張鵬，包磊，蔡紅光，楊惠英，李美平，戈文舜

（紹興市婦幼保健院，浙江 紹興312000）

微波固定在病理制片中的應(yīng)用

張鵬，包磊，蔡紅光，楊惠英，李美平，戈文舜

（紹興市婦幼保健院，浙江 紹興312000）

目的探討微波固定在常規(guī)病理切片及免疫組化制片工作中的效果。方法將30例不同類型的組織塊隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組用微波固定，對(duì)照組用10%福爾馬林液固定，行常規(guī)及免疫組化制片，觀察制片時(shí)間及制片質(zhì)量。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組的常規(guī)制片效果及免疫組化制片效果均與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但大大縮短了固定時(shí)間。結(jié)論以微波技術(shù)進(jìn)行固定是常規(guī)病理切片及免疫組化制片較實(shí)用的固定方法。

病理制片；固定；微波；生理鹽水；福爾馬林；免疫組化

在病理制片工作中，固定是整個(gè)制片過程中的第一步，也是最關(guān)鍵的一步，是制片質(zhì)量優(yōu)良與否的基礎(chǔ)。如固定不良，在以后的制片階段無法補(bǔ)救。

因此，制片質(zhì)量的優(yōu)劣首先取決于最初固定的適當(dāng)與否。經(jīng)過長期實(shí)踐，本文對(duì)常規(guī)及免疫組化制片的固定方式進(jìn)行改良，并與傳統(tǒng)的固定方式相比較，以探討病理制片的經(jīng)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1材料 選擇紹興市婦幼保健院2013年手術(shù)切除的子宮、乳腺、卵巢新鮮標(biāo)本共計(jì)30例，每例各取兩塊相同部位的組織，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各30塊，每組共30個(gè)組織塊制片。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)儀器S551松下微波爐，德國原裝Leica RM2235切片機(jī)，Shandon Excelsior全自動(dòng)密閉式脫水機(jī)，塑料脫水籃 （每層可容納74個(gè)包埋盒），塑料包埋盒，醫(yī)用生理鹽水，一次性紙杯。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)組：將組織取材為1cm× 1cm×（0.3~0.4）cm大小，投入裝有0.9%醫(yī)用生理鹽水的一次性紙杯中，劑量50mL，置S551松下微波爐內(nèi)中火定時(shí)120秒[1]，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋、切片、染色后制成切片。對(duì)照組：取與實(shí)驗(yàn)組相同大小的組織塊，以10%中性福爾馬林為固定液，固定時(shí)間為4~6小時(shí)，與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)進(jìn)行脫水、浸蠟及切片、染色，所有切片均由本科副主任醫(yī)師以上人員審閱。

1.2.3評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) （1）組織結(jié)構(gòu)清晰：指切片影像上的各部細(xì)節(jié)及其結(jié)構(gòu)的清晰程度；（2）染色鮮艷：指切片染色鮮明，透亮，色彩靚麗，紅藍(lán)對(duì)比強(qiáng)烈，胞核清晰；（3）染色均勻：指免疫組化切片細(xì)胞的陽性程度相對(duì)一致，無深淺不一；（4）定位準(zhǔn)確：指不同抗體的陽性部位特異性強(qiáng)，能準(zhǔn)確定位于相應(yīng)的細(xì)胞膜、細(xì)胞核和細(xì)胞漿；（5）背景清晰：指免疫組化切片無非特異性著色。免疫組化制片效果反應(yīng)強(qiáng)度（-）：鏡下陽性細(xì)胞＜5%；（+）：鏡下陽性細(xì)胞占5%~25%；（++）：鏡下陽性細(xì)胞占25%~50%；（+++）：鏡下陽性細(xì)胞＞50%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，兩種固定方法對(duì)常規(guī)切片、免疫組化的鏡檢效果采用Fisher確切概率法；兩種固定方法對(duì)免疫組化反應(yīng)強(qiáng)度的影響采用非參數(shù)檢驗(yàn)中的秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1制片效果 組織結(jié)構(gòu)和染色方面兩組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），詳見表1。

2.2免疫組化制片效果 兩組對(duì)所有樣本染色均勻、定位準(zhǔn)確、背景清晰度以及反應(yīng)強(qiáng)度均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05），詳見表2。

3 討論

微波作為一種病理學(xué)技術(shù)輔助手段，已廣泛應(yīng)用于常規(guī)制片、免疫組化等日常工作中。其原理為利用微波產(chǎn)生的超高速震動(dòng)及穿透效應(yīng)，提高組織內(nèi)分子與溶劑分子的運(yùn)動(dòng)速度，加速組織中蛋白質(zhì)凝固，以物理的方法使組織細(xì)胞固定、硬化，從而保持組織內(nèi)生物活性物質(zhì)及組織細(xì)胞的原有結(jié)構(gòu)。

本文采用微波固定和福爾馬林固定，兩種方法均能順利切片，切片完整，無斷裂、破碎現(xiàn)象。兩組切片鏡下所見各種組織細(xì)胞形態(tài)完好，結(jié)構(gòu)清晰，染色鮮艷，核漿比明顯，染色質(zhì)均清晰可見。免疫組化實(shí)驗(yàn)中，兩種固定方法也均表現(xiàn)較好，染色均勻、定位準(zhǔn)確、背景清晰，反應(yīng)強(qiáng)度相仿，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

但微波固定只需要微波爐和生理鹽水結(jié)合使用，減少了其它固定液對(duì)人體的有害刺激，經(jīng)濟(jì)環(huán)保。在固定效果方面并不遜色于福爾馬林等常用固定液[2]，具有核膜清晰，染色質(zhì)均勻等特點(diǎn)，且不需要更新染色程序和制片方法，更不會(huì)引起組織收縮。醫(yī)用生理鹽水能夠較好地保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)，不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成傷害，且具有一定的滲透壓。在其作用下，組織細(xì)胞蛋白質(zhì)得到沉淀性固定，同時(shí)又不影響細(xì)胞形態(tài)，使切片質(zhì)量得到了較大的提高。在固定時(shí)間上，對(duì)照組固定需要4~6小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組僅需120秒，在保證制片質(zhì)量的同時(shí)大大縮短了固定時(shí)間，提高了日常工作效率。

當(dāng)前免疫組化技術(shù)已經(jīng)成為病理診斷不可或缺的輔助工具，微波快速固定可以獲得與常規(guī)福爾馬林固定相似的免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)量，同時(shí)在染色、定位、背景清晰度等方面也與常規(guī)切片有較好地一致性。而在陽性反應(yīng)強(qiáng)度方面，微波固定的組織切片獲得了更好的實(shí)驗(yàn)效果，這可能是由于微波固定的組織促使標(biāo)本內(nèi)某些基團(tuán)的暴露，又或是提高了固定劑的媒染作用，使組織細(xì)胞與染液的親和力增大而產(chǎn)生了較強(qiáng)的染色反應(yīng)。

以往類似報(bào)道微波設(shè)備往往以醫(yī)用微波儀為主[3-5]，但其采購手續(xù)繁瑣、費(fèi)用高昂，普通基層實(shí)驗(yàn)室難以配備，本實(shí)驗(yàn)只需普通家用微波爐，價(jià)格低廉，購置方便，且實(shí)驗(yàn)效果與醫(yī)用微波儀相同，具有較大的實(shí)用意義。

[1]王新成，李亞魯，柳雅玲，等.單純微波固定在組織制片中的應(yīng)用.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2005，21（2）：203

[2]王立東，孫予，郭花芹.微波固定組織與福爾馬林固定組織的比較.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，1992，8（1）：52

[3]劉亞平，姜小軍.微波無水乙醇雙重固定在組織冰凍切片中的應(yīng)用.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，1995，17（6）：363

[4]熊正文，范東升，李春光，等.微波二次固定提高腫瘤組織冰凍切片及蘇木素-伊紅染色質(zhì)量的研究.解剖學(xué)雜志，1998，21（5）：474

[5]熊正文，李春光，商磊巖，等.微波輔助組織塊預(yù)固定在提高冰凍切片質(zhì)量中的作用.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，1998，14（1）：100