★ 張順貞 石安華 卞瑤 陳文慧

(云南中醫(yī)學(xué)院 云南 昆明 650200)

臨床上根據(jù)是否飲酒將脂肪肝分為酒精性脂肪肝(AFLD)和非酒精性脂肪肝(NAFLD)。根據(jù)肝組織病理學(xué)改變，脂肪性肝病可分為單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纖維化和脂肪性肝硬化4個(gè)病理過(guò)程。早期脂肪肝(單純性脂肪肝)常無(wú)明顯的臨床癥狀及體征，病理改變可見(jiàn)肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，該階段無(wú)明顯的臨床癥狀及體征，肝功能正常。大多數(shù)患者在體檢及相關(guān)疾病檢查時(shí)才被發(fā)現(xiàn)，造成了早期脂肪肝(單純性脂肪肝)無(wú)癥可辨、施治困難的局面。我們從血液流變學(xué)角度對(duì)早期脂肪肝進(jìn)行研究，對(duì)該病的防治具有一定的臨床價(jià)值?；谝陨夏康模緦?shí)驗(yàn)主要針對(duì)早期脂肪肝大鼠血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的變化進(jìn)行研究。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠16只，體重(100±10)g，清潔級(jí)。購(gòu)自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，許可證號(hào)：SCXK(川)2010-16。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境：云南中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房，室內(nèi)清潔，自然采光，通風(fēng)良好。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 去脂軟肝方，0.9%生理鹽水，均購(gòu)自云南中醫(yī)學(xué)院門診部藥房。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和試劑 LBY-NJ血小板聚集儀及普利生LBY-N6C全自動(dòng)血流變儀(北京普利生儀器有限公司)；總膽固醇測(cè)定試劑盒，批號(hào)：0111011；甘油三酯測(cè)定試劑盒，批號(hào)：0111011。以上試劑盒均購(gòu)自四川邁克生物科技股份有限公司。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及造模 大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=8)、模型組(n=8)，模型組喂高脂飼料8周，即普通飼料基礎(chǔ)上加10%豬油、2%膽固醇[1]，自由飲水；正常對(duì)照組給予普通飲食8周。正常組和模型組以生理鹽水灌胃(1mL/200g，每日)。

2.2 指標(biāo)檢測(cè) 造模至第8周末當(dāng)晚大鼠禁食不禁水12h，腹腔注射麻醉，打開(kāi)腹腔，采用真空采血管腹主動(dòng)脈取血，用普利生LBY-N6C全自動(dòng)血流變儀檢測(cè)全血黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)、纖維蛋白原、紅細(xì)胞壓積和血小板聚集率；血樣4℃靜置2h后，3 000rmp離心10min，分離血清膽固醇氧化酶-過(guò)氧化物酶法(COD-CE-PAP法)檢測(cè)血清總膽固醇(TC)含量；甘油磷酸氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)血清甘油三酯(TG)。測(cè)定前先將樣本和試劑于室溫下解凍，測(cè)肝脂的組織待解凍后稱取0.5g肝組織，放入玻璃勻漿管中，加入9倍體積的生理鹽水,1 500rPmin電動(dòng)勻漿5min，制備10%的組織勻漿；3 000rPmin×15min，小心去除上層白色油脂后取上清液，然后按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定甘油三酯及總膽固醇含量。

2.3 肝組織病理切片 肝組織固定經(jīng)石蠟包埋，切為4μm厚度切片，多級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，做HE染色。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；各組間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析兩兩比較，符合正態(tài)性分布，方差齊用LSD檢驗(yàn)，方差不齊用近似t檢驗(yàn)；檢驗(yàn)水準(zhǔn)：顯著水平α=0.05，P<0.05被認(rèn)為所檢驗(yàn)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 兩組大鼠血清和肝組織TC、TG及肝指數(shù)變化 8周末，與正常組相比較，模型組血清TC、TG，模型組肝臟TC、TG明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組大鼠血清和肝組織

注：與正常組相比較，P<0.05。

3.2 肝組織病理切片 8周末正常組大鼠肝組織HE染色顯示，肝組織結(jié)構(gòu)清晰、完整，肝小葉形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈大而壁薄，肝細(xì)胞索由中央靜脈向四周呈放射狀分布，胞核呈圓形，多數(shù)肝細(xì)胞見(jiàn)一個(gè)細(xì)胞核，部分細(xì)胞可見(jiàn)雙核；匯管區(qū)無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維組織增生，見(jiàn)圖1；8周末模型組大鼠肝細(xì)胞胞漿中有1/3以上肝細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)大小不等的脂滴空泡，細(xì)胞核被擠向一邊，見(jiàn)圖2。

圖1 正常組：HE染色，10×40，肝細(xì)胞大小均勻，胞圓形，呈條索狀排列，見(jiàn)中央靜脈。

圖2 模型組：HE染色，10×40，1/3以上肝細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)大小不等的脂滴空泡，細(xì)胞核被擠向一邊。

3.3 兩組大鼠模型血液流變學(xué)指標(biāo)變化 8周末，模型組全血粘度雖在1S-1、60S-1、200S-1切變率下均較正常組高，但在1S-1、60S-1切變率下差異才有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、纖維蛋白原、紅細(xì)胞壓積、血小板聚集率、血沉均較正常組高，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2、表3。

表2 兩組大鼠ηb(切變率：S-1)變化比較

注：與正常組相比較，P<0.05。1P<0.05，△P>0.05。

表3 兩組大鼠ηp、AI、FIB、HCT、PLT、ESR變化比較

注：與正常組相比較，P<0.05。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)參照鐘嵐、范建高成功經(jīng)驗(yàn)[1]復(fù)制大鼠脂肪肝模型。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道改良配方高脂飼料(普通飼料基礎(chǔ)上加10%豬油、2%膽固醇)喂養(yǎng)大鼠8周，成功建立了高脂血癥性早期脂肪肝動(dòng)物模型：模型組大鼠體重超重，并伴有高膽固醇、高甘油三酯血癥，肝組織學(xué)示脂肪肝病理改變。除脂質(zhì)代謝異常外，脂肪肝患者還表現(xiàn)為高黏滯血癥，存在血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的改變。本實(shí)驗(yàn)中，與正常組比較，8周末模型組大鼠血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均有明顯升高，證實(shí)在早期脂肪肝就存在血液流變性障礙，即表現(xiàn)為高黏滯血癥。

脂肪性肝病患者出現(xiàn)血脂代謝紊亂，導(dǎo)致局部微循環(huán)障礙，對(duì)血液的流動(dòng)性、凝固性產(chǎn)生影響，出現(xiàn)血液的黏、稠、凝情況，即出現(xiàn)“血瘀”狀態(tài)[2]，“瘀血”也就成了脂肪肝的病理產(chǎn)物。也可以認(rèn)為是脂肪肝患者血黏度增高使血流速度減慢，導(dǎo)致紅細(xì)胞發(fā)生聚集，繼而動(dòng)脈血流停滯，從而發(fā)生血瘀證。這解釋了脂肪肝患者出現(xiàn)血瘀證的原因，表明了脂肪肝和血瘀證的密切關(guān)系。

血瘀證是臨床多種疾病的一個(gè)共同癥候表現(xiàn)，由于某些病理因素引起TX-A2和PGI2平衡失調(diào)所出現(xiàn)的血小板聚集、血管痙攣收縮、血栓形成或微循環(huán)障礙等，常被認(rèn)為是臨床血瘀證發(fā)生發(fā)展的重要原因[3]。血液流變學(xué)的異常最主要的表現(xiàn)是高黏滯狀態(tài)，血液呈黏、稠、濃、聚、凝等病理變化，血黏度增高造成微循環(huán)的障礙，血瘀證也有黏、稠、凝等微循環(huán)障礙的表現(xiàn)，血液流變學(xué)和血瘀證間有共通之處，說(shuō)明脂肪肝大鼠存在血瘀證，表明了血瘀證和血液流變學(xué)之間關(guān)系密切。

脂肪肝患者不僅表現(xiàn)為高脂血癥，且表現(xiàn)為高黏滯血癥[4]：高血黏度是反映血液流變學(xué)異常的主要指標(biāo)，血脂水平升高可能引起血液黏度和血漿黏度升高，直接導(dǎo)致血液流變學(xué)異?；蚋唣ぱY；血液流變學(xué)異常，主要表現(xiàn)為血液黏度的異常，對(duì)血循環(huán)尤其是微循環(huán)產(chǎn)生顯著影響，繼而影響肝臟脂質(zhì)的代謝，說(shuō)明脂肪肝與血液流變之間存在密切關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)中，在成功復(fù)制脂肪肝大鼠模型后，大鼠不僅有高血脂表現(xiàn)，還有血黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)等血流變指標(biāo)明顯升高，證實(shí)復(fù)制的早期脂肪肝大鼠模型確實(shí)存在微循環(huán)障礙，有血液流變學(xué)的改變。今后的治療中我們可以把血液流變學(xué)的異常程度作為早期脂肪肝患者“瘀血”程度的判斷指標(biāo)，血液流變學(xué)指標(biāo)可作為一種觀察早期脂肪肝臨床療效的定量指標(biāo)。

綜上所述，本研究初步明確了早期脂肪肝、血瘀證、血液流變學(xué)三者的關(guān)系，血液流變學(xué)的異常程度可以作為早期脂肪肝患者“瘀血”程度的判斷指標(biāo)。

[1]鐘嵐,范建高.非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型[J].國(guó)外醫(yī)學(xué).消化系疾病分冊(cè),1999,19(4):175-178.

[2]王若光，尤昭玲.試析血瘀形成及現(xiàn)代研究對(duì)血瘀認(rèn)識(shí)的深化[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2001，8(4)：272-274.

[3]鄢毅，李國(guó)賢，袁景珊.血瘀證機(jī)理研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16(4)：213-215.

[4]王凱，王東盛.肝病患者血液流變學(xué)的研究[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2003，17(3)：280.