湯曉琳，方芳

(1.沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能中心，遼寧 沈陽 110034;2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室)

國內(nèi)檢測乙肝五項(xiàng)指標(biāo)主要使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法［1］，其特異性和靈敏度得到肯定。近年來使用的膠體金免疫層析(gold immunochromatographic assay，GICA)法由于其操作簡便，不需特殊檢測儀器和設(shè)備，在大面積人群篩查乙肝表面抗原(HBsAg)時(shí)被大量使用，已經(jīng)開始受到關(guān)注。本文旨在比較ELISA 法和GICA 法檢測HBsAg 的陽性率，探討影響2 種方法結(jié)果的因素。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年12 月至2014年3 月沈陽市第一五七醫(yī)院體檢患者和住院患者470例，其中男320例，女150例，年齡20～76 歲，平均48 歲。

1.2 試劑與儀器 GICA 法試紙條和ELISA 試劑盒均購自上?？迫A生物技術(shù)有限公司(96 人份)，美國產(chǎn)stat fax2100 型酶標(biāo)儀。

1.3 方法 470 份血清標(biāo)本以GICA 試紙條和ELISA 試劑盒進(jìn)行檢測，按照說明書要求操作并判斷結(jié)果。

ELISA 法:(1)每孔加入待測標(biāo)本50 μl，設(shè)陰陽對照各2 孔，每孔加入陰性對照各50 μl，并設(shè)空白對照1 孔;(2)每孔加入酶結(jié)合物50 μl(空白對照孔除外)，充分混勻，封板，置37 ℃孵育30 min;(3)手工洗板;(4)每孔加顯色劑A液、B 液各50 μl，充分混勻，封板，置37 ℃孵育15 min;(5)每孔加終止液50 μl，混勻;(6)用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長450 nm，先用空白孔校零，然后讀取各孔吸光度值。

GICA 法:(1)將試紙條取出，粘貼于不干膠記錄紙上相應(yīng)位置，水平放置并做好標(biāo)記;(2)用加樣器毛細(xì)管吸取60 μl 新鮮血清緩慢滴加于試條箭頭下方的墊片上;(3)為防止弱陽性標(biāo)本的漏檢，于加樣后10 min 觀察并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2 種方法檢測HBsAg 均陰性的437 份，均陽性的31 份，2 種方法檢測的符合率為99.57%，靈敏度為93.93%。GICA 法檢測出HBsAg 陽性標(biāo)本31 份，HBsAg 陽性率6.72%。ELISA 法檢測出HBsAg 陽性標(biāo)本33 份，HBsAg 陽性率為7.07%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.49，P ＞0.05)。

表1 2 種檢測HBsAg 方法的比較

3 討論

乙型肝炎病毒是乙型肝炎的病原體，乙肝在我國屬于突出的公共衛(wèi)生問題，中國報(bào)告每年乙肝新發(fā)病例數(shù)約50 萬。HBsAg 為乙肝病毒感染的最主要的病原標(biāo)志物和直接證據(jù)之一［1］。HBsAg是血清中最早出現(xiàn)的HBV 標(biāo)志物，在急性肝炎時(shí)很快消失，若6個(gè)月后血清中HBsAg 仍不消失，可成為慢性肝炎或者HBsAg 攜帶者，可持續(xù)幾年或幾十年。因此乙肝患者以及乙肝病毒攜帶者HBsAg 檢測的準(zhǔn)確性是非常重要的。

本研究應(yīng)用2 種方法檢測470 份血清樣品中，結(jié)果顯示ELISA 法檢測出陽性HBsAg 標(biāo)本33 份(7.07%)，GICA 法檢測出陽性標(biāo)本31 份(6.72%)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，GICA 法比ELISA 法少檢出2例，有漏檢現(xiàn)象，可能因GICA 法靈敏度較ELISA 法低造成。雖然2 種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是由于乙肝血清標(biāo)志物檢測原理及方法學(xué)上的差異，在實(shí)際臨床工作中，GICA 法的簡單便捷的優(yōu)勢是ELISA 法不具備的，但是替換ELISA 法檢測HBsAg 目前是不能實(shí)現(xiàn)的，因?yàn)镚ICA 法有方法學(xué)原因，會(huì)發(fā)生漏檢和檢測假陰性的可能性，應(yīng)根據(jù)具體情況推薦檢測機(jī)構(gòu)所使用的方法，例如做腔鏡手術(shù)患者和獻(xiàn)血者［2］等需要快速了解乙肝情況時(shí)，可以采用省時(shí)、快速的GICA檢測法。對于大型綜合性醫(yī)療機(jī)構(gòu)，則建議使用ELSIA 法檢測HBsAg?？尚械氖窃诰o急情況發(fā)生時(shí)可先使用GICA 法檢測，建議對有疑問的患者再次用ELISA 法復(fù)檢，同時(shí)操作過程中要注意影響2 種方法檢測結(jié)果的因素，應(yīng)用GICA 法篩查和ELISA 法檢測的聯(lián)合模式為臨床提出相應(yīng)正確的指導(dǎo)。

本次檢測選用同一廠家GICA 法試劑盒和ELISA 法試劑盒，但是檢測最終結(jié)果受諸多因素的影響［3］。首先試劑的影響，不同廠家出產(chǎn)的試劑存在一定的差異，資料顯示不同廠家試劑的特異性和敏感性分別為89.14%～99.13%，78%～89%，存在較大差異。選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。其次，操作不規(guī)范也是影響結(jié)果的重要因素，操作過程中觀察時(shí)間以及溫度、洗板、顯色等因素都會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。GICA 法與ELISA 法相比，操作時(shí)間已經(jīng)大大縮短，但層析速度太快時(shí)，弱陽性標(biāo)本可能還未顯色，操作者誤認(rèn)為判斷時(shí)間已到，給出假陰性結(jié)果。因此，應(yīng)達(dá)到說明書要求的觀察時(shí)間，以減少弱陽性標(biāo)本的漏檢率。孵育影響:抗原、抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對溫度有嚴(yán)格要求，ELISA 法中加入板孔中的標(biāo)本在37 ℃環(huán)境經(jīng)過一定時(shí)間擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)平衡。洗滌是ELISA 法操作的重要環(huán)節(jié)，ELISA 法的原理就是靠洗滌來達(dá)到分離復(fù)合物及酶標(biāo)記物的目的，本研究使用手工洗板時(shí)要避免孔內(nèi)洗滌液外溢，以防相鄰孔互相污染。顯色:通常底物顯色在37 ℃10～40 min 反應(yīng)徹底完成，延長時(shí)間顏色也不會(huì)再加深。最后，必須采用酶標(biāo)儀檢測，顯現(xiàn)出的顏色淺不容被肉眼觀察出差別，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，以保證結(jié)果的一致性。

［1］高麗，付紅，李慧，等.膠體金試紙法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測乙型肝炎病毒表面抗原的比較［J］.中國免疫計(jì)劃，2007，13 (1):51－53.

［2］徐珊珊，王松云.膠體金法快速檢測無償獻(xiàn)血HBsAg 漏檢原因分析［J］.江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2007，25 (8):333－334.

［3］葛君，王麗娜.影響ELISA 法檢測乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物的因素［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，31 (3):289－290.