朱黎霞 王利勝 張英豐

1.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院中醫(yī)科，廣東廣州 510282；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東廣州 510006

隨著生活水平的提高和生活方式的轉(zhuǎn)化，高脂血癥在臨床中呈現(xiàn)多發(fā)性、低齡化趨勢(shì)[1]。丹參和山楂是臨床常用的降脂藥對(duì)[2-4]，對(duì)高脂血癥確有療效，丹參總酚酸[5-7]、山楂總黃酮[8-9]是降脂的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。對(duì)中藥復(fù)方而言，配伍和劑量決定了臨床療效。

中藥組分配伍是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。組分配伍從臨床出發(fā)，遵循傳統(tǒng)方劑配伍理論與原則，保持組分配伍的中醫(yī)特色，針對(duì)有限適應(yīng)證，降低方劑研究的難度[10-11]。本文在丹參、山楂臨床用量的基礎(chǔ)上，采用基線等比增減設(shè)計(jì)法重組丹參總酚酸、山楂總黃酮?jiǎng)┝浚愿咧Y大鼠為模型動(dòng)物，探討不同組分配伍對(duì)高脂血癥大鼠血脂、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的影響，為研發(fā)出“安全、有效、穩(wěn)定、可控”的現(xiàn)代中藥制劑奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Anke TDL-40B離心機(jī) （上海安亭科學(xué)儀器廠），羅氏P800全自動(dòng)生化分析儀（瑞士羅氏儀器中心）。

1.2 藥物及試劑

丹參總酚酸（自制，采用60%乙醇回流提取法結(jié)合大孔樹(shù)脂精制，經(jīng)紫外分光光度法測(cè)定總酚酸含量61.23%）。山楂總黃酮（自制，采用乙醇回流提取結(jié)合大孔樹(shù)脂純化，經(jīng)紫外分光光度法測(cè)定總黃酮含量71.25%）。MDA、SOD檢測(cè)試劑盒（均購(gòu)自南京建成生物工程研究所）。高脂飼料 （膽固醇4.0%，豬油10.0%，丙基硫氧嘧啶0.2%，膽酸鈉0.3%，基礎(chǔ)飼料85.5%，委托飼料廠商生產(chǎn)）。阿托伐他?。ㄉ唐访⑵胀?，10 mg/片，美國(guó)輝瑞制藥公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí) SD 大鼠，雌雄各半，體重（230±10）g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK2008-0020。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參總酚酸和山楂總黃酮組分配伍設(shè)計(jì)

根據(jù)丹參、山楂的臨床用量，活性部位轉(zhuǎn)移率結(jié)合前期藥效初篩，確定丹參-山楂組分總有效劑量為120 mg/kg。在總量恒定的前提下以120 mg/kg為配伍基線，丹參總酚酸以25%遞減，山楂總黃酮以25%遞增向極點(diǎn)擴(kuò)展，依次做為組分配伍比例。復(fù)制高脂血癥大鼠模型，評(píng)價(jià)不同配伍對(duì)高脂血癥大鼠血脂的影響。組分配伍見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)前，有效組分均分散于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液內(nèi)形成混懸液，灌胃給藥。

表1 丹參總酚酸、山楂總黃酮組分配伍表

2.2 分組及給藥

80只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為8組，每組10只，雌雄各半。整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)正常組予以普通飼料喂養(yǎng)，丹參、山楂配伍 A、B、C、D、E 組和立普妥（降脂陽(yáng)性對(duì)照組）組均給予高脂飼料（35 g/d）。丹參山楂配伍組分別按表1所設(shè)劑量灌胃給藥，立普妥組按2.2 mg/kg灌胃給藥，正常組和模型組均給予等體積生理鹽水。開(kāi)始給予高脂飼料15 d后各組分別灌胃給藥[12-13]。連續(xù)給藥至第30天，各組大鼠腹主動(dòng)脈取血，分離血清，檢測(cè)血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及MDA、SOD活性，并計(jì)算動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（TC/HDL-C）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每周稱(chēng)重1次，根據(jù)動(dòng)物體重調(diào)整藥物劑量。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SAS 9.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；兩組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 結(jié)果

2.4.1 丹參總酚酸、山楂總黃酮不同配伍比例對(duì)高脂血癥大鼠血清TC和脂蛋白的影響 采用高脂飼料復(fù)制高脂血癥大鼠模型，模型組大鼠TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C顯著升高，具有典型的脂質(zhì)代謝紊亂狀態(tài)，和正常組相比，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.01）。丹參酚酸和山楂黃酮按不同比例配伍后均可明顯降低 TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C 水平， 提高HDL-C水平。丹參酚酸、山楂黃酮在配伍比例接近時(shí)降脂效果明顯優(yōu)于其他組，說(shuō)明丹參和山楂具有協(xié)同降脂作用。見(jiàn)表2。

表2 丹參總酚酸、山楂總黃酮配伍對(duì)高脂血癥大鼠血脂的影響（±s，n=10）

表2 丹參總酚酸、山楂總黃酮配伍對(duì)高脂血癥大鼠血脂的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01；TC：總膽固醇；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；TC/HDL-C：動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)

組別 TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L） TC/HDL-C正常組模型組A組B組C組D組E組立普妥組1.45±0.27 5.98±0.53**4.83±0.44#4.46±0.41##3.97±0.23##4.17±0.31##4.96±0.28#2.29±0.46##0.69±0.14 1.27±0.36**0.93±0.12#0.89±0.10##0.75±0.19##0.87±0.27##0.92±0.13#0.74±0.09##0.91±0.11 0.58±0.09**0.64±0.15 0.69±0.19 0.72±0.11#0.83±0.07##0.77±0.09##0.95±0.11##0.91±0.11 0.58±0.09**0.64±0.15 0.69±0.19 0.72±0.11#0.83±0.07##0.77±0.09##0.95±0.11##1.59±0.22 10.31±0.42**7.54±0.59**6.46±0.75**5.51±0.48**5.02±0.27**6.44±0.34**2.41±0.40**

2.4.2 丹參總酚酸、山楂總黃酮不同配伍比例對(duì)高脂血癥大鼠血清SOD、MDA水平的影響 與正常組相比，高脂模型組SOD活性明顯降低（P<0.01），MDA水平顯著升高（P<0.01）。丹參、山楂的不同配伍均可升高SOD水平，降低MDA水平，而具有顯著的抗氧化活性。在不同配伍組中，山楂黃酮比例越高，抗氧化活性越好。但單用山楂總黃酮或單用丹參總酚酸，效果反而不如配伍組。見(jiàn)表3。

表3 丹參總酚酸、山楂總黃酮配伍對(duì)高脂血癥大鼠血清SOD、MDA 水平的影響（±s，n=10）

表3 丹參總酚酸、山楂總黃酮配伍對(duì)高脂血癥大鼠血清SOD、MDA 水平的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01；SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛

組別 SOD（U/mL） MDA（nmol/mL）正常組模型組A組B組C組D組E組立普妥組246.78±33.27 137.56±23.43**189.55±49.56##209.67±20.89##212.56±30.64##230.08±27.94##195.67±17.56##235.13±25.34##5.63±0.54 9.69±0.69**7.81±0.78#7.13±0.37##6.01±0.45##6.53±0.64##7.29±0.40##6.07±0.51##

3 討論

中藥復(fù)方既有藥味數(shù)目的不同，又有劑量的變化，更內(nèi)含比例的差異，功能主治、作用范圍、適應(yīng)病證、療效機(jī)制等隨配伍變化而變化，構(gòu)成“彼此協(xié)同、相互制約”的有機(jī)體。在病證結(jié)合、理法方藥一致的條件下，通過(guò)成分群介導(dǎo)的多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多途徑的整合調(diào)節(jié)作用而發(fā)揮整體效應(yīng)。

中藥復(fù)方配伍后會(huì)產(chǎn)生物理、化學(xué)、生物等多方面變化。成分群數(shù)、量、比例的相對(duì)變化是配伍的物質(zhì)基礎(chǔ)，色澤、氣味等物理狀態(tài)是配伍的外在表現(xiàn)，藥理效應(yīng)、毒副作用、臨床適應(yīng)證、功能主治是配伍的終極目標(biāo)，成分群體內(nèi)吸收、分布、代謝、排泄等環(huán)節(jié)是配伍與藥效的必要路徑。配伍是“因”，藥效是“果”，因果之間的內(nèi)在聯(lián)系可借助于配伍產(chǎn)生的物理、化學(xué)、生物變量，采用信息學(xué)手段予以闡明。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)在配伍機(jī)制研究中起重要作用。方劑配伍的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)多是從配伍前后的藥理效應(yīng)或化學(xué)成分變化作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，利用數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)方法探討方劑配伍模式（如正交設(shè)計(jì)、均勻設(shè)計(jì)、聚類(lèi)分析、主成分分析、多目標(biāo)優(yōu)化的ED/NM/MO三聯(lián)法[14]）。如譚曉梅等[15]和賀豐等[16]用正交設(shè)計(jì)法系統(tǒng)研究了配伍對(duì)葛根芩連湯中系列成分含量及人體內(nèi)過(guò)程的影響等。鐘志勇等[17]用多指標(biāo)正交設(shè)計(jì)合并線性回歸法探討芍藥甘草湯的最佳配伍。

本文采用基線等比增減設(shè)計(jì)法探討了丹參酚酸和山楂黃酮對(duì)高脂血癥大鼠模型血脂及SOD、MDA水平的影響。相比正交設(shè)計(jì)和均勻設(shè)計(jì)，等比增減設(shè)計(jì)非常適合藥效物質(zhì)基礎(chǔ)相對(duì)明確、藥味相對(duì)較少的小復(fù)方（或君藥、臣藥），根據(jù)研究目的以?xún)伤幹饕?yīng)和次要效應(yīng)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)綜合信息分析，進(jìn)行各配伍的優(yōu)化篩選[18-19]。

丹參酚酸和山楂黃酮均是已知的較強(qiáng)的中藥抗氧化活性部位[20-21]。丹酚酸對(duì)超氧陰離子、羥自由基有很強(qiáng)的清除作用和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用。山楂黃酮具有提高抗氧化能力、減輕自由基損傷、促進(jìn)體內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)平衡恢復(fù)等作用[22]。研究發(fā)現(xiàn)，單用丹參酚酸和單用山楂黃酮其降脂、抗氧化活性均不如配伍組，且丹參酚酸和山楂黃酮?jiǎng)┝拷咏鼤r(shí)降脂、抗氧化效果最好，具有類(lèi)似的趨勢(shì)，協(xié)同增效作用明顯，C、D組降脂、抗氧化活性明顯優(yōu)于其他組，具體機(jī)制尚有待深入研究。

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