孫 青 王淑娥 付舒倩 姜 迎 徐貴發(fā)

(山東大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，山東 濟(jì)南 250012)

大豆肽是由大豆蛋白經(jīng)微生物或酶作用后,再經(jīng)特殊處理而得到的蛋白水解物,其分子量較小,水溶性很高,即使在50%的高濃度下仍具有流動(dòng)性，近年來，大豆肽的營養(yǎng)性能和生物活性尤其是在降血脂方面的作用已日益受到關(guān)注〔1，2〕。有關(guān)大豆肽防治高脂血癥的報(bào)道很多屢見不鮮，但主要集中在對(duì)血脂指標(biāo)或血管活性物質(zhì)方面的研究,關(guān)于大豆肽對(duì)脂酶方面的影響目前研究尚少。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠高脂血癥模型,探討大豆肽對(duì)血脂代謝及脂酶水平的影響。

1 材料與方法

1.1藥物與試劑 大豆肽,由山東天久生物技術(shù)有限公司提供；血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肝脂酶(HL)及脂蛋白脂酶(LPL)測(cè)定試劑盒，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SPF級(jí)Wistar雄性大鼠45只，體重(195.91±9.82) g，購自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。高脂飼料由78.8%基礎(chǔ)飼料、1%膽固醇、10%蛋黃粉、10%豬油及0.2%膽鹽配制而成，低、中、高劑量組配方飼料則是在高脂飼料的基礎(chǔ)上分別加入2.025%、4.050%、12.150%的大豆肽。

1.3動(dòng)物分組與方法 實(shí)驗(yàn)環(huán)境下〔溫度(22±2)℃，相對(duì)濕度(50%±5)%〕，大鼠以正常飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后尾靜脈取血，按試劑盒要求測(cè)定血清TC、TG、HDL-C含量。根據(jù)大鼠血清TC水平均衡的原則，隨機(jī)分為5組：正常組、高脂模型組、大豆肽低、中、高劑量組。各組分別自由進(jìn)食正常飼料、高脂飼料及添加相應(yīng)劑量大豆肽的高脂飼料，每周稱量一次體重。飼養(yǎng)40 d后禁食16 h，斷頭取血分離血清，按試劑盒要求測(cè)定大鼠血清中TC、TG、HDL-C含量及HL、LPL活性?？傊?PHTA)活性按照公式：PHTA=HL+LPL計(jì)算得出〔3〕。解剖大鼠，取其心、肝、腎稱重，計(jì)算臟體比值。

2 結(jié) 果

2.1高脂血癥大鼠模型的建立 高脂模型組大鼠在實(shí)驗(yàn)期內(nèi)經(jīng)高脂飼料飼養(yǎng)后,血清TC濃度為(2.97±0.71) mmol/L，TG濃度為(1.55±0.37) mmol/L,而喂飼正常飼料的正常對(duì)照組大鼠TC為(1.68±0.60) mmol/L，TG為(0.98±0.14) mmol/L。由此可見，高脂模型組大鼠的血清TC濃度是正常對(duì)照組的1.77倍，TG為1.58倍，兩組間大鼠TC、TG水平顯著(P<0.01)，高脂血癥大鼠模型誘導(dǎo)成功。

2.2大豆肽對(duì)大鼠體重及臟體比值的影響 各組動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育良好，活動(dòng)正常，體重穩(wěn)定增加。實(shí)驗(yàn)期末，與高脂模型組相比，中、高劑量組大鼠體重、心、肝、腎重量增加明顯(P<0.05，P<0.01)，高劑量組大鼠肝/體比值、腎/體比值偏高(P<0.05，P<0.01)，見表1。

2.3大豆肽對(duì)大鼠血脂指標(biāo)的影響 實(shí)驗(yàn)期末，與高脂模型組相比，大豆肽中、高劑量組大鼠TC、TG含量均顯著降低(P<0.05，P<0.01)；HDL-C含量略升高(P>0.05)，見表2。

2.4大豆肽對(duì)大鼠脂酶的影響 實(shí)驗(yàn)期末，與高脂模型組相比，大豆肽中、高劑量組大鼠HL、LPL及PHTA活性均顯著增強(qiáng)(P<0.05)，見表3。

表1 大豆肽對(duì)大鼠體重及臟體比值的影響

表2 大豆肽對(duì)大鼠血脂指標(biāo)的影響

表3 大豆肽對(duì)大鼠脂酶的影響

3 討 論

高脂血癥是由于脂質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)或代謝紊亂而使血清或血漿中一種或多種脂質(zhì)高于正常的病癥,一般表現(xiàn)為高TC血癥、高TG癥或兩者兼有的混合型。高膽固醇血癥是世界衛(wèi)生組織所報(bào)告的十大獨(dú)立死亡危險(xiǎn)因素之一。在東方人中,血清TC每升高0.6 mmol/L,冠心病發(fā)病的相對(duì)危險(xiǎn)性將升高34%。臨床上，常采用他汀類和貝特類藥預(yù)防和治療高脂血癥,效果良好,但難免有副作用。因此,安全有效地調(diào)節(jié)血脂代謝,防治高脂血癥,逐漸成為研究人員的工作重點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示高脂血癥大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ驼T導(dǎo)成功，也表明添加TC的高脂飼料可明顯干擾大鼠肝臟脂質(zhì)代謝，此結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致〔4〕。血脂檢測(cè)結(jié)果與 Erdman等〔5〕研究結(jié)果相對(duì)應(yīng)。這充分表明大豆肽有明顯的降血脂作用，能夠糾正高脂膳食引起的血脂代謝紊亂，從而防治高脂血癥。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示大豆肽對(duì)大鼠臟器生長(zhǎng)影響不大。有研究顯示，添加TC能增加大鼠肝臟重量，同時(shí)由于高劑量組大豆肽蛋白質(zhì)含量較高，也可能引起肝腎代償性增大，從而導(dǎo)致高劑量組臟體比值的升高。

LPL是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成和分泌的一種糖蛋白，它可以催化乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)中的TG水解。LPL的活性直接影響外周組織攝取脂蛋白、TG和游離脂肪酸(FFA),也是控制TG在體內(nèi)流動(dòng)和在組織內(nèi)分配的“限速閥”。HL與LPL具有同源性,它既可以作為酶水解CM、VLDL-C和LDL-C，并選擇性地水解HDL-C中的TG和磷脂而發(fā)揮催化作用，還可作為脂蛋白與肝細(xì)胞結(jié)合成配體蛋白參與肝臟對(duì)其他脂蛋白的結(jié)合和攝取過程。本實(shí)驗(yàn)的脂酶檢測(cè)結(jié)果提示大豆肽可以通過增強(qiáng)脂酶的活性，影響血中脂質(zhì)水平，發(fā)揮其在脂質(zhì)代謝中的關(guān)鍵作用。

Iritani等〔6〕的實(shí)驗(yàn)表明,大豆蛋白能通過降低Wistar大鼠肝臟脂質(zhì)合成酶基因的表達(dá)而抑制肝臟脂肪酸合成,進(jìn)而刺激甘油三酯的降,這也可能是本實(shí)驗(yàn)中大豆肽組TG水平下降的原因之一。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，大豆肽可以影響多種血管活性物質(zhì)的生成，改善血液流變學(xué)，并促進(jìn)糞膽汁酸排泄，增強(qiáng)肝臟HMG-CoA還原酶活性及LDL-R基因的表達(dá)〔7～9〕而發(fā)揮降低血血TC的作用。本實(shí)驗(yàn)在脂酶層次解釋了大豆肽降血脂作用的機(jī)制，但仍需進(jìn)一步探討。

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