于玲 王曉飛 葛海生

【摘 要】 目的：建立以高效液相色譜法測定加味皮康顆粒中橙皮苷含量的方法。方法：色譜柱：SHISEIDO C18 （4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（12∶ 13∶ 75），柱溫：35℃，檢測波長：284nm，流量：1.0ml/min。結(jié)果：橙皮苷進(jìn)樣量在0.06336～2.5344μg/ml范圍內(nèi)線性良好（r=0.9998），平均回收率為98.83%，RSD為1.34%（n=6）。結(jié)論：本方法簡便快速、準(zhǔn)確、可用于加味皮康顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法；加味皮康顆粒；橙皮苷；含量測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）19-0013-02

加味皮康顆粒是由牡丹皮、陳皮等多味中草藥組成[1]，臨床用于玫瑰糠疹、濕疹的治療，為更好的控制藥品質(zhì)量，確保用藥安全，本文采用高效液相色譜（HPLC）測定制劑中橙皮苷的含量，方法簡單、準(zhǔn)確，可用于本品的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU LC-2010HTC高效液相色譜儀（二極管陣列紫外檢測器）。

1.2 試藥 橙皮苷對照品（批號：110721-201115，中國食品藥品檢定研究院）；加味皮康顆粒（批號：20130701、20130702、20130703、20130704，武警醫(yī)院自制）；乙腈、甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2] 色譜柱：SHISEIDO C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（12∶ 13∶ 75）；柱溫：35℃；檢測波長：284nm；流量：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10μl。理論塔板數(shù)按橙皮苷峰計算不低于7000，分離度符合規(guī)定。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取橙皮苷對照品（含量為96.3%）約7.92mg，置于50ml量瓶中，加甲醇適量溶解后，稀釋至刻度，搖勻制得貯備液。精密吸取貯備液2ml置5ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液（約每1ml含橙皮苷60μg）。

2.2.2 供試品溶液 取本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理20min使溶散，加熱回流45min，放冷，再稱定重量，加80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 按處方中各藥味的比例和制法項下規(guī)定配制缺陳皮的陰性樣品，再按“2.2.2”項下方法對樣品進(jìn)行制備，作為陰性樣品溶液。

2.3 方法專屬性試驗 精密吸取橙皮苷陰性對照溶液、對照品溶液、供試品溶液各10μl，分別注入色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄圖譜，結(jié)果陰性對照溶液在與橙皮苷對照品相同保留時間色譜峰處未顯色譜峰，因此無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取橙皮苷對照品溶液（濃度為：61.02μg/ml）各1、5、10、15、20、25、30、35、40μl注入色譜儀中，按“2.1”項下色譜條件測定橙皮苷峰面積（A），作為縱坐標(biāo)，同時以橙皮苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y=11400+1725506X，r=0.9998，橙皮苷進(jìn)樣量在0.06336～2.5344μg/ml范圍呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 精密量取“2.4”中同一橙皮苷對照品溶液（濃度為61.02μg/ml），按“2.1”項下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μl，記錄橙皮苷峰面積，依法進(jìn)行計算，結(jié)果芍藥苷的峰面積RSD為0.12%（n=6）。

2.6 穩(wěn)定性試驗 將“2.2.2”項下的供試品溶液于室溫放置，分別在0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣10μl，經(jīng)計算得橙皮苷峰面積RSD為0.80%（n=7），表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批號的樣品0.5g，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，平行制備6份。依法測定，結(jié)果橙皮苷含量的RSD=0.69%（n=6），表明本法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗 取已知橙皮苷含量的供試品（批號：20130704，含量為5.1425 mg/g）6份，每份約0.5g，精密稱定，分別置于錐形瓶中，精密加入橙皮苷對照品溶液（濃度為2.6913mg/ml）各1ml，再精密加入80%甲醇50ml，按“2.2.2”項下方法制成供試品，分別吸取供試品溶液10μl，注入HPLC儀，依法測定橙皮苷含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品的測定 取本品3批，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，進(jìn)樣10依法測定，按外標(biāo)法計算橙皮苷的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 在試驗中，取同一批號的供試品，采用甲醇、80%甲醇、乙醇分別考察了超聲處理15min的考察方法，結(jié)果表明，以80%甲醇為溶劑，超聲處理15min，再加熱回流40min，方法簡便，提取充分，方法最佳。

3.2 試驗中，比較了參考文獻(xiàn)1、2所述的流動相、柱溫，以乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶ 86），柱溫：35℃，制劑中橙皮苷能與其他組分的色譜峰很好分離，理論板數(shù)按橙皮苷峰計算不低于7000，且方法簡便、實用，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為加味皮康顆粒的質(zhì)量控制方法。

參考文獻(xiàn)

[1]于玲，王曉飛，葛海生.加味皮康顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013，22（23）：14-16.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：441，475.