米 麗 ，陳萬生，李敬超，吳廣通(.第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院藥學(xué)部，上海 00003；.武警上海總隊(duì)醫(yī)院藥劑科，上海 003)

菊黃清熱散為近年來武警上?？傟?duì)醫(yī)院自主研發(fā)和調(diào)配的院內(nèi)制劑，參考臨床多年應(yīng)用的驗(yàn)方，采用現(xiàn)代天然藥物化學(xué)工藝濃縮制劑配伍而成，主要由中藥菊花、黃芩、川芎、白芷、桔梗、梔子、連翹、防風(fēng)、蔓荊子、荊芥穗、黃連、甘草、羌活、薄荷、藁本等組成。中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為菊黃清熱散主要用于治療表里齊熱，即中醫(yī)辨證中的“表里俱熱證”。本證為表里同病之證，于內(nèi)熱之上亦感受溫邪，于表熱證外即可見面赤頭痛、惡熱口渴、咽干舌燥、心煩譫語等里熱證，與西醫(yī)的感冒和上呼吸道感染相對應(yīng)?，F(xiàn)代中醫(yī)藥理論認(rèn)為表里齊熱的辨證施治主要為清熱解表、散風(fēng)止痛，可以歸納為抗炎、鎮(zhèn)痛等對癥治療和抗病原微生物、調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫等對因治療。隨著中醫(yī)藥研究現(xiàn)代化進(jìn)程的不斷發(fā)展，經(jīng)現(xiàn)代中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，菊花、黃芩、川芎等菊黃清熱散的主要藥物組分具有清熱、解表、散風(fēng)、止痛等作用[1]，可用于治療惡寒發(fā)熱、頭痛鼻塞、神經(jīng)性頭痛[2]、感冒頭痛、頭暈?zāi)垦！⒈菧Y腦痛、鼻炎及風(fēng)火牙痛等。本研究對菊黃清熱散進(jìn)行臨床前藥效學(xué)研究，考察其功效，同時(shí)為進(jìn)一步的臨床研究提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑 菊黃清熱散：每包10 g，每克浸膏含原生藥材26.8 g(上海武警總醫(yī)院藥劑科配制)，實(shí)驗(yàn)前制成相應(yīng)濃度的CMC-Na混懸液備用。銀翹解毒丸：長春人民藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。布洛芬：橙色混懸液(100 ml:2 g)，上海強(qiáng)生制藥有限公司生產(chǎn)。醋酸潑尼松片：浙江醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。環(huán)磷酰胺：浙江海正藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。內(nèi)毒素試劑：白色粉末，美國Sigma公司生產(chǎn)，Sigma-L2880，10 mg。角叉菜膠：美國Sigma公司提供。伊文思藍(lán)：美國Sigma公司提供。注射用0.9%氯化鈉溶液：上海百特醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)菌株 甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、卡他雙球菌、變形桿菌、白喉?xiàng)U菌、大腸桿菌、白色念珠菌均為臨床分離株。MH培養(yǎng)基，鏈球菌屬另加10%兔血，真菌培養(yǎng)采用沙氏培養(yǎng)基。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 BABL/c及ICR小鼠(SPF級)，日本大耳兔Sprague Dawley(SD)大鼠(清潔級)，均由第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 菊黃清熱散的抗病原微生物作用

2.1.1 體外抗菌作用按照試管二倍稀釋法測定藥物的最低抑菌濃度(MIC)，從1/2逐級稀釋至1/256 共8個(gè)藥物濃度，分別為800.0、400.0、200.0、100.0、50.0、25.0、12.5、6.25 mg/ml。每管內(nèi)加入細(xì)菌的終濃度為105CFU/ml，最低藥物濃度的試管內(nèi)無細(xì)菌生長者確定為MIC。再取MIC終點(diǎn)濃度以上未生長有細(xì)菌的各稀釋管內(nèi)的培養(yǎng)物，分別接種在37℃培養(yǎng)皿中，無細(xì)菌生長的最低藥物濃度為最小殺菌濃度(MBC)，結(jié)果見表1。

表1 菊黃清熱散的體外最小抑菌濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.2 體內(nèi)抗菌作用 BABL/c小鼠50只，雌雄各半，體重18～22 g，隨機(jī)分為5組:模型組、銀翹解毒丸組、菊黃清熱散低、中、高劑量組，每組10只。除模型組外，每組給予相應(yīng)藥物，均2次/d，連續(xù)給藥3 d。于末次給藥后，腹腔感染肺炎鏈球菌菌液，此后均2次/d，連續(xù)給藥3 d。觀察記錄感染后7 d內(nèi)小鼠的存活數(shù)，給藥劑量及結(jié)果見表2。

2.2 菊黃清熱散的解熱作用 健康日本大耳兔測量基礎(chǔ)體溫，連續(xù)3 d，計(jì)算平均值。選取基礎(chǔ)體溫在38～39.6 ℃的家兔入選實(shí)驗(yàn)組，按照體重隨機(jī)分為6個(gè)組：正常組、模型組、布洛芬組、菊黃清熱散低、中、高劑量組，每組10只。每組給予相應(yīng)藥物(0.1 ml/10 g體質(zhì)量)后，立即耳緣靜脈注射內(nèi)毒素(0.01 ml/10 g體質(zhì)量)，給藥后0.5 h測量一次直腸溫度，以后每1 h測量一次，連續(xù)測量6 h。正常組和模型組均給予等量的生理鹽水。給藥劑量及結(jié)果見表3。與正常組相比，模型組家兔在1～4 h體溫顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，菊黃清熱散中、低劑量組在給藥2、3 h時(shí)發(fā)熱家兔體溫顯著降低(P<0.05)，高劑量組2、3、4 h時(shí)顯著降低(P<0.05)，說明菊黃清熱散有一定的解熱作用。

表2 菊黃清熱散在小鼠體內(nèi)抗菌作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=10)

2.3 菊黃清熱散的鎮(zhèn)痛作用

表3 菊黃清熱散對內(nèi)毒素所致家兔發(fā)熱的影響

2.3.1 對熱刺激引起疼痛的鎮(zhèn)痛作用 ICR小鼠，全部為雌性，55℃下熱板法篩選，取基礎(chǔ)痛閾值為5～30 s的小鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)，并依據(jù)基礎(chǔ)痛域值分為5組。除布洛芬組外，其余每組每天給予相應(yīng)藥物(0.2 ml/10 g體質(zhì)量)，正常組給予相同體積的生理鹽水，連續(xù)給藥5 d。實(shí)驗(yàn)第5天測量基礎(chǔ)痛閾值之后，各組動(dòng)物給予相應(yīng)藥物，測量給藥后0.75、1.5、2、3 h的痛閾值，計(jì)算痛閾反應(yīng)提高百分率，給藥劑量及結(jié)果見表4。與模型組相比，菊黃清熱散高、中、低劑量組在給藥后1.5 、2、3 h使小鼠痛閾值顯著升高(P<0.05)。

痛閾反應(yīng)提高百分率=

表4 菊黃清熱散對熱刺激所致疼痛的鎮(zhèn)痛作用

2.3.2 對醋酸刺激引起疼痛的鎮(zhèn)痛作用 ICR小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5組，除布洛芬組外，其余各組每天給予相應(yīng)藥物(0.2 ml/10 g體重)，模型組給予相同體積的生理鹽水，連續(xù)給藥5 d。實(shí)驗(yàn)第5天布洛芬組以0.2 g/kg的劑量給藥一次，各組于末次給藥后60 min腹腔注射0.6%的醋酸(0.1 ml/10 g體重)，觀察各組動(dòng)物在15 min內(nèi)的扭體次數(shù)。給藥劑量及結(jié)果見表5。與模型組相比，菊黃清熱散低、中、高劑量組能顯著降低小鼠扭體次數(shù)(P<0.05)，說明菊黃清熱散有一定鎮(zhèn)痛作用。

表5 菊黃清熱散對醋酸刺激引起疼痛的鎮(zhèn)痛作用

2.4 菊黃清熱散的抗炎作用

2.4.1 對角叉菜膠致足腫脹的影響 選用體質(zhì)量150～200 g SD大鼠，全部為雄性，按體重隨機(jī)分為6組。連續(xù)給藥7 d，于末次給藥后即在每只鼠足趾皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.1 ml，用特制儀器測量藥后0.5、1、2、3、4、5、6 h足趾腫脹程度，計(jì)算腫脹率，給藥劑量及結(jié)果見表6。與模型組相比，菊黃清熱散低、中、高劑量組在給藥后1、2、3、4、5 h使大鼠足趾腫脹率顯著降低(P<0.05)。

2.4.2 對腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 ICR小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，按照體質(zhì)量隨機(jī)分為5組。各組給予相應(yīng)藥物(0.2 ml/10 g體質(zhì)量)，于給藥后1 h，各組尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)(0.1 ml/10 g體質(zhì)量)，隨后立即腹腔注射0.6%的醋酸溶液(0.2 ml/只)，20 min后處死，用6 ml生理鹽水反復(fù)沖洗腹腔，洗滌液離心(3 000 r/min，15 min)，取上清液，測定吸光度A(590 nm)，給藥劑量及結(jié)果見表7。與模型組相比，菊黃清熱散低、中、高劑量組能使小鼠腹腔急性炎癥早期的血管通透性降低(P<0.05)，說明菊黃清熱散有一定的抗炎作用。

表6 菊黃清熱散對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響

表7 菊黃清熱散對腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

1)P< 0.05 ，與模型組比較

2.5 對小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 ICR小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為6組，分別灌胃給藥，空白組給予等體積的蒸餾水，連續(xù)給藥10 d，在第8天，除正常對照組外，其余各組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺(25 mg/kg)，連續(xù)3 d，末次給藥1 h后，尾靜脈注射印度墨汁稀釋液0.05 ml/10 g體重，注射后1、5 min用玻璃毛細(xì)吸管分別從眶后靜脈叢取血20 μl，溶于2 ml 0.1%NaHCO3溶液中搖勻，置分光光度計(jì)在波長650 nm下比色，測定消光度值(OD)。然后將小鼠頸椎脫臼處死，分別稱取肝、脾重量。按公式計(jì)算廓清指數(shù)K及吞噬指數(shù)α，給藥劑量及結(jié)果見表8。與正常組相比，模型組小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能明顯降低，K值和α值顯著降低(P< 0.05)，給藥后，菊黃清熱散高、中劑量組K值明顯升高，α值也有一定增高(P< 0.05)，說明菊黃清熱散對網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)有一定的激活作用。

表8 菊黃清熱散對小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

3 討論

感冒是一種常見病、多發(fā)病，主要是由細(xì)菌或病毒侵入上呼吸道黏膜后引起的局部炎癥反應(yīng)[3]，導(dǎo)致發(fā)熱、鼻塞、咽部疼痛等一系列癥狀[4]。西醫(yī)治療感冒以對癥治療為主，同時(shí)加以抗菌藥物，但是具有解熱鎮(zhèn)痛作用的西藥易引起較嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如胃腸道反應(yīng)和肝毒性等，因而其臨床使用受到限制。

菊黃清熱散為名老中醫(yī)驗(yàn)方，有疏散風(fēng)熱止痛之功。傳統(tǒng)中醫(yī)藥對于感冒相關(guān)病癥整體辨證，在調(diào)節(jié)人體免疫力的基礎(chǔ)上發(fā)揮抗病毒作用。中醫(yī)理論中將感冒分為風(fēng)熱、風(fēng)寒、暑濕、秋燥、時(shí)行、體虛等多種辨證類型[5]，其中以“風(fēng)熱”和“風(fēng)寒”最為常見。菊黃清熱散組分中含有菊花、黃芩、川芎等藥物成分，主疏解風(fēng)熱、解表散風(fēng)，也可提氣安神。其適應(yīng)證主要為表里俱熱、提氣安神等功效，亦可兼顧其他類型。依據(jù)菊花清熱散的成分及臨床前實(shí)驗(yàn)觀察可見，其主要對風(fēng)熱型感冒起到標(biāo)本兼治的作用，對于其他類型感冒患者也可增強(qiáng)機(jī)體免疫，提高御病能力。

本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的選擇參考菊花清熱散的適應(yīng)證建立，常見的風(fēng)熱感冒癥狀包括鼻塞、流涕、咳嗽、頭痛等一般感冒卡他癥狀，以及以咽痛、黃痰、發(fā)熱為主的風(fēng)熱型感冒癥狀。其病癥主要表現(xiàn)為機(jī)體整體或局部的炎性反應(yīng)，或者以感冒早期即可出現(xiàn)的咽痛、喉干、肢體酸痛等前列腺素相關(guān)疼痛和炎癥，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)一般認(rèn)為黃痰是由咽部黏膜損傷導(dǎo)致的繼發(fā)性細(xì)菌感染。根據(jù)現(xiàn)代中藥藥理學(xué)模型建立的標(biāo)準(zhǔn)：達(dá)到中藥可發(fā)揮治療效果的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病病理階段評價(jià)指標(biāo)的同時(shí)符合主治癥狀與辨證相符[6]，筆者依照風(fēng)熱感冒常見和特有

的病癥，對應(yīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)具有評價(jià)指標(biāo)的主治癥狀，從解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌4個(gè)方面進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與評價(jià)，同時(shí)考慮到制劑組分中可能存在的免疫調(diào)節(jié)作用使用碳粒廓清法評價(jià)了網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)相關(guān)的免疫學(xué)指標(biāo)。

據(jù)報(bào)道，黃芩苷具有抗炎和解熱的作用，而野黃芩苷和甘草的抗炎作用機(jī)制與黃芩苷相同[7]，也是通過抑制前列腺素的合成而減輕炎癥反應(yīng)[8,9]。單核-巨噬細(xì)胞是機(jī)體抗感染免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞。在機(jī)體受到感染后，單核-巨噬細(xì)胞可識別并吞噬病原體，殺傷、清除病毒和細(xì)菌等；也可通過分泌細(xì)胞因子、趨化因子等介導(dǎo)和促進(jìn)炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答。此外，單核-巨噬細(xì)胞還能清除機(jī)體中損傷、衰老的細(xì)胞，在免疫監(jiān)視中起重要作用[10]。

有研究表明，防風(fēng)、人參、黨參等均對單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)有促進(jìn)作用，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能[11]。

這與本實(shí)驗(yàn)中菊黃清熱散提高廓清指數(shù)(K)及吞噬指數(shù)(α)，對網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)有一定的激活作用一致。

綜上所述，本研究提示菊黃清熱散具有抗菌、解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、調(diào)節(jié)免疫的作用，為菊黃清熱散臨床治療神經(jīng)性頭痛、感冒頭痛、頭暈?zāi)垦?、鼻淵腦痛、鼻炎及風(fēng)火牙痛等癥狀提供科學(xué)依據(jù)。

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