李愛連 胡志芳 牛春燕 高保華 吳方雄 史宏恩

(西安醫(yī)學(xué)院病原生物與免疫學(xué)教研室,陜西 西安 710021)

胃癌是很多國家的第一大癌，給相應(yīng)國家和地區(qū)的人民造成了沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)和嚴(yán)重的社會問題〔1，2〕。目前已有研究表明營養(yǎng)缺乏、幽門螺桿菌(HP)感染以及高風(fēng)險遺傳因素都與胃癌的發(fā)生有著密切的關(guān)系〔2〕。炎癥反應(yīng)已被證明在胃癌的發(fā)生，尤其是癌前病變過程中起重要作用，白細(xì)胞介素(IL)-18是一種重要的炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子，屬IL-1家族。IL-18的主要功能是協(xié)同誘導(dǎo)輔助T淋巴細(xì)胞(Th1)產(chǎn)生大量其他的細(xì)胞因子，刺激T細(xì)胞增殖，促進(jìn)炎癥反應(yīng)〔3〕。目前已有研究〔4～7〕表明IL-18與1型糖尿病、類風(fēng)濕、關(guān)節(jié)炎、慢性乙型肝炎、多發(fā)性硬化癥、哮喘、過敏性鼻炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種疾病相關(guān)。雖有報道〔8,9〕提示IL-18在胃癌組織中有異常表達(dá)的現(xiàn)象，然而卻沒有研究IL-18與胃癌風(fēng)險的關(guān)聯(lián)。本研究旨在通過基因分型的方式，探討陜西省西安市人群中IL-18基因105位點(diǎn)多態(tài)性與胃癌易感性的相關(guān)性，為胃癌遺傳學(xué)高危人群的區(qū)分提供新的證據(jù)。

1 資料與方法

1.1病例資料 選取我院胃癌患者204例，全部病例均按國際疾病分類第10版(ICD10)的標(biāo)準(zhǔn)診斷，經(jīng)病理學(xué)確診為胃癌，即為病例組；其中男117例,女87例；年齡35～96歲，平均(57.3±21.4)歲。另取本地區(qū)2012年底胃癌早期篩檢中的同年齡段未患胃癌的正常中老年人群100例為對照組，其中男59例，女41例；年齡36～89歲，平均(56.8±19.5)歲。病例組中含有彌散型胃癌108例、腸型胃癌72例和其他類型胃癌24例，分別占病例胃癌總數(shù)的52.9%，35.3%與11.8%。 兩組人群年齡、性別構(gòu)成上沒有顯著差異(P>0.05)，見表1。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1基因組DNA的提取 采集靜脈血3 ml，加入EDTA鈉鹽抗凝；采用改良碘化鈉法〔10〕提取白細(xì)胞基因組DNA，現(xiàn)提現(xiàn)用，其余-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2引物設(shè)計 參照陳水連等〔4〕的方法，上游引物序列為：5′-TGTTTATTGTAGAAAACCTGGA-3′；下游引物序列為：5′-CCTCTACAGTCAGAATCAGT-3′，引物均由北京金維智生物制品責(zé)任公司合成。

1.2.3PCR反應(yīng) PCR反應(yīng)體系為20 μl，其中模板DNA 1 μl，兩種引物濃度均為1 pmol，使用2×Master Mix 10 μl(北京天根生物技術(shù)有限責(zé)任公司)，dd H2O補(bǔ)齊至20 μl。PCR反應(yīng)條件為：94℃ 2 min預(yù)變性； 三步法94℃ 50 s，58℃ 50 s，72℃ 50 s，擴(kuò)增25個循環(huán)； 最后延伸72℃ 5 min。電泳后分析PCR條帶。

1.2.4RFLP分型 將PCR產(chǎn)物用TaqI限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，置于65℃中水浴過夜，次日使用3%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，通過凝膠成像系統(tǒng)判斷結(jié)果，基因型AA的樣本中僅有148 bp一條條帶，基因型AC的樣本則有148、123、25 bp三條條帶，基因型CC的樣本則有123、25 bp兩條條帶。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS12.0軟件；IL-18三種基因型的頻率采用基因直接計數(shù)法進(jìn)行計算，各基因型多態(tài)性分布、組間基因型及等位基因頻率的比較采用χ2檢驗(yàn)，并以比值比(OR值)及其95%可信區(qū)間(CI)表示相對風(fēng)險度。

表1 病例組與對照組的一般人口學(xué)特征(n)

2 結(jié) 果

2.1IL-18基因105位點(diǎn)多態(tài)性頻率及遺傳平衡檢驗(yàn) 病例組IL-18基因105位點(diǎn)(rs549908)的各基因型頻率分別為：AA型62.5%，AC型26.9%，CC型10.6%， A/C等位基因的頻率分別為75.9%和24.1%。對照組IL-18基因105位點(diǎn)(rs549908)的各基因型頻率分別為：AA型87.0%，AC型11.0%，CC型2.0%， A/C等位基因的頻率分別為92.5%和7.5%，符合 Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.912，P=0.340)。

2.2IL-18基因105位點(diǎn)多態(tài)性與胃癌風(fēng)險的關(guān)系 胃癌病例組CC基因型比率及C等位基因頻率均顯著高于對照組，由此可知攜帶有至少一個C等位基因的基因型個體患胃癌風(fēng)險為基因型為AA者的2.562倍(95%CI：1.476～4.448，χ2=10.862，P=0.001)。見表2。

表2 病例組與對照組IL-18基因型頻率分布(n)

3 討 論

近年來，隨著胃癌發(fā)病機(jī)制的揭示和公共衛(wèi)生狀況的總體改善，全球范圍內(nèi)胃癌的發(fā)病率和死亡率正在不斷下降，其中對胃癌高危人群的識別及早期干預(yù)起到了至關(guān)重要的作用〔11〕。炎癥相關(guān)基因的單核苷酸基因多態(tài)性(SNP)是目前識別胃癌高危人群的研究熱點(diǎn)，已有廣泛的研究表明腫瘤壞死因子(TNF)-α、IL-1b、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β、IL-10等多種細(xì)胞因子的特定SNP與胃癌風(fēng)險相關(guān)〔12〕。

IL-18基因也是一種重要的炎癥相關(guān)細(xì)胞因子，人類的IL-18基因位于11號染色體的長臂上(11q22.2～q22.3),由6個外顯子和5個內(nèi)含子組成，而105位點(diǎn)(rs549908)則處于其啟動子區(qū)，有研究〔6〕表明105位點(diǎn)SNP能夠通過影響IL-18基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)而影響IL-18在血清與組織中的量，也有研究〔8,9〕指出IL-18在胃癌組織中異常表達(dá)，由于IL-18主要作用是刺激T細(xì)胞免疫作用和其他細(xì)胞因子的分泌，其表達(dá)紊亂極有可能誘發(fā)持續(xù)炎癥反應(yīng)，從而最終影響胃癌的發(fā)病風(fēng)險〔8〕。

本研究顯示攜帶C等位基因的人群患胃癌風(fēng)險顯著高于基因型為AA的人群，通過對該SNP的基因分型以及聯(lián)合其他SNP位點(diǎn)的連鎖不平衡分析及haplotype分型，可以為識別部分遺傳上對胃癌具有易感性的高危人群及早干預(yù)，為胃癌的防治提供一定的理論依據(jù)。

本研究首次報道了IL-18基因105位點(diǎn)SNP(rs549908)與胃癌風(fēng)險的關(guān)聯(lián)，然而依然具有一定的局限性。所有樣本均為漢族人群，無法體現(xiàn)其他人種中IL-18基因105位點(diǎn)SNP與胃癌的關(guān)聯(lián)；而且研究局限在單個基因位點(diǎn)(IL-18基因105位點(diǎn))上，并沒有從基因多態(tài)性、環(huán)境因素和蛋白水平綜合進(jìn)行研究，也沒有從基因-表型、基因-環(huán)境、基因-基因的角度揭示IL-18基因105位點(diǎn)SNP在胃癌中的作用。

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