷；血藥濃度；CD8+CD28+；CD8+CD28-

急性甲胺磷農(nóng)藥中毒可引起機(jī)體多臟器功能損害及多種生化指標(biāo)的改變，同時(shí)還可伴有免疫功能減退。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的一大細(xì)胞群，檢測(cè)T淋巴細(xì)胞是觀察機(jī)體免疫的重要方法之一。急性甲胺磷農(nóng)藥中毒患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化已有少量文獻(xiàn)介紹[1]。為了探討血藥濃度與人體CD3+、CD8+、CD8+CD28-、CD8+CD28+的關(guān)系，對(duì)92例急性甲胺磷農(nóng)藥中毒患者血藥濃度、CD3+、CD8+、CD8+CD28-、CD8+CD28+進(jìn)行了檢測(cè)，并分析其相關(guān)性及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2007年1月至2013年6月河北大學(xué)附屬醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科收治甲胺磷農(nóng)藥中毒（均為口服農(nóng)藥）患者共92例，按中毒程度分為輕中度中毒組54例和重度中毒組38例。男37例，女55例，年齡36～49歲，選擇同期河北大學(xué)附屬醫(yī)院門診健康體檢者92名為對(duì)照組，各組均排除心、肺、腎臟疾病，自身免疫病，免疫缺陷病，超敏反應(yīng)性疾病，且未使用過免疫抑制劑史，各組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

急性甲胺磷農(nóng)藥中毒的診斷符合以下標(biāo)準(zhǔn)[2]：（1）有暴露史；（2）相關(guān)中毒癥狀及體征，特別是呼出氣大蒜味，瞳孔縮小，多汗。肺水腫、肌纖維顫動(dòng)和昏迷的患者；（3）全血膽堿酯酶（CHE）活力有不同程度降低；（4）血、胃內(nèi)容物檢測(cè)出有機(jī)磷農(nóng)藥及代謝物。

1.3 中毒程度分級(jí)

臨床中毒程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[2]：（1）輕度中毒為僅有毒蕈堿樣癥狀，CHE活力70%～50%；（2）中度中毒為毒蕈堿樣癥狀加重，出現(xiàn)煙堿樣癥狀，CHE活力50%～30%；（3）重度中毒為具有毒蕈堿樣癥狀和煙堿樣癥狀，并伴有肺水腫、抽搐、昏迷、呼吸肌麻痹和腦水腫，CHE活力30%以下。

1.4 觀察指標(biāo)

在中毒后72 h檢測(cè)各組CD3+、CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-水平，在中毒6 h檢測(cè)輕中、重度中毒組患者的血藥濃度。

1.5 檢測(cè)及治療方法

CD3+、CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-檢測(cè)：每例抽取肘靜脈血2 mL，采用EDTA-Na2抗凝后，取100 μL抗凝全血，分別加入抗CD3+、CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-熒光抗體各20 μL（法國(guó)Immunotech公司生產(chǎn)），對(duì)淋巴細(xì)胞作標(biāo)記并且混勻、避光、在室溫下放置15 min，再分別加入0.12%甲酸及1%多聚甲醛進(jìn)行固定，完成溶解紅細(xì)胞及固定15 min（美國(guó)Coulter公司，CoaHem型Q-PREP機(jī)），穩(wěn)定20 min后每100 μL血樣采用流式細(xì)胞儀（BECKMAN公司，型號(hào)為ESPIL-XL）檢測(cè)1×104個(gè)淋巴細(xì)胞，對(duì)被熒光單抗標(biāo)記的抗原陽(yáng)性的細(xì)胞計(jì)數(shù)，以百分率表示。

血藥濃度檢測(cè)：每例取肘靜脈血清0.5 mL置于10 mL具塞比色管中，然后加入丙酮2.0 mL，混勻2.0 min在混勻器上，置于離心機(jī)上3 000 r/min離心10 min，取其上清液，合并萃取液，用丙酮定容至4.0 mL并搖勻，遂用氣相色譜儀分析（美國(guó)安捷倫公司，型號(hào)Agilent 7890A）。經(jīng)過丙酮萃取以后，采用火焰光度氣相色譜法測(cè)定甲胺磷農(nóng)藥含量。

中毒患者入院后立即給予常規(guī)洗胃，常規(guī)氯磷定、阿托品等治療。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS10.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，2組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者血藥濃度比較

重度中毒組血藥濃度明顯高于輕中度中毒組，2組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 各組血藥濃度比較（x±s）

2.2 3組T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

單因素方差分析結(jié)果顯示，3組CD8+CD28+、CD8+CD28-水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），其中CD8+CD28-于3組間重度中毒組＞輕中度中毒組＞對(duì)照組；3組CD3+、CD8+水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且重度中毒＜輕中度中毒＜對(duì)照組。見表2。

SNK-q檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，重度中毒組CD3+、CD8+、CD8+CD28+明顯低于輕中度中毒組（q=6.75、6.58、6.48，均P＜0.01）；重度中毒組CD8+CD28-明顯高于輕中度中毒組（q=6.54，P＜0.01）。見表2。

表2 3組T淋巴細(xì)胞亞群水平比較（x±s）

3 討論

急性甲胺磷農(nóng)藥中毒是一種以有機(jī)磷毒物與機(jī)體內(nèi)膽堿酯酶結(jié)合，繼而引起全身病理生理變化的疾病。部分資料顯示[4]，有機(jī)磷農(nóng)藥中毒最初可導(dǎo)致各個(gè)實(shí)質(zhì)臟器的病理生理變化，繼而會(huì)導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞免疫系統(tǒng)功能的減退。了解血藥濃度與生化及免疫學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性，對(duì)急性甲胺磷農(nóng)藥中毒的病情判斷、合理指導(dǎo)綜合治療至關(guān)重要。

T淋巴細(xì)胞使機(jī)體的免疫功能得以正常維持。當(dāng)各T淋巴細(xì)胞亞群在數(shù)量上發(fā)生變化，功能上也發(fā)生異常時(shí)，機(jī)體免疫功能發(fā)生紊亂，繼而出現(xiàn)一系列病理生理變化。

本次試驗(yàn)通過對(duì)重度中毒組、輕中度中毒組、正常組的血藥濃度比較，發(fā)現(xiàn)重度中毒組明顯高于輕中度中毒組，能一定程度反映中毒程度。CD3+是成熟總T細(xì)胞的標(biāo)志之一，本研究還發(fā)現(xiàn)急性甲胺磷中毒患者CD3+的水平重度中毒＜輕中度中毒＜對(duì)照組。CD3+與TCR組成T細(xì)胞膜受體復(fù)合物[5]。CD3+下降表明成熟T細(xì)胞總數(shù)減少，原因可能是急性甲胺磷農(nóng)藥中毒患者T細(xì)胞凋亡增加，是T細(xì)胞與疾病作斗爭(zhēng)的結(jié)果，使機(jī)體避免遭受過強(qiáng)的免疫反應(yīng)，使其免于繼發(fā)性損傷。

CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞增生和細(xì)胞轉(zhuǎn)換可以維持機(jī)體免疫內(nèi)穩(wěn)狀態(tài)[6]。急性甲胺磷農(nóng)藥中毒后患者CD8+T細(xì)胞及其亞群的明顯消亡使得CD8+T細(xì)胞免疫儲(chǔ)備量迅速減少，不能充分接觸抗原發(fā)生免疫應(yīng)答[7]。急性甲胺磷中毒患者CD8+CD28-較正常人高，重度中毒組＞輕度中毒組，且血藥濃度越高，CD8+CD28-越高；而CD8+CD28+隨著血藥濃度越高，降低愈顯著。根據(jù)CD28的表達(dá)與否CD8+T細(xì)胞分為CD8+CD28-及CD8+CD28+；CD8+CD28+即殺傷效應(yīng)細(xì)胞，可以溶解靶細(xì)胞還可誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，發(fā)揮殺傷作用；而CD8+CD28-T細(xì)胞是記憶性CD8+T細(xì)胞的標(biāo)志，其中一部分為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg），主要起下調(diào)作用（即抑制作用），該群細(xì)胞比例往往隨年齡增加而增多，在自身免疫病中細(xì)胞數(shù)下降，即該細(xì)胞的增多或功能增強(qiáng)意味著免疫功能下降；CD8+CD28-T細(xì)胞的增加和CD8+CD28+T細(xì)胞的缺失是T細(xì)胞功能下降的主要標(biāo)志[8]。

綜上所述，本研究提示，急性甲胺磷農(nóng)藥中毒患者中毒后CD8+CD28+、CD8+CD28-及血藥濃度與中毒程度密切相關(guān)，血藥濃度越高，中毒程度越重，CD3+、CD8+下降愈明顯，CD8+CD28-T細(xì)胞的增加和CD8+CD28+T細(xì)胞的缺失預(yù)示著細(xì)胞免疫功能低下或失衡，免疫失衡加速病情的進(jìn)展，感染發(fā)生的概率增加，甚至發(fā)生多臟器功能衰竭，無疑增加了治療難度。因此，臨床上急性甲胺磷農(nóng)藥中毒患者細(xì)胞免疫功能低下與中毒劑量、病情嚴(yán)重程度有關(guān)，治療上除了膽堿酯酶復(fù)能劑與阿托品外，早期應(yīng)注意毒物的清除，減少毒物吸收，也應(yīng)注意免疫功能的調(diào)節(jié)與改善，以便提高患者的治愈率。

[1] 陸再英, 鐘南山. 內(nèi)科學(xué)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2001: 1139-1143.

[2] 葉任高. 內(nèi)科學(xué)[M]. 5 版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2002: 956-957.

[3] 彭樹楠. 有機(jī)磷中毒搶救治療與管理[M]. 北京: 群眾出版社, 1990: 64-65.

[4] 劉林修, 劉思管, 程文偉, 等. 血清單核細(xì)胞趨化蛋白-1 在急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒中的表達(dá)及臨床意義[J]. 中國(guó)急救醫(yī)學(xué), 2011, 31(1): 69-70.

[5] GANSE W G, EKKENS M, NGUYEN D, et al. The development of CD4+T effector cells during the type 2 immune[J]. Immunol Res, 1999, 20(1): 55-65.

[6] BELKAID Y, ROUSE B T. Natural regulatory T cells in infrctious disease[J]. Nat Immunol, 2005, 6(4): 353-360.

[7] 姚永明. 多臟器功能障礙綜合征發(fā)病機(jī)制研究新進(jìn)展[J]. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志, 2001, 10(1): 63-64.

[8] GODLOVE J, CHIU W K, WENG N P. Gene expression and generation of CD28-CD8 T cellsmediated by interleukin 15[J]. Exp Gerontol, 2007, 42(5): 412-415.

（責(zé)任編輯：高艷華）

Correlation and significance of acute organophosphorus pesticide poisoning with CD8+CD28+T cells, CD8+CD28-T cells

PENG Guangjun, YANG Weihong, CAO Guohui, CHANG Haizhe, JIA Xuemei
(Department of Emergency Medicine, Affiliated Hospital of Hebei University, Baoding 071000, China)

Objective To investigate the early blood drug concentration correlations of acute methamidophos poisoning with T lymphocyte subsets. Methods 92 patients with acute methamidophos pesticide taken orally admitted into Affiliated Hospital of Hebei University between January, 2007 to June, 2013 were selected. According to the degree of poisoning, they were divided into mild, moderate poisoning group (54 cases) and severe poisoning group (38 cases), another 92 healthy people who taken physical check-up as control group. Detection and analysis of the relationship between serum drug concentration and toxic CD3+, CD8+, CD8+CD28+, CD8+CD28-were conducted. Results The concentration of blood drug level of severe poisoning group was significantly higher than that of mild and moderate poisoning group (P＜0.01). CD3+, CD8+, CD8+CD28+cell number were decreased significantly than that of mild and moderate poisoning group (P＜0.01). but the number of CD8+CD28-cells were significantly increased than that of mild and moderate poisoning group (P＜0.01). Conclusion The higher the early blood drug concentration of acute methamidophos poisoning, the degree of poisoning is severer, the more seriously impaired the immune cells are.

Methamidophos; blood drug concentration; CD8+CD28+; CD8+CD28-

R595

A

1674-490X(2014)04-0008-04

2014-06-05

保定市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（12ZF080）

彭廣軍（1965—），男，河北棗強(qiáng)人，主任醫(yī)師，碩士，主要從事急診醫(yī)學(xué)研究。E-mail: pgj650625@sina.com