羅金萍，王若愚，許培培，戴 波，余軍林，沈定文

(湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 437100)

樹突狀細(xì)胞(DC)是目前已知的體內(nèi)功能最強的一種專職抗原提呈細(xì)胞(APC)，能在體內(nèi)、外直接活化初始T 淋巴細(xì)胞［1］。目前基因轉(zhuǎn)染DC已經(jīng)廣泛應(yīng)用于抗感染、抗腫瘤、移植免疫和自身免疫性疾病等方面。過去的研究證實，多種腫瘤抗原、細(xì)胞因子，以及血吸蟲疫苗候選抗原，如Sj26 和Sj23 等靶抗原編碼基因轉(zhuǎn)染DC 后均能促進DC 成熟，同時增強DC 的生物學(xué)活性［2～7］。本實驗利用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測日本血吸蟲脂肪酸結(jié)合蛋白(Sj14)編碼基因轉(zhuǎn)染對DC 功能的影響，為探討利用DC 混合多價核酸疫苗誘導(dǎo)抗血吸蟲感染保護性免疫作用打下基礎(chǔ)，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 DC 細(xì)胞株 DC 細(xì)胞株MTSC4 由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部免疫學(xué)系陳慰峰教授惠贈，常規(guī)方法傳代培養(yǎng)。

1.2 Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染DC 按照LipofectamineTM2000 試劑盒(美國Invitrogen 公司)使用說明書，參照沈定文的方法［6］分別將重組質(zhì)粒pcDNA3-Sj14、空載質(zhì)粒pcDNA3 轉(zhuǎn)染至DC?；蜣D(zhuǎn)染后以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、免疫印漬(Western blot)和間接熒光抗體試驗(IFA)檢測Sj14 在DC 中的表達。

1.3 FCM 檢測DC 攝取抗原能力 參照沈定文的方法［6］采用FCM 分別檢測pcDNA3-Sj14 基因轉(zhuǎn)染的DC、pcDNA3 轉(zhuǎn)染的DC 和未轉(zhuǎn)染的DC 攝取異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記羊抗鼠IgG(北京中山生物技術(shù)有限公司)的熒光強度。

1.4 MLR 檢測DC 對同種異體T 淋巴細(xì)胞的刺激作用 以正常BALB/c 小鼠脾臟淋巴細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞，參照沈定文的方法［6］采用MLR 分別檢測pcDNA3-Sj14 基因轉(zhuǎn)染的DC、pcDNA3 轉(zhuǎn)染的DC 和未轉(zhuǎn)染的DC 對同種異體T 淋巴細(xì)胞的A492 值，按下面的公式計算刺激指數(shù)(SI)。SI=實驗組A492 值/對照組A492 值。

2 結(jié)果

2.1 DC 攝取抗原能力 pcDNA3-Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染的DC 攝取FITC 標(biāo)記羊抗鼠IgG 的熒光強度顯著低于pcDNA3 轉(zhuǎn)染的DC 和未轉(zhuǎn)染的DC(P＜0.01)，pcDNA3-Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染的DC 攝取抗原的能力明顯降低，表明Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染能促進DC 成熟，見圖1。

圖1 Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染的DC 攝取抗原的能力

2.2 DC 對同種異體T 淋巴細(xì)胞的刺激作用pcDNA3-Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染的DC 對同種異體T淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)明顯高于pcDNA3 轉(zhuǎn)染的DC 和未轉(zhuǎn)染的DC(P ＜0.01)，表明pcDNA3-Sj14編碼基因轉(zhuǎn)染可增強DC 的生物學(xué)活性，見圖2。

圖2 Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染的DC 對同種異體T 淋巴細(xì)胞的刺激作用

3 討論

研究證實，DC 未成熟時具有極強的抗原內(nèi)吞和加工處理能力，當(dāng)DC 攝取抗原或受到某些因素的刺激后，便可以分化成熟，成熟DC 攝取抗原的能力降低，其抗原提呈能力增強［8］。本實驗結(jié)果Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染的DC 攝取FITC 標(biāo)記羊抗鼠IgG 的熒光強度顯著低于空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的DC 和未轉(zhuǎn)染的DC，表明Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染DC 后促進了DC 的成熟。

DC 在免疫應(yīng)答中具有獨特作用，能在體內(nèi)外激發(fā)T 細(xì)胞增殖，促進初始CD4+T 細(xì)胞向Th1 細(xì)胞分化［1］。其可能的機制:活化的DC 一方面形態(tài)發(fā)生變化，另一方面高表達豐富的協(xié)同刺激分子和黏附分子如CD1a、CD40、CD80、CD86、MHCⅠ、Ⅱ類分子，有利于DC 與T 淋巴細(xì)胞的接觸，增強DC 對T 細(xì)胞的促增殖作用［8］。本實驗結(jié)果Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染的DC 對T 淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)明顯高于空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的DC 和未轉(zhuǎn)染的DC，表明Sj14 編碼基因轉(zhuǎn)染增強了DC 的生物學(xué)活性。

本研究及我們以前的相關(guān)研究結(jié)果表明，血吸蟲疫苗候選抗原Sj14、Sj26、Sj23 的編碼基因轉(zhuǎn)染DC 后均能活化DC，并且增強DC 的生物學(xué)活性，下一步我們將探討利用DC 混合多價核酸疫苗誘導(dǎo)抗日本血吸蟲感染保護性免疫作用，為血吸蟲疫苗研究打下堅實的基礎(chǔ)。

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