廖娟

【摘要】目的：探討晚期胃癌患者化療前后細(xì)胞免疫及調(diào)節(jié)T細(xì)胞（Tregs）的變化及其臨床價(jià)值。方法 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)健康志愿者及晚期胃癌患者化療前后外周血CD4+T、CD8+T細(xì)胞及調(diào)節(jié)T細(xì)胞的比例變化。結(jié)果 晚期胃癌患者化療前外周血CD4+T細(xì)胞所占比例和CD4+T/CD8+T均較化療后低，且二者均低于健康對(duì)照組（P<0.05）。晚期胃癌患者CD4+CD25+T細(xì)胞和Tregs細(xì)胞所占比例化療后較化療前有所降低，二者均明顯高于健康對(duì)照組。結(jié)論 化療能明顯減輕晚期胃癌患者的腫瘤免疫耐受，改善免疫狀況。

【關(guān)鍵詞】免疫調(diào)節(jié)T細(xì)胞；胃癌；化療；細(xì)胞免疫；

【Abstract】Objective To investigate the changes of cellular immune function and CD4+ CD25+ regulatory T cells （Tregs） in peripheral blood of patients with advanced gastric cancer before and after chemotherapy and their clinical implications. Methods The proportion of CD4+ CD25+ Tregs among CD4+ T lymphocytes and the proportion of CD4+ and CD8+ T cells of PBMC in peripheral blood of 32 patients with advanced gastric cancer was determined by flow cytometry before 1 day and 1 week after chemotherapy. Results Compared with control group， the levels of CD4+ T lymphocytes and CD4+/CD8+ T lymphocytes decreased in patients with advanced gastric cancer before and after chemotherapy， but the data after treatment was higher than before. The percentage of CD4+CD25+ T cells and Tregs among CD4+ T lymphocytes significantly changed after chemotherapy as compared with that before chemotherapy， the difference was significant between the patients and the healthy subjects. Conclusion chemotherapy can improve the immune function of patients with advanced gastric cancer.

【key words 】immunoregulatory cells ； gastric cancer； chemotherapy； cellular immunity

【中圖分類號(hào)】R735.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2014）04-0004-01

胃癌是我國發(fā)病率較高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，病死率高；與其他惡性腫瘤一樣，胃癌的發(fā)生與發(fā)展與腫瘤的免疫耐受相關(guān)，調(diào)節(jié)T細(xì)胞作為主要的免疫負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞促進(jìn)腫瘤的免疫耐受，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展?；熥鳛榕R床治療胃癌的重要方法之一， 能否影響胃癌患者細(xì)胞免疫及調(diào)節(jié)T細(xì)胞，目前報(bào)道甚少。本研究從腫瘤免疫角度，初步探討化療對(duì)晚期胃癌患者調(diào)節(jié)T細(xì)胞及細(xì)胞免疫功能的影響，為胃癌治療的療效觀察提供一定的免疫學(xué)依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

胃癌患者均為川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2010年9月～2013年4

月就診的經(jīng)病理及臨床確診為晚期胃癌患者，共45例，其中男性29例，女性16例，年齡44～80歲，中位年齡59歲。病理組織學(xué)類型：乳頭狀腺癌18例、管狀腺癌11例、粘液腺癌9例、印戒細(xì)胞癌7例，組織分級(jí)：高分化18例，中分化16例，低分化11例。所有患者均無免疫相關(guān)性疾病，未使用抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)治療。本研究中所有患者均統(tǒng)一采用PLF方案化療（氟尿嘧啶+亞葉酸鈣+奧沙利鉑），化療期間水化，止吐等常規(guī)藥物輔助治療。正常對(duì)照由我院體檢中心提供的健康體檢者20例，男性12例，女性8例，年齡22～65歲。分別設(shè)化療前和化療后為A組和B組，對(duì)照組為C組。

1.2 主要的試劑及設(shè)備

FITC標(biāo)記鼠抗人CD4抗體、PE標(biāo)記鼠抗人CD25抗體、PE-CY5標(biāo)記的鼠抗人CD8抗體，F(xiàn)ITC、PE及PE-CY5標(biāo)記的鼠抗人IgG1同型對(duì)照抗體（均購自美國eBioscience公司）；流式細(xì)胞檢測(cè)儀（P07900102，美國BD公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用流式細(xì)胞技術(shù)。用EDTA-K2抗凝劑采血管收集胃癌患者化療前前1天及化療后1周和健康志愿者的靜脈血3ml，取100μl當(dāng)天行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例、CD4+T淋巴細(xì)胞及CD8+T淋巴細(xì)胞占單個(gè)核淋巴細(xì)胞（PBMC）的比例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料均以X±s表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)（采用One-way ANOVA，其中兩兩比較用LSD或Dunnett's T3檢驗(yàn)）。

2 結(jié)果：

2.1 胃癌患者外周血T細(xì)胞亞群變化

3 討論

胃癌的發(fā)生、發(fā)展與遺傳易感性、環(huán)境等諸多因素相關(guān)，機(jī)體的免疫功能狀況在胃癌的促成中亦扮演了重要的角色。機(jī)體抗腫瘤免疫以細(xì)胞免疫為主， T淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)控、監(jiān)視作用對(duì)防止腫瘤的發(fā)生發(fā)展尤其重要。CD4+T/CD8+T細(xì)胞比值變化反映機(jī)體免疫狀態(tài)的變化，其比值降低，宿主免疫功能低下致抗腫瘤作用減弱，有利于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。 我們發(fā)現(xiàn)，胃癌患者外周血CD4+T及CD4+T/C8+T比值均較正常人明顯下降，提示胃癌患者細(xì)胞免疫功能降低，利于腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展。

引起胃癌患者細(xì)胞免疫功能低下原因很多，其中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（CD4+CD25highTreg）的作用日益凸顯。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞屬T細(xì)胞亞群，在維持機(jī)體免疫自穩(wěn)、調(diào)控免疫應(yīng)答方面起重要作用，可誘導(dǎo)腫瘤的免疫耐受關(guān)系到惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后[1]。已有研究證明，肝癌

、前列腺癌、肺癌等多種實(shí)體腫瘤患者體內(nèi)Tregs數(shù)量顯著增加，通過抑制多種免疫細(xì)胞的作用導(dǎo)致腫瘤免疫耐受 [2-4]，使腫瘤逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視不斷生長，亦是導(dǎo)致腫瘤治療療效不理想的重要因素。我們通過檢測(cè)胃癌患者外周血發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在胃癌患者體內(nèi)表達(dá)增多，從而誘導(dǎo)腫瘤的免疫耐受；同時(shí)CD4+/CD8+比例下降，說明胃癌患者Tregs細(xì)胞可能通過抑制CD4+T細(xì)胞的增殖， 導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞亞群之間的比例失調(diào)致免疫耐受，從而逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視不斷生長。

腫瘤生長的局部環(huán)境與其發(fā)展密切相關(guān)，多種惡性腫瘤組織及浸潤淋巴細(xì)胞中也可以檢測(cè)出Treg[5]。腫瘤分泌的VEGF、COX-2、TGF-β等因子，可直接或間接地誘導(dǎo)Treg的擴(kuò)增及轉(zhuǎn)化，使腫瘤組織中Treg顯著增多[6-7]，而Treg通過抑制NK細(xì)胞等各種免疫活性細(xì)胞使惡性腫瘤逃脫宿主的免疫監(jiān)視而持續(xù)生長。由此可見，Treg與腫瘤細(xì)胞互為因果形成惡性循環(huán)，減少調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在腫瘤患者體內(nèi)的表達(dá)可能阻斷這一循環(huán)從而達(dá)到抑制腫瘤生長的目的。已有報(bào)道，手術(shù)可下調(diào)胃癌患者體內(nèi)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的表達(dá)，化療是目前廣泛用于晚期胃癌患者的重要治療方法之一，其能否改善患者免疫狀況、能否通過影響調(diào)節(jié)性T細(xì)胞打破腫瘤的免疫耐受，目前并不清楚。我們通過檢測(cè)胃癌患者化療前后的外周血，發(fā)現(xiàn)經(jīng)化療后，胃癌患者外周血Treg明顯下降、CD4+T及CD4+T/CD8+T比例不同程度上升，說明化療可下調(diào)胃癌患者體內(nèi)Treg的表達(dá)，減輕腫瘤的免疫耐受，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。這一發(fā)現(xiàn)，從腫瘤免疫角度對(duì)胃癌化療療效提供了理論基礎(chǔ)，為制定胃癌綜合治療方案提供了新的思路。

參考文獻(xiàn)

[1]Ke X， Wang J， Li L， et al. Roles of CD4+CD25（high） FOXP3+ Tregs in lymphomas and tumors are complex[J]. Front Biosci， 2008， 13： 3986-4001.

[2] Feng X， Li B， et al.Increased frequency of CD4+CD25（high）FoxP3+ regulatory T cells in patients with hepatocellular carcinoma. [J]Arch Immunol Ther Exp （Warsz）. 2011 Aug；59（4）：309-14.

[3]Yokokawa J， Cereda V， et al.Enhanced functionality of CD4+CD25（high）FoxP3+ regulatory T cells in the peripheral blood of patients with prostate cancer. [J] Clin Cancer Res. 2008 Feb 15；14（4）：1032-40.

[4] Shimizu K， Nakata M， et al.Tumor-infiltrating Foxp3+ regulatory T cells are correlated with cyclooxygenase-2 expression and are associated with recurrence in resected non-small cell lung cancer. [J] Thorac Oncol. 2010 May；5（5）：585-90.

[5] Pandiyan P， Zheng L， Ishihara S， et al. CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells induce cytokine deprivation-mediated apoptosis of effector CD4+ T cells[J]. Nat Immunol， 2007， 8（12）： 1353-1362.

[6] Sharma S， Yang SC， Zhu L， et al. Tumor cyclooxygenase-2/prostaglandin E2-dependent promotion of FOXP3 expression and CD4+ CD25+ T regulatory cell activities in lung cancer[J]. Cancer Research， 2005， 65（12）： 5211-5220.

[7] Liu XQ， Lu K， et al. Up-regulated expression of indoleamine 2，3-dioxygenase 1 in non-Hodgkin lymphoma correlates with increased regulatory T-cell infiltration. [J].Leuk Lymphoma. 2014 Feb；55（2）：405-14.