宋文惠, 王 康, 李亞男, 劉春梅

(1陜西省人民醫(yī)院藥劑科， 西安 710068； 2西安新通藥物研究有限公司， 西安 710077)

黃白通氣顆粒由大黃、厚樸等4味中藥制成，臨床中主要用于腹部外科術(shù)后排氣、胃腸功能恢復(fù)。其中，君藥大黃所含蒽醌類成分可促進(jìn)腸蠕動(dòng)而導(dǎo)致瀉下，為本制劑主要活性成分[1]。為了有效地控制本制劑質(zhì)量，本研究采用薄層色譜法對(duì)方中大黃進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜法對(duì)大黃蒽醌類成分中含量較高的大黃素和大黃酚進(jìn)行定量測定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器島津LC-10ATvp高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外檢測器，LC Solution Lite色譜工作站。賽多利斯 CP225D電子天平。

1.2試藥大黃對(duì)照藥材(批號(hào)0902-9805，供鑒別用),大黃酸對(duì)照品(批號(hào)0757-9804，供鑒別用),大黃素對(duì)照品(批號(hào)0756-200110，供含量測定用),大黃酚對(duì)照品(批號(hào)796-200107，供含量測定用),以上均購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純；硅膠G薄層板(煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司)。

1.3樣品黃白通氣顆粒(批號(hào)110501、110502、110503)及缺大黃陰性樣品均由本單位自制。

2 方法與結(jié)果

2.1大黃鑒別[2-3]取本品3批樣品各6 g，分別加乙酸乙酯30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。取缺大黃陰性樣品，同法制成大黃陰性樣品溶液。另取大黃對(duì)照藥材1.0 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃酸對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照不顯斑點(diǎn)，結(jié)果見圖1。

1: 黃白通氣顆粒(批號(hào)110501)； 2: 缺大黃陰性樣品； 3: 大黃酸對(duì)照品； 4: 大黃對(duì)照藥材； 5: 黃白通氣顆粒(批號(hào)110502)； 6: 黃白通氣顆粒(批號(hào)110503)

2.2大黃素和大黃酚含量測定[4-6]

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃素對(duì)照品、大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含大黃素12 μg、大黃酚15 μg的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本制劑細(xì)粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(35∶1)的混合溶液25 mL，密塞，稱定重量，置80℃水浴中加熱回流1 h，放冷，若瓶壁有黏附物，超聲處理去除，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液溶液5 mL，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性溶液的制備 取陰性樣品細(xì)粉，采用“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成陰性樣品溶液。

2.2.4 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水(85∶15)；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30 ℃；理論塔板數(shù)以大黃素計(jì)算不得少于3 000。

2.2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 在“2.2.4”色譜條件下檢測，陰性樣品溶液在大黃素和大黃酚對(duì)照品色譜峰的相應(yīng)位置上，沒有色譜峰出現(xiàn)，表明本制劑中的其他成分及輔料對(duì)大黃素和大黃酚的含量測定不產(chǎn)生干擾，見圖2。

圖2 黃白通氣顆粒高效液相色譜圖

2.2.6 線性實(shí)驗(yàn) 精密稱取大黃素對(duì)照品、大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含大黃素25 μg、大黃酚30 μg的混合溶液；分別進(jìn)樣5、8、10、12、15 μL，依法測定，以進(jìn)樣量對(duì)峰面積A進(jìn)行回歸，得大黃素線性回歸方程為Y=3 494 173X+57 043，r=0.999 9；大黃酚線性回歸方程為Y=4 322 035X+81 498，r=0.999 9。結(jié)果大黃素在0.125～0.374 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；大黃酚在0.150～0.451 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測定，結(jié)果大黃素峰面積RSD為0.42%，大黃酚峰面積RSD為0.47%。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取110501批樣品6份，同“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測定。結(jié)果大黃素的峰面積/稱樣量的值RSD為1.38%，大黃酚的峰面積/稱樣量的值RSD為1.58%，表明重復(fù)性良好。

2.2.9 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取”2.2.8”項(xiàng)下第一份樣品溶液分別于0、2、4、8、10 h依法測定,結(jié)果大黃素峰面積RSD為0.98%，大黃酚峰面積RSD為1.22%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取110501批樣品6份，每份約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入用甲醇-鹽酸(35∶1)配制的混合對(duì)照品溶液5 mL(大黃素濃度為61.2 μg/mL，大黃酚濃度為78.8 μg /mL)，再精密加入甲醇-鹽酸(35∶1)的混合溶液20 mL，同“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果大黃素平均回收率為97.9%,RSD=1.31%;大黃酚平均回收率為48.2%,RSD=1.35%,見表1、2。

表1 大黃素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 大黃酚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.11 樣品含量測定 分別取110501、110502、110503樣品，依照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

展開劑選擇時(shí)，首先考查《中國藥典》(2010年版)一部大黃項(xiàng)下鑒別項(xiàng)中選用的石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液，但考慮到石油醚為混合物，且沸點(diǎn)較低，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性，最終選擇環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.1)為展開劑。實(shí)驗(yàn)中樣品分別與大黃對(duì)照藥材、大黃酸對(duì)照品、陰性樣品進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果陰性沒有干擾，斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，表明本方法可以用于黃白通氣顆粒中大黃的定性鑒別。

流動(dòng)相選擇時(shí)，采用《中國藥典》(2010年版)一部大黃項(xiàng)下含量測定中所用的甲醇-0.1%磷酸水(85∶15)為本品含量測定流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)表明色譜系統(tǒng)分離度好，無干擾，因此確定該流動(dòng)相作為本制劑含量測定的流動(dòng)相。

大黃相關(guān)制劑在含量測定時(shí)，供試品溶液制備多采用甲醇回流提取→鹽酸水解→三氯甲烷提取的方法，考慮到該方法操作步驟多，未知因素較多。本實(shí)驗(yàn)選用操作較為簡便的甲醇-鹽酸回流提取的制備方法[6]，結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性高，可以用于本制劑的含量測定。

由于樣品僅測定3批，需積累數(shù)據(jù)后確定其含量限度，才可用于本制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

[1] 唐大軒, 譚正懷, 梁媛媛，等. 大黃蒽醌致瀉作用及其機(jī)理的初步研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2007, 8(6):1312-1314.

[2] 鄭奕輝, 周澤清, 張?jiān)⒃?，? 胃疏散中大黃薄層鑒別方法的研究[J]. 中國中醫(yī)藥科技, 2005, 12(6):390-391.

[3] 高春華, 張亞秋, 袁子明，等. 降糖丸中紅參、大黃、葛根的薄層定性鑒別[J].錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2004, 25(4):74-75.

[4] 謝巧娥, 彭建梅, 羅燕. HPLC法測定肝脂清膠囊中大黃素、大黃酚的含量[J].中國藥師, 2007, 10(7):725-726.

[5] 金鑫, 曲佳, 李時(shí)放. HPLC法測定麻仁膠囊中大黃素及大黃酚的含量[J]. 天津藥學(xué), 2011, 23(4):17-18.

[6] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1115.