聶 晶， 苗 水， 李雯婷， 毛秀紅， 季 申*

（1.上海醫(yī)藥工業(yè)研究院，上海200040；2.上海食品藥品檢驗(yàn)所，上海201203）

[質(zhì)量]

黃芪浸膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

聶 晶1，2， 苗 水2， 李雯婷2， 毛秀紅2， 季 申2*

（1.上海醫(yī)藥工業(yè)研究院，上海200040；2.上海食品藥品檢驗(yàn)所，上海201203）

目的建立黃芪浸膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜 （TLC）法對(duì)黃芪浸膏中的黃芪甲苷進(jìn)行定性鑒別，應(yīng)用HPLC法對(duì)黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷進(jìn)行定量測(cè)定。結(jié)果薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度良好；黃芪甲苷及毛蕊異黃酮葡萄糖苷在測(cè)定范圍內(nèi)均表現(xiàn)出良好的線性 （r＞0.999），方法的平均回收率在97.5%～100.5%之間。結(jié)論定量的方法在Pheomenex Luna C18（0.46 cm×25 cm，5μm），Agilent Eclipse XDB-C18（0.46 cm×25 cm，5μm），Waters XBridgeShieldrp18（0.46 cm×15 cm，5μm）和Welch Xtimate C18（0.46 cm×15 cm，5μm）4根色譜柱具有良好的精密度和重現(xiàn)性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

黃芪浸膏；黃芪甲苷；毛蕊異黃酮葡萄糖苷；薄層色譜；高效液相色譜

藥用黃芪為多年生草本植物豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.Var，mongholicus（Bge.）Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，性溫味甘，具有補(bǔ)氣固表、斂汗固脫、托瘡生肌、利水消腫之功效［1-5］。腦絡(luò)通膠囊收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑19冊(cè) （標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：WS3-B-3667-98）［6］，由黃芪浸膏、丹參浸膏、川芎浸膏等藥味組成，主要用于補(bǔ)氣活血，通經(jīng)活絡(luò)［7-8］；其中黃芪浸膏是處方中的主要藥味，是由黃芪經(jīng)水提而制成的黃棕色至黑褐色的粉末或塊狀物。衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)對(duì)腦絡(luò)通膠囊中黃芪浸膏僅規(guī)定了制法［6］，缺少具體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法，不能有效保證投料用黃芪浸膏的質(zhì)量。黃芪化學(xué)成分眾多，其中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)細(xì)胞免疫功能具有促進(jìn)作用，是目前質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制較多的指標(biāo)性成分［9］?，F(xiàn)有文獻(xiàn)中關(guān)于這兩種成分定量測(cè)定研究較多，其測(cè)定方法主要有高效液相色譜法、薄層色譜掃描法，鑒別方法一般采用傳統(tǒng)的薄層分析方法［10-15］。《中國(guó)藥典》2010年版對(duì)黃芪質(zhì)量進(jìn)行了全面的控制，采用對(duì)照藥材和黃芪甲苷對(duì)照品制訂了薄層鑒別方法，采用HPLC法對(duì)黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷進(jìn)行了含量測(cè)定，此外還規(guī)定了水分、灰分等檢查項(xiàng)［16］。為了更好地保障腦絡(luò)通膠囊的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)參照黃芪的質(zhì)量控制方法，對(duì)腦絡(luò)通膠囊中的黃芪浸膏進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，制訂了黃芪浸膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。相較于 《中國(guó)藥典》2010年版黃芪質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本方法新增訂了特征指紋圖譜質(zhì)量控制方法［17-19］，更好地控制了黃芪浸膏中黃酮醇苷類(lèi)化合物。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（Varian 385-LC）；Agilent1260型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），DAD檢測(cè)器；Sartorius BS 2202S電子天平。

1.2 藥品及試劑 黃芪甲苷對(duì)照品 （批號(hào)0781-200210，供含量測(cè)定用）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品 （批號(hào)877-200001，供含量測(cè)定用）、黃芪對(duì)照藥材 （批號(hào)120974-201311，供薄層鑒別用）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素供特征圖譜定位用；乙腈為色譜純（MERCK公司）；其余均為分析純，由中國(guó)醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別 （黃芪浸膏的TLC鑒別） 參照《中國(guó)藥典》2010年版 “黃芪” 項(xiàng)下的規(guī)定［16］，取黃芪對(duì)照藥材2 g，置圓底燒瓶中，加入80%甲醇50 mL，加熱回流2 h，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液30 mL洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法 （《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取 “2.2.3”項(xiàng)下的供試品溶液及上述對(duì)照藥材、對(duì)照品溶液各5～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水 （13∶7∶2）的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果顯示供試品色譜中，在與黃芪對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的主斑點(diǎn)，紫外光燈 （365 nm）下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；與黃芪甲苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈 （365 nm）下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果表明TLC分離效果良好 （見(jiàn)圖1）。

圖1 黃芪提取物的薄層色譜圖(T:20℃RH:50%)Fig.1 TLC of Astragalus extract(T:20℃RH:50%)

2.2 黃芪甲苷測(cè)定

2.2.1 色譜條件 Pheomenex Luna C18色譜柱（0.46 cm×25 cm，5μm）；以乙腈-水（32∶68）為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；柱溫30°C；體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量為對(duì)照品溶液5μL，15 μL，供試品溶液20μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含500μg的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品約1.0 g，精密稱(chēng)定，置于圓底燒瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流2 h，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，回收溶劑至干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20 mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的氨試液充分洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 測(cè)定方法 精密吸取對(duì)照品溶液5μL、15 μL，供試品溶液10～20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2。

圖2 黃芪提取物中黃芪甲苷對(duì)照品 (A)、供試品 (B)、空白樣品 (C)測(cè)定的高效液相色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram s of astragaloside IV(A),sam p le(B),and blank sam p le(C)

2.2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取對(duì)照品溶液1、2、5、10、15、20μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以ln進(jìn)樣量 （μg）為橫坐標(biāo) （X），ln峰面積為縱坐標(biāo) （Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為Y=1.722 7X+2.155 6（r= 0.999 6）。結(jié)果表明，黃芪甲苷在 0.544μg～10.880μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)與峰面積的對(duì)數(shù)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算得RSD為2.3%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品 （批號(hào)13030）6份，分別按 “2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法處理后進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得黃芪甲苷的RSD為3.6%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將 “2.2.7”項(xiàng)下第一份供試品溶液分別于0、4、8、12、16、20、24 h進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算得對(duì)照品溶液和供試品溶液RSD分別為3.0%和2.6%。結(jié)果表明對(duì)照品溶液和供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定含有量的供試品 （廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號(hào)13030，含黃芪甲苷2.90 mg/g）0.5 g，精密稱(chēng)定，一式9份，置圓底燒瓶中，再按 “2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法處理，以3份為一組，各組分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液 （質(zhì)量濃度為3 mg/mL）0.4 m L、0.5 mL、0.6 mL，分別制得低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度水平的加樣供試品溶液各3份，進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算得平均回收率為99.7%，RSD為1.7% （n=9）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)Tab.1 Results of recovery tests for astragaloside IV(n=9)

2.3 毛蕊異黃酮葡萄糖苷測(cè)定

2.3.1 色譜條件 ZOBAX C18色譜柱（Agilent公司，0.46 cm×15 cm，5μm）；以乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，梯度洗脫 （0～25 min，5%→35%A，25～30 min，35%→80%A，30～35 min，80%A）；柱溫30°C；體積流量1.0 m L/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm；進(jìn)樣量5μL。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品約1.0 g，精密稱(chēng)定，置于圓底燒瓶中，精密加入 50%甲醇50 m L，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 測(cè)定方法 精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見(jiàn)圖3。

圖3 黃芪提取物中毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品 (A)、供試品 (B)、空白樣品 (C)測(cè)定的高效液相色譜圖Fig.3 HPLC chromatogram s of calycosin-7-glucoside(A),test sam p le(B),and blank sam p le(C)

2.3.5 線性關(guān)系的考察 取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品適量，加甲醇分別制成質(zhì)量濃度為2.507 5 μg/mL、5.015μg/mL、10.03μg/mL、20.06 μg/mL、50.15μg/mL、100.30μg/mL、200.60 μg/mL的系列溶液，精密吸取系列溶液各5μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以質(zhì)量濃度 （μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為Y=18.254 5X+1.629 7（r=0.999 8）。結(jié)果表明，毛蕊異黃酮葡萄糖苷在2.507 5～200.60μg/mL范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積的對(duì)數(shù)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品溶液 （含毛蕊異黃酮葡萄糖苷20.06 μg/mL）5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算得RSD為0.3%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品 （批號(hào)：13030）6份，分別按 “2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法處理后進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得毛蕊異黃酮葡萄糖苷含有量的RSD為1.8%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將 “2.3.7”項(xiàng)下第一份供試品溶液分別于0、2、4、8、12、16、20、24 h進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算得對(duì)照品溶液和供試品溶液RSD均為1.3%。結(jié)果表明毛蕊異黃酮葡萄糖苷在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定含有量的供試品 （廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號(hào)13030，含毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.84 mg/g）0.5 g，精密稱(chēng)定，一式9份，置圓底燒瓶中，再按“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法處理，以3份為一組，各組分別精密加入毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為1.003 mg/m L）0.4 m L、0.5mL、0.6mL，分別制得低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度水平的加樣供試品溶液各3份，進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算得平均回收率為98.0%，RSD為1.1% （n=9）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 毛蕊異黃酮葡萄糖苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=9)Tab.2 Results of recovery tests for calycosin-7-glucoside (n=9)

2.4 特征圖譜 記錄 “2.3.4”項(xiàng)下35 min內(nèi)的色譜圖。供試品特征圖譜中應(yīng)呈現(xiàn)4個(gè)特征峰，與毛蕊異黃酮葡萄糖苷參照物對(duì)應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間，應(yīng)在規(guī)定值的± 10%范圍之內(nèi)。相對(duì)保留時(shí)間規(guī)定值為：1.35（峰1）、1.54（峰2）和1.72（峰3）。見(jiàn)圖4。

2.4.1 色譜條件 同“2.3.1”項(xiàng)。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含20μg的對(duì)照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備 取 “2.3.3”項(xiàng)下的供試品溶液，即得。

圖4 HPLC對(duì)照特征圖譜Fig.4 HPLC matched chromatography for the reference fingerprint

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取 “2.3.7”項(xiàng)下重復(fù)性考察的樣品，進(jìn)樣分析，記錄特征圖譜，結(jié)果表明各供試品溶液特征圖譜中均呈現(xiàn)4個(gè)特征峰，以毛蕊異黃酮葡萄糖苷為參照物S峰，計(jì)算各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間，結(jié)果表明各特征峰均在規(guī)定值的±10%范圍之內(nèi)。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液 （批號(hào)13030）分別于0、2、7、9、12、16、20、25 h進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算得毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素的RSD分別為1.8%、2.9%、0.5%和0.5%。結(jié)果表明供試品溶液在25 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.6 耐用性試驗(yàn) 由于不同廠家不同牌號(hào)的色譜柱存在填料及性能上的差異，為考察擬訂方法的可行性及通用性，對(duì)（1）Pheomenex Luna C18（Pheomenex，0.46 cm×25 cm，5μm）（2）Agilent Eclipse XDB-C18（Agilent，0.46 cm×25 cm，5 μm）（3）Waters XBridgeShieldrp18（Waters，0.46 cm×15 cm，5μm）（4）Welch Xtimate C18（月旭，0.46 cm×15 cm，5μm）4根色譜柱進(jìn)行了考察，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文規(guī)定值的偏差。結(jié)果表明，不同色譜柱得到的供試品特征色譜基本一致，相對(duì)保留時(shí)間與規(guī)定偏差均小于10%，表明擬定方法通用性較廣。

2.4.7 特征峰保留時(shí)間測(cè)定 取8批供試品溶液進(jìn)樣分析，記錄特征峰的保留時(shí)間，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間及平均值，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.5 樣品測(cè)定 取8批樣品，按供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

3.1 特征圖譜 黃芪中主要含有氨基酸、黃芪皂苷類(lèi)與黃酮醇苷類(lèi)等化合物，由于氨基酸測(cè)定方法需要衍生，步驟繁瑣、重復(fù)性差，黃芪皂苷類(lèi)化合物測(cè)定需要采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、靈敏度低，反應(yīng)的信息量少，故上述二類(lèi)化合物暫不考慮訂入特征圖譜，故本研究重點(diǎn)在于黃酮醇苷類(lèi)化合物的特征圖譜研究，主要針對(duì)報(bào)道中的幾種化合物，建立特征圖譜。除文中提到的幾種化合物外，8批樣品在4～10 min保留時(shí)間內(nèi)有部分共有峰，但此類(lèi)化合物由于極性較低，在不同品牌色譜柱上峰形不一致，保留時(shí)間差別也較大，另外此部分色譜峰峰面積較小，考慮暫不將此類(lèi)色譜峰訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有待進(jìn)行進(jìn)一步的物質(zhì)基礎(chǔ)研究，明確物質(zhì)基礎(chǔ)后，再行將相關(guān)化合物訂入特征圖譜。

表3 特征圖譜中4種成分相對(duì)保留時(shí)間Tab.3 Relative retention time of 4 components in characteristic spectria

表4 樣品測(cè)定結(jié)果Tab.4 Test results of sam p les

3.2 黃芪甲苷測(cè)定研究

3.2.1 黃芪甲苷提取方式的考察 本實(shí)驗(yàn)考察了50%甲醇、甲醇超聲30 min或加熱回流30 min時(shí)的提取效率，結(jié)果表明采用不同溶劑時(shí)，加熱回流的提取效率均高于超聲提取，故選擇回流提取作為供試品的提取方式。

3.2.2 黃芪甲苷提取溶劑的考察 本實(shí)驗(yàn)考察了采用水、30%甲醇、50%甲醇、80%甲醇及甲醇等不同溶劑的回流提取，結(jié)果表明以80%甲醇作為提取溶劑時(shí)，黃芪甲苷的提取效率最高，故選擇80%甲醇作為提取溶劑。

3.2.3 黃芪甲苷回流時(shí)間的考察 本實(shí)驗(yàn)考察了0.5、1、2、3、4 h不同加熱回流時(shí)間下，黃芪甲苷的提取效率。結(jié)果表明隨回流時(shí)間的延長(zhǎng)，黃芪甲苷的提取效率呈增加趨勢(shì)，增大至一定數(shù)值后基本穩(wěn)定，回流2 h可基本提取完全，故確定加熱回流時(shí)間為2 h。

3.2.4 黃芪甲苷提取和洗滌次數(shù)的考察 本實(shí)驗(yàn)考察了正丁醇提取次數(shù)及氨試液洗滌次數(shù)對(duì)測(cè)定的影響，結(jié)果表明采用水飽和正丁醇提取4次、氨試液洗滌2次時(shí)，即可達(dá)到理想的提取凈化效果。

3.3 毛蕊異黃酮葡萄糖苷測(cè)定研究

3.3.1 毛蕊異黃酮葡萄糖苷提取溶劑的考察 本實(shí)驗(yàn)考察了采用水、30%甲醇、50%甲醇、80%甲醇等不同溶劑的回流提取，結(jié)果表明以50%甲醇作為提取溶劑時(shí)，毛蕊異黃酮葡萄糖苷的提取效率最高，故選擇50%甲醇作為提取溶劑。

3.3.2 毛蕊異黃酮葡萄糖苷回流時(shí)間的考察 本實(shí)驗(yàn)考察了0.5、1、1.5、2 h不同加熱回流時(shí)間下，毛蕊異黃酮葡萄糖苷的提取效率。結(jié)果表明隨回流1 h即可完全提取出毛蕊異黃酮葡萄糖苷，故確定提取時(shí)間為1 h。

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Quality standard for Astragali Radix aqueous extract

NIE Jing1，2， MIAO Shui2， LIWen-ting2， MAO Xiu-hong2， JIShen2*
（1.Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry，Shanghai200040，China；2.Shanghai Institute for Food and Drug Control，Shanghai 201203，China）

AIMTo establish the quality standard for Astragali Radix aqueous extract.M ETHODSTLC was adopted for the qualitative identification of astragaloside IV.HPLCwas used to determine the contents of astragaloside IV and calycosin-7-glucoside.RESULTSTLC spotswere clear and well separated without interference. The compounds showed a good linearity（r＞0.999）in a determination range.The average recovery was between 97.5%-100.5%.CONCLUSIONThe method can repeat itself on four columns，including Pheomenex Luna C18（0.46 cm×25 cm，5μm），Agilent Eclipse XDB-C18（0.46 cm×25 cm，5μm），Waters XBridgeShieldrp18（0.46 cm×15 cm，5μm），and Welch Xtimate C18（0.46 cm×15 cm，5μm）with good precision and accuracy.

Astragali Radix aqueous extract；astragaloside IV；calycosin-7-glucoside；TLC；HPLC

R927.2

：A

：1001-1528（2015）07-1471-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.07.017

2015-02-09

聶 晶（1989—），女，碩士生。E-mail：jingxin1205@126.com

*通信作者：季 申 （1968—），女，博士生導(dǎo)師，從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及中藥安全性研究。Tel：（021）50798196，E-mail：jishen2013 @163.com