錢(qián)忠直+林瑞超+肖培根

中藥材品種繁多，習(xí)用品、代用品以及多基原、同名異物、同物異名等混亂問(wèn)題一直是影響中藥安全有效的主要問(wèn)題之一，如何鑒定復(fù)雜的中藥材是相關(guān)企業(yè)及監(jiān)管部門(mén)關(guān)注的難題?；b定、性狀鑒定、顯微鑒定和理化鑒定等傳統(tǒng)鑒定方法存在一定局限性，而且此類(lèi)人才已遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿(mǎn)足不了中藥現(xiàn)代化的市場(chǎng)需求。因鑒定方法缺失導(dǎo)致多起安全性事件，給中藥臨床應(yīng)用帶來(lái)極大挑戰(zhàn)，如：2000年的馬兜鈴酸腎病事件，主要由含馬兜鈴酸的關(guān)木通和廣防己誤當(dāng)不含馬兜鈴酸的木通和粉防己使用造成；有毒土三七誤當(dāng)三七使用引起肝損害；亞香棒蟲(chóng)草混入冬蟲(chóng)夏草會(huì)引起頭暈、嘔吐、心悸等；有劇毒的東莨菪根混入蒼術(shù)中制造了“蒼術(shù)造假”事件；含土大黃苷的土大黃誤當(dāng)大黃使用造成制售假藥；山銀花冒充金銀花、西洋參中混入人參、桃仁中摻上苦杏仁，雞冠花籽代替青葙子等混偽品問(wèn)題時(shí)有發(fā)生。目前，中藥安全性已引起全民關(guān)注，成為中藥產(chǎn)業(yè)化和國(guó)際化的主要挑戰(zhàn)之一。

為解決中藥行業(yè)重大科技問(wèn)題，保證中藥臨床應(yīng)用安全、準(zhǔn)確、有效，作為“國(guó)際生命條形碼計(jì)劃”4個(gè)中心節(jié)點(diǎn)（加拿大、美國(guó)、歐盟和中國(guó)）之一的中國(guó)學(xué)者研究團(tuán)隊(duì)，經(jīng)過(guò)不懈的科學(xué)探索已取得可喜的成績(jī)。通過(guò)創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)研究與市場(chǎng)需求相結(jié)合，把鑒定研究、實(shí)驗(yàn)開(kāi)發(fā)、推廣應(yīng)用結(jié)合起來(lái)，推動(dòng)了中藥鑒定學(xué)的發(fā)展，對(duì)規(guī)范中草藥管理、加強(qiáng)藥品質(zhì)量控制、保證用藥安全提供了堅(jiān)強(qiáng)支撐，完成了4 000余種中草藥及其混偽品的DNA條形碼研究，在國(guó)際上首次提出并驗(yàn)證核基因組序列ITS2作為中草藥通用DNA條形碼^[1]，創(chuàng)建了全新“中草藥DNA條形碼生物鑒定體系”，完成了從跟隨國(guó)際研究到引領(lǐng)國(guó)際研究的轉(zhuǎn)變。編著了《中藥DNA條形碼分子鑒定》、《中華人民共和國(guó)藥典中藥材及原植物彩色圖鑒》等書(shū)籍，相關(guān)論文發(fā)表在BRV，PNAS，MER，PLoS，Cladistics，BMC，F(xiàn)EMS[1-7] 等國(guó)際著名刊物。中國(guó)首篇ITS2論文被德國(guó)專(zhuān)業(yè)網(wǎng)站選為近25年來(lái)在ITS2領(lǐng)域最受關(guān)注的16篇文章之一，該篇論文發(fā)表后4年被引用約400次。中國(guó)研究團(tuán)隊(duì)構(gòu)建全世界最大的中草藥DNA條形碼鑒定數(shù)據(jù)庫(kù)，為每一種藥材貼上自己特有的基因標(biāo)簽，獲國(guó)際國(guó)內(nèi)高度關(guān)注和評(píng)價(jià)。起草《中藥材DNA條形碼分子鑒定法指導(dǎo)原則》已獲準(zhǔn)納入《中華人民共和國(guó)藥典》^[8]。中草藥DNA條形碼生物鑒定體系為中藥鑒定學(xué)開(kāi)拓了嶄新的方法學(xué)領(lǐng)域并在行業(yè)內(nèi)廣泛應(yīng)用，國(guó)內(nèi)藥品檢驗(yàn)所、檢疫檢驗(yàn)、企業(yè)、高等院校、海關(guān)和公安等單位廣泛介入，極大推動(dòng)了中藥材鑒定的標(biāo)準(zhǔn)化、現(xiàn)代化和國(guó)際化進(jìn)程。中草藥DNA條形碼生物鑒定體系是對(duì)經(jīng)典藥用植物分類(lèi)學(xué)方法的有力補(bǔ)充和革命性突破，在國(guó)際國(guó)內(nèi)藥用植物領(lǐng)域處于領(lǐng)先水平，對(duì)中藥材及藥用植物的鑒定具有重要理論指導(dǎo)和應(yīng)用價(jià)值，對(duì)解決我國(guó)生藥鑒定的重大科技難題具有重大意義。

本專(zhuān)題針對(duì)中藥鑒定與標(biāo)準(zhǔn)研究核心問(wèn)題，以藥用動(dòng)物、民族藥材、花粉類(lèi)、細(xì)小種子類(lèi)、有毒類(lèi)等具有代表性中藥材為研究對(duì)象，利用DNA條形碼技術(shù)結(jié)合品種考證等開(kāi)展研究。石林春等^[9]建立了中國(guó)動(dòng)物藥材DNA條形碼數(shù)據(jù)庫(kù)，包含800余種動(dòng)物藥材和大量混偽品及密切相關(guān)物種；賈靜等^[10]、張紅印等^[11]、陳俊等^[12]證實(shí)COI條形碼能成功鑒定穿山甲、蜈蚣、紫河車(chē)等動(dòng)物藥材，對(duì)動(dòng)物藥材鑒定、資源可持續(xù)利用和瀕危物種保護(hù)具有重要意義。馬孝熙等^[13]對(duì)蒲黃、松花粉等花粉類(lèi)藥材，宋明等^[14]對(duì)細(xì)小種子類(lèi)藥材車(chē)前子的DNA條形碼鑒定研究，有助于在市場(chǎng)流通中監(jiān)管外觀形態(tài)很難區(qū)分的細(xì)微類(lèi)藥材。王果平等^[15]對(duì)維吾爾藥材沙棗的形態(tài)和DNA條形碼鑒定研究結(jié)果表明，新疆胡頹子屬3種沙棗可能為同一起源，為確定維吾爾藥材沙棗基原植物提供了科學(xué)依據(jù)。張雅琴等^[16]研究證實(shí)psbA-trnH序列可作為蕨類(lèi)藥材的DNA條形碼，能準(zhǔn)確、穩(wěn)定鑒定蕨類(lèi)多基原藥材石韋。

師玉華等^[17]的研究證明ITS2條形碼能夠有效、準(zhǔn)確鑒別涼茶藥材雞蛋花及其混偽品，為涼茶原材料雞蛋花藥材的鑒定提供一種新的分子手段。天南星為有毒類(lèi)中藥，除同屬物種作為混偽品外，半夏屬植物虎掌等也廣泛存在，石林春等^[18]研究證明，ITS2作為DNA條形碼可以準(zhǔn)確鑒定天南星3種基原物種及其混偽品。由于功效及在名稱(chēng)上的相似，蒼、白二術(shù)自古以來(lái)容易混用，余亞?wèn)|等^[19]研究證明ITS2序列在藥材白術(shù)、蒼術(shù)與混偽品的鑒定方面具有很好的效果。馬曉沖等^[20]研究證明ITS2序列可用于區(qū)分名稱(chēng)容易混淆的木香、川木香、土木香、青木香、紅木香藥材。柴胡品種較多，造成藥材質(zhì)量極不穩(wěn)定，特別是有地區(qū)將有毒的大葉柴胡做柴胡用。于俊林等^[21]采用DNA條形碼分子鑒定可以準(zhǔn)確鑒定柴胡與大葉柴胡。另外，ITS2序列對(duì)升麻^[22]、牡丹皮^[23]、合歡皮^[24]等藥材及其混偽品也能進(jìn)行準(zhǔn)確區(qū)分。張衛(wèi)等^[25]對(duì)21種金銀花品種進(jìn)行本草考證，證明僅忍冬Lonicera japonica Thunb符合傳統(tǒng)藥用金銀花的植物學(xué)特征，為正品藥用金銀花。任風(fēng)鳴等^[26]采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)金錢(qián)草ISSR-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，為金錢(qián)草遺傳多樣性分析、優(yōu)良品種鑒定和選育等奠定基礎(chǔ)。

本專(zhuān)題研究進(jìn)一步論證了中草藥DNA條形碼生物鑒定體系的可靠性，從基因?qū)用娼鉀Q了中草藥與其常見(jiàn)混偽品的品種識(shí)別問(wèn)題，研究物種具有代表性，樣品材料豐富，既有原植物也有藥材，樣本量大，分析結(jié)論穩(wěn)定并具有可重復(fù)性，為中藥鑒定與標(biāo)準(zhǔn)研究提供科學(xué)參考。特設(shè)本專(zhuān)題供相關(guān)領(lǐng)域的同行參閱及批評(píng)指正。endprint

[參考文獻(xiàn)]

[1]Chen S L， Yao H， Han J P， et al. Validation of the ITS2 region as a novel DNA barcode for identifying medicinal plant species [J]. PLoS ONE， 2010， 5（1）： e8613.

[2]Li X W， Yang Y， Henry R J， et al. Plant DNA barcoding： from gene to genome[J]. Biol Rev， 2014， doi： 10.1111/brv.12104.

[3]Li D Z， Gao L M， Li H T， et al. Comparative analysis of a large dataset indicates that internal transcribed spacer （its） should be incorporated into the core barcode for seed plants[J]. Proc Natl Acad Sci USA， 2011， 108（49）： 19641.

[4]Liu J X， Shi L C， Han J P， et al. Identification of species in the angiosperm family Apiaceae using DNA barcodes[J]. Mol Ecol Resour， 2014， doi：10.1111/1755-0998.12262.

[5]Pang X H， Song J Y， Zhu Y J， et al. Applying plant DNA barcodes for Rosaceae species identification [J]. Cladistics， 2011， 27（2）： 165.

[6]Gao T， Yao H， Song J Y， et al. Evaluating the feasibility of using candidate DNA barcodes in discriminating species of the large Asteraceae family [J]. BMC Evol Biol， 2010， 10（1）： 324.

[7]Xiang L， Song J Y， Xin T Y， et al. DNA barcoding the commercial Chinese caterpillar fungus [J]. FEMS Microbiol Lett， 2013， 347（2）： 156.

[8]陳士林， 姚輝， 韓建萍， 等. 中藥材 DNA 條形碼分子鑒定指導(dǎo)原則[J]. 中國(guó)中藥雜志， 2013， 38（2）： 141.

[9]石林春，姚輝，謝麗芳，等. 中國(guó)動(dòng)物藥材DNA條形碼數(shù)據(jù)庫(kù)[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2155.

[10]賈靜，張紅印，陳俊，等. 名貴動(dòng)物藥材穿山甲的DNA條形碼分子鑒定研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2212.

[11]張紅印，陳俊，賈靜，等. 中藥材蜈蚣及其混偽品DNA條形碼鑒別研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2208.

[12]陳俊，賈靜，徐曉蘭，等. 基于COI序列的紫河車(chē)藥材及其混偽品的DNA條形碼鑒定研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2204.

[13]馬孝熙，孫偉，任偉超，等. 蒲黃、松花粉等花粉類(lèi)藥材及其混偽品的DNA條形碼鑒定[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2189.

[14]宋明，張雅琴，林韻涵，等.基于ITS2和psbA-trnH序列對(duì)細(xì)小種子類(lèi)藥材車(chē)前子的鑒定比較[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2227.

[15]王果平，樊叢照，朱軍，等. 基于形態(tài)特征和DNA條形碼技術(shù)的維吾爾藥材沙棗基原鑒定[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2216.

[16]張雅琴，石鉞，宋明，等. 蕨類(lèi)藥材石韋及其混偽品的psbA-trnH序列鑒定[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2222.

[17]師玉華，孫偉，方廣宏，等. 涼茶藥材雞蛋花及其混偽品的DNA條形碼鑒定[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2199.

[18]石林春，陳俊，向麗，等. 基于ITS2條形碼的中藥材天南星及其混偽品DNA分子鑒定[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2176.

[19]余亞?wèn)|，石林春，馬曉沖，等. 白術(shù)與蒼術(shù)及其混偽品DNA條形碼鑒定研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2194.

[20]馬曉沖，姚輝，鄔蘭，等.木香、川木香、土木香、青木香和紅木香藥材的ITS2條形碼分子鑒定[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2169.

[21]于俊林，趙莎，任明波，等. 基于ITS2條形碼鑒定柴胡與大葉柴胡[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2160.

[22]任偉超，馬孝熙，于俊林，等. 基于ITS2序列鑒定中藥材升麻及其偽品[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2184.

[23]魏蒙，鄔蘭，凃媛，等. 基于ITS2序列鑒別牡丹皮藥材及其混偽品[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2180.

[24]趙莎，龐曉慧，宋經(jīng)元，等. 應(yīng)用ITS2條形碼鑒定中藥材合歡皮、合歡花及其混偽品[J].中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2164.

[25]張衛(wèi)，黃璐琦，李超霞，等. 金銀花品種的本草考證[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2239.

[26]任風(fēng)鳴，胡開(kāi)治，劉燕琴，等. 傳統(tǒng)中藥金錢(qián)草ISSR-PCR反應(yīng)體系的正交優(yōu)化研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2014，39（12）：2233.endprint