封麗琴 趙彩彥

·論著·

趨化因子CXCL16在肝衰竭患者血清中的表達(dá)及意義

封麗琴 趙彩彥

目的探討趨化因子CXCL16在肝衰竭患者血清中的表達(dá)及臨床意義。方法采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)肝衰竭患者(n=19)及健康對(duì)照組(n=16)血清CXCL16的濃度。結(jié)果肝衰竭組和健康對(duì)照組血清CXCL16濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.446，P<0.01)。結(jié)論趨化因子CXCLl6可能參與了肝衰竭(LF)患者肝臟炎癥損傷，可能是導(dǎo)致肝衰竭發(fā)病的發(fā)病機(jī)制之一。

趨化因子；CXCLl6；肝衰竭(LF)；酶聯(lián)免疫吸附法

隨著社會(huì)的發(fā)展，感染性疾病及腫瘤是威脅世界人類生命健康最常見的兩種疾病，而乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是常見感染性疾病之一，該疾病?？蓪?dǎo)致急性病毒性肝炎、慢性病毒性肝炎、肝硬化、肝衰竭及肝癌甚至死亡。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)乙型肝炎病毒感染是世界上造成人類死亡的第9大原因，嚴(yán)重的危害人們的生命。而我國(guó)更是乙型肝炎病毒感染的高發(fā)地區(qū)之一，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)我國(guó)成年人乙肝病毒感染率約60%，大約25%呈現(xiàn)急性病毒性肝炎，其中大多數(shù)感染者能清除乙肝病毒，有大約10%乙肝病毒感染者可發(fā)展成慢性肝炎，并可反復(fù)發(fā)作，可發(fā)展成肝硬化甚至癌變[1]。有少數(shù)病毒感染者可發(fā)展成重型肝炎即肝衰竭，病死率極高。近些年來(lái)，醫(yī)學(xué)科學(xué)有了很大的進(jìn)步，并在兒童期進(jìn)行了乙型病毒的計(jì)劃免疫，但仍有許多急性肝炎感染患者轉(zhuǎn)為慢性乙型肝炎、慢性遷延性肝炎甚至肝衰竭導(dǎo)致死亡。國(guó)內(nèi)外有許多研究機(jī)構(gòu)對(duì)其有深入研究，但其發(fā)病機(jī)制仍尚未完全明了。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)趨化因子在肝衰竭中發(fā)揮了重要作用。其中趨化因子CXCL16在患者血清中的表達(dá)變化規(guī)律與肝衰竭的關(guān)系國(guó)內(nèi)研究尚少報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)收集肝衰竭患者血清檢測(cè)患者CXCL16的變化，研究CXCL16參與肝衰竭發(fā)病的可能機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年1月至2014年1月石家莊市第五醫(yī)院肝病科住院的19例肝衰竭患者。其中，男16例，女3例；年齡31～70歲?；颊呔幸倚透窝撞∈?，有Ⅱ度以上肝性腦病，乏力、皮膚鞏膜黃染，膽紅素明顯升高。16例正常健康者(對(duì)照組)，來(lái)自門診部體檢中心的健康體檢者。其中男12例，女4例；年齡36～65歲。2組間一般資料有可比性。

1.2 入選與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 入選標(biāo)準(zhǔn)：①肝衰竭患者符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)肝衰竭與人工肝學(xué)組中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)重型肝病共同制定的《肝學(xué)組肝衰竭診治指南(2012年版)》。②年齡31～71歲。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：通過(guò)病史采集、腹部B超或腹部CT排除酒精肝、脂肪肝及自身免疫性肝炎等。排除甲、丙、丁、戊、庚型病毒及酒精肝、脂肪肝、自身免疫性肝炎、先天性代謝疾病等引起的肝炎；并排除患有艾滋病、結(jié)核等其他感染性疾病;并排除類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫性疾病。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者外周血留取均征得患者同意，并簽署書面知情同意書。

1.3 主要儀器、試劑及實(shí)驗(yàn)過(guò)程 美國(guó)全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀檢測(cè)趨化因子CXCL16，趨化因子CXCLl6 ELISA檢測(cè)試劑盒。盒購(gòu)自武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司，生產(chǎn)商為美國(guó)Cloud-Clone 公司，操作過(guò)程按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。(1)在波長(zhǎng)為450 nm的全自動(dòng)酶標(biāo)儀上讀出每孔標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)血清的OD值，因標(biāo)準(zhǔn)品是雙孔，計(jì)算每種標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值。(2)采用深圳晶美生物技術(shù)有限公司提供的Curve Exper 1．3軟件，以標(biāo)準(zhǔn)品平均OD值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)品曲線，然后根據(jù)各樣品孔的OD值計(jì)算相應(yīng)的濃度范圍。(3) 按照下列公式計(jì)算出CXCL16的濃度：Quadratic Fit:y=a+bx+cx^2，Coefficient Data:a=-0.023 b=2.636 c=0.127。

2 結(jié)果

2.1 肝衰竭組和對(duì)照組的血清CXCL16濃度分別為(3.71±2.23)ng/ml，(1.21±0.59)ng/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.446，P<0.01)。

2.2 趨化因子CXCL16的標(biāo)準(zhǔn)曲線 見圖1。

圖1 1趨化因子CXCLl6的標(biāo)準(zhǔn)曲線

3 討論

我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)地區(qū)，隨著乙型肝炎疫苗的廣泛使用及生活水平的提高，乙型病毒性肝炎的發(fā)病報(bào)告率持續(xù)下降，在一般人群乙肝表面抗原陽(yáng)性流行率已有9.75%下降為7.18%。但在法定傳染病報(bào)告中，病毒性肝炎的發(fā)病率與病死率仍均占首位。2010年全國(guó)報(bào)告乙肝發(fā)病人數(shù)為106萬(wàn)。據(jù)全國(guó)統(tǒng)計(jì)調(diào)查，我國(guó)一般人群中估計(jì)約9 300萬(wàn)國(guó)人為慢性乙肝病毒感染，占世界該病感染者的1/3左右。其中目前我國(guó)現(xiàn)有慢性病毒性肝炎患者約2 700萬(wàn)人，仍然嚴(yán)重的危害人們的健康。

在臨床上乙型肝炎病毒感染包括隱形感染到急性病毒性肝炎，有時(shí)甚至發(fā)生急性重癥肝炎即肝衰竭。乙型病毒性肝炎的發(fā)病機(jī)制非常的復(fù)雜，到目前為止其發(fā)病機(jī)制仍未完全明了，有待繼續(xù)研究。目前大多認(rèn)為免疫病理?yè)p傷機(jī)制在其中起著重要作用，肝細(xì)胞病變主要取決于患者機(jī)體的免疫應(yīng)答，尤其是細(xì)胞免疫應(yīng)答。各種原因?qū)е碌囊倚透窝撞《緩?fù)制增加均可啟動(dòng)患者機(jī)體對(duì)病毒的免疫應(yīng)答反應(yīng)?；颊邫C(jī)體的免疫應(yīng)答不同，可導(dǎo)致臨床表現(xiàn)各異。當(dāng)人的機(jī)體處于免疫耐受時(shí)，不發(fā)生免疫應(yīng)答，成為無(wú)癥狀的攜帶者，而當(dāng)人的機(jī)體免疫功能正常時(shí)，則多可能表現(xiàn)為急性病毒性肝炎的發(fā)生，當(dāng)機(jī)體免疫功能低下、不完全免疫耐受、自身免疫反應(yīng)產(chǎn)生、乙型肝炎病毒基因突變逃逸免疫清除等情況下，均可導(dǎo)致慢性肝炎的發(fā)生；當(dāng)患者機(jī)體處于超敏反應(yīng)，大量的抗原-抗體復(fù)合物產(chǎn)生并激活補(bǔ)體系統(tǒng)并在腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白細(xì)胞介素-1,6(inter-leukin-1,6)、內(nèi)毒素等參與下，可導(dǎo)致大片肝細(xì)胞壞死，發(fā)生重型肝炎即肝衰竭的出現(xiàn)。

有學(xué)者研究認(rèn)為，炎性細(xì)胞表面趨化因子(CK)與炎性細(xì)胞表面相應(yīng)趨化因子受體相互作用在其中共同發(fā)揮了關(guān)鍵作用[2,3]。趨化因子也稱趨化激素、趨化素或化學(xué)激素，是一類可刺激白細(xì)胞趨化性的小分子的細(xì)胞因子，由白細(xì)胞分泌，對(duì)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞等等具有很強(qiáng)大的趨化作用和激活作用。在機(jī)體的抗感染中發(fā)揮重要作用。該因子能吸引免疫細(xì)胞到免疫應(yīng)答部位，共同參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)和免疫病理反應(yīng)。它們共同機(jī)構(gòu)特征包括分子量小，多為小于100個(gè)氨基酸的小分子糖蛋白，有4個(gè)位置保守的半胱氨酸殘基以保證其三級(jí)結(jié)構(gòu)，根據(jù)其氨基末端2個(gè)半胱氨酸殘基是直接相連還是被氨基酸分開，分為4群，分別為CXC亞族(α亞族)、CC亞族(β亞族)、C亞族(γ亞族)和CX3C亞族(δ亞族)4個(gè)亞家族 。趨化因子CXCL16屬于CXC趨化因子家族，是由國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)的一個(gè)趨化因子[4，5]。他們根據(jù)該類趨化因子氨基端含CXC模序的特點(diǎn)，將其劃歸為CXC亞家族，命名它為CXCL16。趨化因子CXCL16與乙型病毒性肝炎的關(guān)系的基礎(chǔ)研究與臨床研究近幾年國(guó)內(nèi)外研究較多。Dong等[6]早在2002年分析鼠暴發(fā)性肝炎模型肝組織中細(xì)胞因子、趨化因子變化時(shí)就發(fā)現(xiàn)趨化因子CXCL16的表達(dá)異常。學(xué)者Xu等[7]在2005年在細(xì)菌內(nèi)毒素引起大鼠暴發(fā)性肝炎模型的發(fā)病過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)CXCL16在將T淋巴細(xì)胞遷移到肝臟過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。同時(shí)發(fā)現(xiàn)在對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠模型應(yīng)用抗-CXCL16單克隆抗體后可明顯降低實(shí)驗(yàn)大鼠模型轉(zhuǎn)氨酶、并下調(diào)血清腫瘤壞死因子-α、細(xì)胞凋亡因子FasL的表達(dá)，應(yīng)用單克隆抗體有效的減輕肝壞死，明顯降低了發(fā)生暴發(fā)性肝炎大鼠動(dòng)物模型的死亡率。國(guó)內(nèi)學(xué)者徐煥賓等[8]研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子CXCL16在肝損傷組織與肝臟病理?yè)p傷程度有關(guān)。在小鼠免疫性肝損傷動(dòng)物模型中，將趨化因子CXCL16抗體用于體內(nèi)阻斷CXCL16生物活性，肝臟的損傷得到了很明顯的改善，且降低了丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的水平，明顯延長(zhǎng)了小鼠的存活率，提示CXCL16在小鼠免疫性肝損傷中起到了重要作用。該研究者在應(yīng)用特異抗CXCL16抗體阻斷可以明顯降低相應(yīng)的腫瘤壞死-α和凋亡因子Fas-FasL的表達(dá)，從而改善肝組織的病理?yè)p傷的發(fā)生[9]。國(guó)內(nèi)楊勇等[10]2008年研究發(fā)現(xiàn)，急性乙型肝炎病例組及慢性乙型肝炎病例組血清CXCL16濃度水平均高于正常健康對(duì)照組，血清CXCL16濃度與乙型肝炎的病情相關(guān)，隨著乙型肝炎病情加重而加重。

我們的試驗(yàn)研究通過(guò)采用酶聯(lián)免疫法(ELISA法)檢測(cè)了肝衰竭病例組及正常健康對(duì)照組外周血清CXCL16濃度發(fā)現(xiàn)，肝衰竭組和對(duì)照組的血清CXCL16濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.446，P<0.01)，提示趨化因子CXCL16或許參與了將免疫細(xì)胞募集到發(fā)生炎癥的肝臟，這與國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)趨化因子CXCL16的研究結(jié)果符合。在肝衰竭即重癥肝炎患者發(fā)病過(guò)程中，CXCL16同樣也可能發(fā)揮了重要作用。

綜上所述，在肝衰竭發(fā)病過(guò)程中，趨化因子CXCL16可能參與了肝衰竭的炎癥損傷過(guò)程，可能是肝衰竭發(fā)病機(jī)制之一，但其詳細(xì)發(fā)病機(jī)制有待進(jìn)一步研究探索。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2014.12.010

050021 河北省石家莊市第五醫(yī)院ICU(封麗琴)；河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院感染科(趙彩彥)

趙彩彥，050051 河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院感染科；

E-mail:zhaocy2005@163.com

R 575.3

A

1002-7386(2014)12-1788-03

2014-01-03)