郭連瑩，徐超，周波，王曉紅，張卓

(沈陽醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室，遼寧 沈陽 100034)

膳食中植物蛋白特別是大豆蛋白代替動(dòng)物蛋白可以降低血漿膽固醇含量已得到廣泛認(rèn)可。他汀類藥物是目前治療高膽固醇血癥的首選藥物，但長期應(yīng)用費(fèi)用偏高且存在一定副作用。故本研究將探討小劑量他汀類藥物與大豆蛋白聯(lián)合應(yīng)用是否具有協(xié)同作用，以提高治療效果，降低治療成本，減少副作用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4 周齡Wistar 雄性健康大鼠，體重70～80 g 左右，共60 只，由沈陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 動(dòng)物的處理

1.2.1 高膽固醇血癥大鼠模型的制備 大鼠在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)1 周后，隨機(jī)抽取10 只作為陰性對(duì)照組，繼續(xù)喂飼基礎(chǔ)飼料，其余50 只喂飼高脂飼料。在此期間，每籠4 只大鼠，自由攝取水和飼料，室溫保持在(20 ±2)℃，濕度為60%～70%。第14天晚8 時(shí)開始禁食，于次日清晨8 時(shí)在乙醚麻醉下，眼球后靜脈叢取血1.5 ml，測定血脂。

1.2.2 施加處理因素 剔除體重及血清膽固醇濃度異常鼠18 只，再按體重和血清膽固醇濃度均衡的原則，將高脂大鼠隨機(jī)分為4 組:20%大豆蛋白組、20%酪蛋白組、20%大豆蛋白+1mg/ (kg·bw)新伐他汀藥物組和20% 酪蛋白+1 mg/(kg·bw)新伐他汀藥物組，每組8 只，分別給相應(yīng)的純合成飼料，新伐他汀藥物灌胃給藥。單籠飼養(yǎng)4 周，飼養(yǎng)條件同前。于施加處理因素的第28 天晚時(shí)開始禁食，于次日清晨8 時(shí)在乙醚麻醉下，再次眼球后靜脈叢取血1.5 ml，測定血脂。

1.3 飼料配方及試劑 制作高膽固醇血癥大鼠模型時(shí)所用的高脂飼料組成為:5%豬油，1%膽固醇，0.25%膽鹽和93.75%普通飼料。各處理組飼料均為純合成飼料，按美國NRC 標(biāo)準(zhǔn)配制。新伐他汀由哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司生產(chǎn)，為人用藥物，用水溶解配成溶液。酪蛋白粉和大豆分離蛋白粉分別由北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司和吉林不二蛋白制品有限公司生產(chǎn)。

1.4 血樣的處理及指標(biāo)測定 血樣在室溫下沉淀1 h，37 ℃水浴30 min，經(jīng)3 000 r/min 離心10 min，取血清在日立7170A 型全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行測定。指標(biāo)為血漿總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。測定所用的TC 試劑盒由北京利德曼生化技術(shù)有限公司生產(chǎn)，TG 試劑盒由煙臺(tái)澳斯幫生物工程有限公司生產(chǎn)，HDL-C 試劑盒和LDL-C 試劑盒由溫州市維日康生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行描述性和單因素方差分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高血漿膽固醇大鼠模型的建立 32 只實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)過2 周高膽固醇血癥的誘導(dǎo)后，血清TC 濃度為(4.64 ±1.14)mmol/L，而喂普通飼料的陰性對(duì)照鼠僅為(1.65 ±0.31)mmol/L。因此，高膽固醇模型大鼠的血清總膽固醇濃度約為陰性對(duì)照的2.8 倍。見表1。

表1 高脂組與對(duì)照組大鼠血脂情況(，mmol/L)

表1 高脂組與對(duì)照組大鼠血脂情況(，mmol/L)

注:與對(duì)照組相比，1)P ＜0.01，2)P ＜0.05

2.2 體重增長和攝食量 4 周實(shí)驗(yàn)期的總攝食量及體重增長及飼料效價(jià)在給他汀藥的2 組小鼠相對(duì)要低些，但各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)大鼠的初始體重、體重增長、飼料攝入量和飼料效價(jià)()

表2 實(shí)驗(yàn)大鼠的初始體重、體重增長、飼料攝入量和飼料效價(jià)()

注:* 飼料效價(jià)=體重增長量(g)/攝食量(g)

2.3 血脂指標(biāo) 20%大豆蛋白加小劑量新伐他汀組與20%酪蛋白加小劑量新伐他汀組相比，大鼠血清TC、HDL-C 和LDL-C 濃度顯著降低 (P ＜0.05)，血清TC 濃度降幅約為33.6%。20%大豆蛋白加小劑量新伐他汀組與20%酪蛋白組相比，大鼠血清TC 降低約27.3% (P ＜0.05)。與20%大豆蛋白組相比，20%大豆蛋白加小劑量他汀藥物組的血清TC 下降約21.9%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。20%大豆蛋白組血清TC 比20%酪蛋白下降6.9%，差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3、表4。

表3 各組大鼠TC 和TG 濃度(，mmol/L)

表3 各組大鼠TC 和TG 濃度(，mmol/L)

注:與20%酪蛋白+他汀組和20%酪蛋白組相比，1)P ＜0.05

表4 各組大鼠HDL-C 和LDL-C 濃度(，mmol/L)

表4 各組大鼠HDL-C 和LDL-C 濃度(，mmol/L)

注:與20%酪蛋白+他汀組和20%酪蛋白組相比，1)P ＜0.05;與20%酪蛋白+他汀組相比，2)P ＜0.05

3 討論

人類高血脂癥患者血清中主要是TC 和LDL-C水平過高，增加了發(fā)展為動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的危險(xiǎn)性，降低血中TC 濃度對(duì)預(yù)防冠心病的發(fā)生具有重要意義。研究表明，同酪蛋白比較，攝入大豆蛋白可顯著降低高血膽固醇大鼠的血清TC 和LDL-C 水平，可使體內(nèi)膽固醇濃度平均下降約5%～15%［1－3］。在本實(shí)驗(yàn)條件下，與20%酪蛋白組相比，20%酪蛋白的降膽固醇量差異雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但數(shù)值上的降低幅度也較大(6.9%)，究其原因可能是由于干預(yù)時(shí)間短有關(guān)，這也與其它報(bào)道相一致的［4］。

本實(shí)驗(yàn)中20%大豆蛋白加小劑量他汀藥物組大鼠的血清TC 既低于20%大豆蛋白組，也低于20%酪蛋白加小劑量他汀藥物組大鼠，說明大豆蛋白和他汀類降血脂藥物具有很好的協(xié)同作用。兩者之所以具有協(xié)同，可能與二者具有不同的降膽固醇途徑有關(guān)。他汀類藥物作為臨床上有效的常規(guī)降脂藥物，其是體內(nèi)膽固醇合成的限速酶羥甲基戊二酰輔酶A (HMG-CoA)還原酶的抑制劑，能抑制體內(nèi)膽固醇的合成。研究表明大豆蛋白降低血清膽固醇的機(jī)制可能是由于大豆蛋白增強(qiáng)了合成膽汁酸的限速酶膽固醇7α-羥化酶(CYP7A)的活性，加速了膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化，增加糞膽汁酸的排出量而導(dǎo)致肝臟中由膽固醇合成的膽汁酸增加，從而使血清膽固醇濃度下降［5，6］。

綜上所述，由于小劑量他汀類藥物和大豆蛋白聯(lián)合作用時(shí)既抑制HMG-CoA 還原酶，使體內(nèi)膽固醇的合成減少，又可能增加了膽固醇7α-羥化酶的活性，增加體內(nèi)膽固醇的排泄，使大豆蛋白和小劑量他汀類藥物起到很好的協(xié)同降膽固醇作用。

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［3］李季芳，蔣卓勤，黎藝，等.大豆蛋白對(duì)大鼠血脂調(diào)節(jié)的作用機(jī)制［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，40 (16):3002－3005.

［4］徐超，王露，王曉紅，等.攝入不同劑量大豆蛋白干預(yù)高膽固醇模型大鼠的血脂水平［J］.中國臨床康復(fù)，2005，9(15):64－66.

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