付莉　任喜梅　賈平

【摘要】目的：觀察CD44+和Ki67+癌干細胞的在喉癌中的表達特征及其與臨床病理的關(guān)系。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色， 檢測了18例正常喉黏膜，69例鱗狀細胞癌患者中CD44和Ki67+的表達，定位CD44+和Ki67-細胞，并觀察、計數(shù)。結(jié)果：CD44+細胞在正常粘膜組幾乎不表達，而在喉鱗狀細胞癌組表達豐富，兩者差別經(jīng)獨立樣本t檢驗，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），Ki67+細胞在正常粘膜組只在基底細胞層散在表達，在喉鱗狀細胞癌組織中表達豐富，兩者差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；喉鱗狀細胞癌患者中，不同性別、年齡、臨床分型之間的CD44+和Ki67+細胞表達沒有差異（P>0.05），而在在分化程度、T分期之間的表達有差異（P<0.05）。結(jié)論：CD44+和Ki67+作為腫瘤干細胞的標志，可以考慮作為喉癌診斷、判斷分化程度、T分期的參考指標。

【關(guān)鍵詞】CD44﹢細胞；Ki67+細胞； 喉鱗狀細胞癌；免疫組化

【中圖分類號】R738.1 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）04-0210-01

喉癌占全身腫瘤1%-5%，在耳鼻喉惡性腫瘤中占7.9%-35.0%，占耳鼻咽喉各部腫瘤的第三位[1]，僅次于鼻咽癌、鼻腔癌。目前病理機制尚未闡明，從分子水平上尋找與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)的標志物，有助于喉癌的早期診斷，并可幫助評估臨床預(yù)后[2]，許多研究表明，Ki67是目前應(yīng)用最廣泛的增殖細胞標志之一[3]，而CD44是癌干細胞的主要標志[4]，本文利用免疫組織化學(xué)法，標記CD44+和ki-67-的喉癌干細胞，研究其分布特點及臨床病理學(xué)關(guān)系。

1材料和方法

在蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院病理科2008年～2012年手術(shù)的喉癌標本中篩選出鱗狀細胞癌患者69例，其中男62例，女7例，平均年齡58.65歲。另取18例正常喉黏膜組織標本作對照，其中男13例，女5例，平均年齡57.72歲。所有外檢標本24 h內(nèi)取相應(yīng)組織，經(jīng)4%中性甲醛固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋。

2方法

參照張登才等[5]介紹的制作組織芯片的方法，手工制作喉鱗癌組織芯片3個，3μm厚切片，用于免疫組織化學(xué)的蠟片裱于經(jīng)2% 3-氨丙基-乙氧基甲硅烷（APES）丙酮液處理過的載玻片上備用。3塊組織芯片連續(xù)切片各2張（厚4μm）用EliVisionTM super二步法分別標記CD44和Ki-67，操作步驟按說明書進行，DAB顯色，陽性顯色為棕黃色，蘇木精復(fù)染核，中性樹脂膠封固。光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果。

3結(jié)果

3 1 CD44+細胞在正常粘膜組幾乎不表達，在喉鱗癌組織表達豐富，兩者差別經(jīng)獨立樣本t檢驗，有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-15.119，P=0.000）；Ki-67﹢細胞在正常粘膜只在基底細胞層散在表達，喉鱗癌組織表達豐富，兩者差別經(jīng)獨立樣本t檢驗，有統(tǒng)計學(xué)意義（t= -44.98，P= 0.000）。

3.2 CD44﹢和Ki-67﹢細胞在性別、年齡、臨床分型之間的表達沒有差異（Mann-Whitney U 檢驗，P>0.05），而在分化程度、T分期之間的表達有差異（P<0.05），分化程度越低，T分期越高者表達越高。CD44表達與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，而Ki-67的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達高于無轉(zhuǎn)移者。

4討論

喉癌作為腫瘤的一種，其發(fā)生和發(fā)展是一個多因素、多步驟過程。雖然早期癌癥患者療效較好，但是仍有部分患者難于治愈。腫瘤治療的關(guān)鍵在于早期發(fā)現(xiàn)、早期治療。CD44是分布極為廣泛的一組細胞表面跨膜糖蛋白，在細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中，其結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生顯著變化，進而影響腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。作為細胞增殖活性的生物學(xué)標志物，Ki-67蛋白現(xiàn)己被廣泛開展應(yīng)用，但在喉癌預(yù)后及治療方面的研究應(yīng)用，近來才受到關(guān)注。

本研究發(fā)現(xiàn)，癌旁正常組織CD44表達很低，且多局限于基底層細胞和近基底層的棘細胞，而喉癌則累及上皮全層細胞，并向深層浸潤。CD44在喉癌組織中的表達水平比其在癌旁正常組織中的表達高，并且具有顯著性差異（P<0.05），表明CD44可能與喉癌的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。而Ki-67是一種細胞增殖核抗原， 存在于G0期以外的各期細胞，與細胞有絲分裂密切相關(guān)，是反映細胞增殖狀態(tài)的理想標記物， 對判斷腫瘤惡性程度有一定的價值[6，7]。

研究結(jié)果表明，CD44、Ki-67可作為喉癌的臨床評判指標，且應(yīng)用免疫組化技術(shù)在喉癌組織中檢測簡易可行， 二者聯(lián)合可更好的為喉癌患者的臨床病理診斷提供輔助參照，也可為喉癌患者制定化療方案提供依據(jù)。

參考文獻

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