陳劍磨 張勝軍 夏炳江

（浙江省紹興市中醫(yī)院，浙江 紹興 312000）

·研究報(bào)告·

骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛病證結(jié)合模型構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究*

陳劍磨 張勝軍 夏炳江△

（浙江省紹興市中醫(yī)院，浙江 紹興 312000）

目的研究建立骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛病證結(jié)合模型的方法。方法雌性昆明小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（A組）、證型模型組（B組）、疾病模型組（C組）、疾病證型模型組（D組）。分別應(yīng)用去雙側(cè)卵巢法構(gòu)建骨質(zhì)疏松模型，氫化可的松皮下注射誘導(dǎo)腎陽(yáng)虛證模型。通過(guò)觀察小鼠癥狀體征、促腎上腺皮質(zhì)激素、促甲狀腺激素、環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷、骨密度、骨組織形態(tài)學(xué)等評(píng)價(jià)模型。結(jié)果與A組比較，D組小鼠出現(xiàn)毛發(fā)干枯，畏寒倦臥，肛溫降低等腎陽(yáng)虛癥狀，促腎上腺皮質(zhì)激素及促甲狀腺激素含量降低（P＜0.01），環(huán)磷酸腺苷/環(huán)磷酸鳥苷降低（P＜0.01），股骨近端、腰椎骨密度下降（P＜0.01），HE染色及骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析顯示骨小梁排列稀疏、變細(xì)，破骨細(xì)胞數(shù)增多等。結(jié)論采取雙側(cè)卵巢切除結(jié)合氫化可的松皮下注射的方法，能成功構(gòu)建骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛病證結(jié)合模型。

骨質(zhì)疏松 腎陽(yáng)虛 病證結(jié)合 動(dòng)物模型

研究人類或動(dòng)物的疾病，應(yīng)在獲得相應(yīng)疾病動(dòng)物模型基礎(chǔ)上，開展探索致病機(jī)制的基礎(chǔ)研究，根據(jù)獲得的相關(guān)信息確定最終診治方案［1］。建立合理、規(guī)范的疾病模型能有效地研究疾病的發(fā)生、發(fā)展，研究病因和尋求治療方案。病證結(jié)合動(dòng)物模型融合中醫(yī)證候模型和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病理學(xué)模型的共同因素和特點(diǎn)，使動(dòng)物模型同時(shí)具有疾病與證候特征［2］，該類模型是闡明中醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)理論和辨證論治較為理想的載體。根據(jù)病證結(jié)合的理念，本研究擬采用疾病模型復(fù)合證候模型的方法構(gòu)建腎陽(yáng)虛證骨質(zhì)疏松癥模型，為進(jìn)一步研究中醫(yī)藥防治骨質(zhì)疏松奠定良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、藥物與試劑 全自動(dòng)組織脫水機(jī)（日本櫻花），輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（德國(guó)Leica），顯微鏡及顯微拍攝系統(tǒng)（德國(guó)Leica），高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf），全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo），多光譜小動(dòng)物活體成像儀（美國(guó)Carestream Health），BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；氫化可的松注射液（天津金耀氨基酸有限公司，生產(chǎn)批號(hào)1112231）；促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、促甲狀腺激素（TSH）、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）ELISA試劑盒（南京建成生物工程研究所提供）。

1.2 動(dòng)物 清潔級(jí)雌性昆明小鼠60只，體質(zhì)量（20± 2）g，所有小鼠均由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物號(hào)SYXK-浙-2008-0115），每籠5只，喂食普通顆粒飼料，室溫（20±2）℃，自然光照，保持良好通風(fēng)，自由進(jìn)水進(jìn)食。

1.3 分組與造模 60只昆明小鼠隨機(jī)分為2大組，分別進(jìn)行假手術(shù)和去雙側(cè)卵巢手術(shù)。假手術(shù)后存活小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（A組）和證型模型組（B組）；去雙側(cè)卵巢手術(shù)后存活小鼠隨機(jī)分為疾病模型組（C組）和疾病證型模型組（D組），每組15只。A組：行假手術(shù)，以作對(duì)照。B組：假手術(shù)后間隔7周，皮下注射氫化可的松1周。C組：行雙側(cè)卵巢去除術(shù)。D組：去雙側(cè)卵巢術(shù)后間隔7周，皮下注射氫化可的松1周。骨質(zhì)疏松癥模型采用去勢(shì)法制作：10%水合氯醛溶液（0.3 mL/100 g）腹腔注射，麻醉滿意后，小鼠俯臥位，在第3腰椎處備皮消毒，正中縱形切開皮膚約1 cm，鈍性分離一側(cè)肌肉，剪開腹膜，找到梅花狀的卵巢，0號(hào)無(wú)菌絲線結(jié)扎并用眼科剪剪斷輸卵管，分離切除卵巢，分層縫合肌肉筋膜，滴入少量青霉素水溶液后縫合皮膚，同法切除對(duì)側(cè)卵巢。A組手術(shù)同上，發(fā)現(xiàn)卵巢后僅切除與卵巢等量的脂肪后縫合皮膚。腎陽(yáng)虛模型按25 mg/kg劑量，皮下注射氫化可的松來(lái)誘導(dǎo)，約1周［3］。腎陽(yáng)虛型骨質(zhì)疏松癥模型由上述2種造模方法復(fù)合而成，即在骨質(zhì)疏松癥模型的基礎(chǔ)上復(fù)合腎陽(yáng)虛模型，當(dāng)骨質(zhì)疏松造模至7周時(shí)，開始腎陽(yáng)虛造模，至8周時(shí)骨質(zhì)疏松癥及腎陽(yáng)虛造模同時(shí)結(jié)束。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組小鼠均無(wú)死亡情況出現(xiàn)。

1.4 觀測(cè)指標(biāo) （1）動(dòng)物癥狀、體征觀察。采用量化分級(jí)方法連續(xù)觀察造模后小鼠毛發(fā)光澤度、精神、活動(dòng)狀態(tài)、飲食、睡眠、二便等情況。根據(jù)以下10個(gè)癥狀和體征：毛發(fā)干枯、畏寒喜暖、大便稀溏、小便清長(zhǎng)、卷縮弓背、精神萎頓、怠倦嗜睡、自主活動(dòng)次數(shù)減少、抓取時(shí)抵抗性減弱、食欲不振。對(duì)各組小鼠進(jìn)行評(píng)分，依據(jù)嚴(yán)重程度不同，分別記為正常（0~1分），輕（2~4分），中（5~ 7分），重（8~10分）4個(gè)等級(jí)，評(píng)分有2個(gè)非實(shí)驗(yàn)組的中醫(yī)專業(yè)人士完成［7］。（2）動(dòng)物體質(zhì)量及肛溫變化。采用電子天平稱量動(dòng)物體質(zhì)量，每3日1次，每次稱量時(shí)間為下午14：00~16：00。在每次稱量前，利用專用肛溫計(jì)測(cè)量小鼠肛溫并記錄。（3）血液學(xué)檢測(cè)。10%水合氯醛將小鼠麻醉后，采用摘除眼球的方法取血，提取血漿和血清后，-20℃冰箱內(nèi)保存。按Elisa試劑盒說(shuō)明的檢測(cè)方法，分別測(cè)定血漿環(huán)核苷酸cAMP、cGMP含量和血清ACTH、TSH的濃度。（4）骨密度測(cè)定。用10%水合氯醛將小鼠麻醉后，利用多光譜小動(dòng)物活體成像儀對(duì)脊柱及股骨進(jìn)行X線攝片，利用自帶軟件進(jìn)行股骨近端及第2腰椎骨密度（bone density）測(cè)定。（5）骨組織形態(tài)學(xué)觀察。將小鼠股骨、腰椎用4%多聚甲醛液固定2 d，14%EDTA液脫鈣14 d，按常規(guī)脫水、透明、包埋、石蠟切片，厚約3~4 μm，常規(guī)HE染色，用顯微鏡在40、200倍鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)變化情況，并利用BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行骨組織形態(tài)學(xué)計(jì)量分析，包括骨小梁平均寬度，骨小梁面積，成骨細(xì)胞數(shù)及破骨細(xì)胞數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 癥狀、體征量化評(píng)分 見圖1。A組和B組評(píng)分高于C組和D組。而且與A組比較，D組小鼠出現(xiàn)毛發(fā)干枯，畏寒倦臥，肛溫降低等腎陽(yáng)虛癥狀。

圖1 各組癥狀、體征量化評(píng)分趨勢(shì)圖

2.2 小鼠體質(zhì)量及肛溫比較 見表1。與A組比較，B、D組體質(zhì)量周平均增長(zhǎng)量、平均肛溫均降低（均P＜0.01）。與B組比較，D組體質(zhì)量周平均增長(zhǎng)量、平均肛溫均降低（P＜0.01或P＜0.05）。與C組比較，D組體質(zhì)量周平均增長(zhǎng)量、平均肛溫均低于降低（P＜0.01）。

表1 各組實(shí)驗(yàn)體質(zhì)量及肛溫比較（±s）

表1 各組實(shí)驗(yàn)體質(zhì)量及肛溫比較（±s）

與A組比較，*P＜0.01；與B組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與C組比較，#P＜0.01。下同。

組別 n 造模后第1日（g）造模后2周（g）周平均增長(zhǎng)量（g / w）平均肛溫（℃）A組 1 5 B組 1 5 C組 1 5 4 4 . 2 8 ± 3 . 7 1 4 7 . 4 9 ± 3 . 4 5 1 . 6 0 ± 0 . 8 8 3 7 . 0 8 ± 0 . 2 4 4 4 . 4 3 ± 3 . 3 8 4 3 . 4 0 ± 3 . 3 9 -0 . 5 1 ± 0 . 6 3* 3 6 . 4 4 ± 0 . 3 3*4 5 . 0 8 ± 1 . 7 2 4 8 . 3 4 ± 2 . 1 3 1 . 6 3 ± 0 . 2 6 3 6 . 9 6 ± 0 . 2 6 D組 1 5 4 6 . 2 2 ± 2 . 2 2 4 2 . 5 4 ± 3 . 0 6 -1 . 8 4 ± 0 . 6 3*△△# 3 6 . 0 4 ± 0 . 1 7*△#

2.3 小鼠血清ACTH、TSH及血漿cAMP、cGMP含量比較 見表2，表3。與A組比較，B、D組促腎上腺皮質(zhì)激素及促甲狀腺激素含量、cAMP、cAMP/cGMP降低（均P＜0.01）。與B組比較，C組促腎上腺皮質(zhì)激素及促甲狀腺激素含量降低 （均P＜0.01），cAMP、cAMP/ cGMP升高 （均P＜0.01）；D組TSH含量、cAMP降低（均P＜0.01），cAMP/cGMP升高（均P＜0.01）。與C組比較，D組促腎上腺皮質(zhì)激素及促甲狀腺激素含量、cAMP、cAMP/cGMP均降低（均P＜0.01）。

2.4 小鼠股骨、腰椎骨密度變化比較 見表4。與A組比較，C、D組股骨近端、腰椎骨密度均下降（均P＜0.01），B組腰椎骨密度下降（P＜0.01）。與B組比較，C、D組股骨近端、腰椎骨密度均下降 （P＜0.01或P＜0.05）。與C組比較，D組股骨近端、腰椎骨密度均下降（均P＜0.05）。

表2 各組血清ACTH及TSH含量比較（±s）

表2 各組血清ACTH及TSH含量比較（±s）

組 別 n A C T H（n g / L） T S H（m I U / L）A組 1 5 2 5 3 . 6 1 4 2 ± 2 5 . 7 0 9 6 3 . 5 5 4 9 ± 0 . 4 1 8 9 B組 1 5 1 7 6 . 7 5 6 6 ± 2 4 . 8 1 3 3* 2 . 1 5 5 9 ± 0 . 3 4 8 4*C組 1 5 2 3 7 . 9 1 1 0 ± 3 6 . 6 9 9 3△ 3 . 3 4 0 6 ± 0 . 2 0 7 9△D組 1 5 1 5 5 . 3 2 8 0 ± 2 2 . 9 3 1 1*# 1 . 6 8 3 0 ± 0 . 3 2 3 4*△#

表3 各組血清ACTH及TSH含量比較（±s）

表3 各組血清ACTH及TSH含量比較（±s）

組別 n c A M P / c G M P c A M P（n m o l / L）c G M P（n m o l / L）A組 1 5 5 . 5 9 ± 1 . 6 7 B組 1 5 3 . 7 7 ± 1 . 1 1*C組 1 5 5 . 6 1 ± 1 . 8 8△3 1 . 9 8 ± 3 . 7 1 6 . 0 6 ± 1 . 4 2 2 5 . 8 0 ± 3 . 5 3* 6 . 3 8 ± 1 . 7 1 3 2 . 8 4 ± 4 . 7 5△ 6 . 0 4 ± 1 . 6 4 D組 1 5 4 . 5 7 ± 1 . 6 3*△#2 3 . 8 0 ± 4 . 4 4*△# 6 . 5 5 ± 1 . 9 3

表4 各組股骨及腰椎骨密度比較（g/cm3，±s）

表4 各組股骨及腰椎骨密度比較（g/cm3，±s）

與A組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與B組比較，△△P＜0.01，△P＜0.05；與C組比較，#P＜0.05。下同。

組 別 n 股骨近端平均密度 腰2椎骨密度A組 1 5 1 0 . 0 2 ± 0 . 7 4 4 . 0 4 ± 0 . 2 1 B組 1 5 9 . 8 0 ± 0 . 6 8 3 . 8 6 ± 0 . 4 2*C組 1 5 8 . 0 2 ± 0 . 8 8**△ 3 . 3 5 ± 0 . 6 3**△D組 1 5 7 . 2 8 ± 0 . 4 6**△△# 3 . 1 5 ± 0 . 7 2**△△#

2.5 骨組織形態(tài)學(xué)改變比較 見表5。與A組比較，C、D組HE染色及骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析顯示骨小梁排列稀疏、變細(xì)，成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞數(shù)增多等（P＜0.01或P＜0.05），B組骨小梁面積變小，成骨細(xì)胞數(shù)增多（P＜0.05）。與B組比較，C、D組HE染色及骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析顯示骨小梁排列稀疏、變細(xì)，破骨細(xì)胞數(shù)增多等（P＜0.01或P＜0.05）。與C組比較，D組HE染色及骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析顯示骨小梁排列稀疏、變細(xì)，破骨細(xì)胞數(shù)增多等（P＜0.05）。

表5 各組小鼠股骨骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)比較（±s）

表5 各組小鼠股骨骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)比較（±s）

組別 n 骨小梁平均寬度（μ m）骨小梁面積（%）成骨細(xì)胞數(shù)（個(gè)/ 0 . 4 m m2）破骨細(xì)胞數(shù)（個(gè)/ 0 . 4 m m2）A組 1 5 B組 1 5 C組 1 5 0 . 2 5 ± 0 . 0 4 0 . 8 6 ± 0 . 1 6 7 . 4 9 ± 1 . 4 7 1 . 5 4 ± 0 . 6 8 0 . 2 3 ± 0 . 0 3 0 . 7 8 ± 0 . 3 3* 6 . 8 1 ± 1 . 9 8* 1 . 5 9 ± 0 . 7 8 0 . 2 0 ± 0 . 0 8*△ 0 . 6 5 ± 0 . 2 3**△ 7 . 7 5 ± 1 . 2 2*△△ 3 . 0 6 ± 1 . 5 6**△D組 1 5 0 . 1 9 ± 0 . 0 7**△△# 0 . 4 9 ± 0 . 1 7**△△# 7 . 6 2 ± 1 . 3 5*△△# 3 . 6 7 ± 1 . 4 5**△△#

3 討 論

病證結(jié)合動(dòng)物模型是在中醫(yī)學(xué)理論指導(dǎo)下，適當(dāng)結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)知識(shí)，分別或同時(shí)采用傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)病因復(fù)制證候動(dòng)物模型和采用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病因復(fù)制疾病動(dòng)物模型，使動(dòng)物模型同時(shí)具有疾病與證候特征［2］。該模型以疾病模型為基礎(chǔ)，具有較好的可靠性及穩(wěn)定性［4］。目前病證結(jié)合模型常用的構(gòu)建模式是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“疾病”模型復(fù)合中醫(yī)“證候”模型［5-6］。該類模式既注重中醫(yī)的思路，又注重現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)，具有較強(qiáng)的可操作性。故本實(shí)驗(yàn)將骨質(zhì)疏松癥模型與腎陽(yáng)虛模型復(fù)合以復(fù)制更符合中醫(yī)臨床要求的動(dòng)物模型。

體內(nèi)雌激素水平的降低是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生及發(fā)展的主要原因，骨代謝發(fā)生改變，骨組織形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)遭到破壞，最終導(dǎo)致骨生物力學(xué)性能下降及骨折發(fā)生［7-8］。Saville于1969年首先采用雌鼠雙側(cè)卵巢切除誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松模型來(lái)模擬該類骨質(zhì)疏松癥，目前該模型已成為標(biāo)準(zhǔn)化的公認(rèn)的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥經(jīng)典病理模型。本研究結(jié)果示，骨質(zhì)疏松組及骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛組模型均出現(xiàn)典型的骨質(zhì)疏松病理學(xué)征象：骨小梁排列稀疏，變細(xì)，數(shù)目減少，間距加寬，可見微骨折等；骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)能進(jìn)行骨組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的定量分析，為骨結(jié)構(gòu)、骨形成及骨吸收提供客觀數(shù)據(jù)［9］。本結(jié)果示，模型小鼠骨小梁平均寬度、骨小梁面積百分率有明顯下降，說(shuō)明骨量和骨的內(nèi)部結(jié)構(gòu)均都有一定程度的破壞。成骨細(xì)胞是骨形成的主要細(xì)胞，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)合成、分泌和礦化，而破骨細(xì)胞貼附在舊骨區(qū)域，分泌酸性物質(zhì)溶解骨礦質(zhì)，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì)，促進(jìn)骨吸收。本結(jié)果示，成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞均增多，表明骨組織處于高代謝狀態(tài)，即該類骨質(zhì)疏松為高轉(zhuǎn)換型。骨密度檢測(cè)能為骨質(zhì)疏松診斷提供重要的輔助信息，在本研究結(jié)果示，去骨質(zhì)疏松組及骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛組骨密度明顯降低。上述數(shù)據(jù)表明我們利用昆明小鼠去勢(shì)建立骨質(zhì)疏松癥模型取得成功。

腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型是最早建立的中醫(yī)證候動(dòng)物模型，自20世紀(jì)60年代初，鄺安堃教授等首次建立了“氫化考的松腎陽(yáng)虛”動(dòng)物模型以來(lái)，此后各種“腎陽(yáng)虛”動(dòng)物模型相繼建立，包括“恐傷腎”性、甲狀腺素性、腺嘌呤性、羥基脲性腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型等［10］，并被用于多種補(bǔ)腎助陽(yáng)方藥藥效的研究［11］。利用大劑量腎上腺皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型目前最常用，該類動(dòng)物表現(xiàn)出系列類似腎陽(yáng)虛癥狀，如拱背蜷曲、畏寒喜暖、肛溫降低、反應(yīng)遲鈍、呼吸深遲、毛發(fā)干枯、消瘦、尿液清長(zhǎng)等。下丘腦-垂體-靶腺軸的功能改變是腎陽(yáng)虛的主要病理變化之一［12-14］。有學(xué)者利用分子生物學(xué)技術(shù)RT-PCR化學(xué)發(fā)光定量法研究腎陽(yáng)虛大鼠表明其HPA軸受抑，且下丘腦室旁核CRH mRNA的表達(dá)量明顯比正常對(duì)照組減少［15］。垂體在神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中具有重要的作用，腎陽(yáng)虛大鼠垂體ACTH細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，線粒體空化，ACTH合成分泌受抑［16］，ACTH mRNA表達(dá)下調(diào)［17］。甲狀腺功能生理范圍內(nèi)或病理性降低是腎陽(yáng)虛的主要病理之一。有研究報(bào)道，以醋酸考的松制作的腎陽(yáng)虛模型，其血中T3、T4濃度和TSH濃度明顯降低［18］，且甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體擴(kuò)張、線粒體空化等［19］。本研究結(jié)果示，證候模型組與骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛組小鼠血清ACTH、TSH含量均降低，與先前激素性腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型研究結(jié)果類似。同時(shí)也證實(shí)骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛組小鼠血清ACTH、TSH含量比單純腎陽(yáng)虛模型小鼠降得更低，由此我們推測(cè)下丘腦-垂體-靶腺軸可能是“骨病及腎”與“腎病及骨”的中間調(diào)控通路，通過(guò)反饋機(jī)制，以使“腎”與“骨”達(dá)到相對(duì)平衡狀態(tài)。環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）是細(xì)胞功能的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)，cAMP、cGMP的平衡失調(diào)，會(huì)引起細(xì)胞功能發(fā)生明顯變化。先前研究表明，cAMP降低、cGMP升高及cAMP/cGMP降低為陽(yáng)虛，是目前反映陰陽(yáng)虛較特異的指標(biāo)之一［10］。本研究結(jié)果示，腎陽(yáng)虛組及骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛組小鼠血漿cAMP及cAMP/cGMP比對(duì)照組明顯降低，與cAMP降低為陽(yáng)的陰陽(yáng)學(xué)說(shuō)相一致。由上述的癥狀體征結(jié)合實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)表明復(fù)制腎陽(yáng)虛小鼠模型成功。

綜上，通過(guò)將去勢(shì)小鼠骨質(zhì)疏松模型與氫化可的松小鼠腎陽(yáng)虛模型有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，筆者成功研制了腎陽(yáng)虛證骨質(zhì)疏松模型。造模后動(dòng)物出現(xiàn)了腎陽(yáng)虛證的特征如畏寒倦臥、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、體質(zhì)量下降、HPA軸功能紊亂，同時(shí)出現(xiàn)了骨質(zhì)疏松組織病理學(xué)改變?nèi)绻切×号帕邢∈?，變?xì)，微骨折等，成功的建立了骨質(zhì)疏松腎陽(yáng)虛模型。

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Study on Osteoporosis Mice Model with Syndrome of Deficiency of Kidney-Yang

CHEN Jianmo，ZHANG Shengjun，XIA Bingjiang. Shaoxing Hospital of TCM，Zhejiang Province，Zhengjiang，Shaoxing 312000，China

Objective：To establish the osteoporosis model with syndrome of deficiency of Kidney-Yang.Methods：Female Kunming mice were randomly divided into control group（group A），syndrome group（group B），disease group（group C），disease with syndrome group（group D）.The model was established by injecting hydrocortisone and resecting bilateral ovaries.Signs and symptoms，level of adrenocorticotropic hormone（ACTH），thyroid stimulating hormone（TSH），cyclic adenosine monophosphate（cAMP），cyclic guanosine phosphate（cGMP），bone density bone，and tissue morphology were observed to evaluate the model.Results：Compared with group A，mice in model group appeared obvious kidney-Yang deficiency symptoms，including hair dry，chill and frail state，low anal temperature.The levels of ACTH and TSH decreased（P＜0.01），and the ratio of cAMP/cGMP decreased（P＜0.01）.Bone density of lumbar vertebra and femur decreased significantly（P＜0.01）.HE staining revealed osteoporosis of mice in group D.Conclusion：The model of osteoporosis with type of deficiency of Kidney-Yang can be established successfully by injecting hydrocortisone and resecting bilateral ovaries.

Osteoporosis；Deficiency of Kidney-Yang；Integration of disease and syndrome；Animal model

R285.5

A

1004-745X（2015）02-0201-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.02.005

2014-11-27）

浙江省中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目（2011ZB153）

△通信作者（電子郵箱：xiabj2006@sina.com）