王建剛

膠體金法檢測(cè)糞便隱血試驗(yàn)假陰性的原因與應(yīng)對(duì)方法的探討

王建剛

糞便隱血試驗(yàn)是檢測(cè)消化道出現(xiàn)最常用的初篩方法。膠體金法是目前應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)糞便隱血試驗(yàn)的方法, 其靈敏度高且特異性好。但因其反應(yīng)原理與患者樣本的復(fù)雜性會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果, 分析產(chǎn)生的原因并實(shí)施應(yīng)對(duì)方法, 可以有效的完善糞便隱血試驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)量控制, 為臨床提供準(zhǔn)確的結(jié)果。

糞便隱血；膠體金法；假陰性

糞便隱血試驗(yàn)是臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目中最常用的項(xiàng)目, 是消化道出血檢查項(xiàng)目中最簡(jiǎn)便與經(jīng)濟(jì)的初篩試驗(yàn), 在診斷消化道腫瘤時(shí), 往往可以給予臨床早期提示。糞便隱血試驗(yàn)的方法常用的有化學(xué)法與免疫法。傳統(tǒng)的化學(xué)法簡(jiǎn)單易行, 但受缺乏特異性、干擾因素多、假陽(yáng)性率高等方面的限制, 最近幾年免疫學(xué)方法已經(jīng)獲得較為廣泛的應(yīng)用。免疫學(xué)方法具體有膠體金標(biāo)記夾心免疫檢驗(yàn)法、反向間接血凝法、放射免疫擴(kuò)散法、膠乳免疫化學(xué)凝聚法、免疫斑點(diǎn)法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)免疫單抗法等幾種類(lèi)型, 這些類(lèi)型的試驗(yàn)主要分成抗人紅細(xì)胞基質(zhì)、抗人血紅蛋白等兩種不同的抗體, 雙抗體夾心膠體金顯色技術(shù)通過(guò)多克隆以及單克隆等方式, 能夠采取試紙條一步法將便隱血測(cè)出, 具有快速、簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì), 不管是對(duì)胃液、尿液或者是糞便等標(biāo)本的檢測(cè), 其特異性以及靈敏度均相對(duì)較高, 且不受飲食的影響, 已逐漸取代化學(xué)法成為目前檢測(cè)糞便隱血的主要方法［1］。但在臨床實(shí)際應(yīng)用中, 免疫學(xué)的膠體金法也會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。因此對(duì)假陰性結(jié)果進(jìn)行分析, 有利于更好的進(jìn)行糞便隱血試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制。

1 膠體金法檢測(cè)糞便隱血的檢測(cè)原理

膠體金法對(duì)糞便隱血進(jìn)行檢測(cè)主要是以雙抗體夾心法為主要試驗(yàn)原理, 通過(guò)抗人血紅蛋白多克隆抗體以及單克隆抗體等方式, 特異性的結(jié)合糞便中存在的人血紅蛋白指標(biāo), 通過(guò)膠體金標(biāo)記測(cè)定抗人血紅蛋白的抗體顯色情況, 最低可檢測(cè)出0.2 μg/m l的血紅蛋白, 能準(zhǔn)確檢測(cè)無(wú)癥狀、少量、持續(xù)、肉眼和顯微鏡下看不到的出血, 并且不受動(dòng)物血和鐵劑的影響, 世界衛(wèi)生組織胃腸鏡協(xié)會(huì)認(rèn)為, 糞便隱血試驗(yàn)具有較高的準(zhǔn)確性, 值得臨床推廣應(yīng)用［2］。化學(xué)法檢測(cè)糞便潛血主要是通過(guò)血紅蛋白中亞鐵血紅素有催化過(guò)氧化物分解為基本原理, 催化設(shè)計(jì)中有釋放新生態(tài)氧、過(guò)氧化氫分解等, 對(duì)各類(lèi)型的色原物質(zhì)氧化后則呈色, 血紅蛋白的量主要是通過(guò)呈色的深度或者淺度進(jìn)行反應(yīng)。但缺乏特異性和準(zhǔn)確性, 外源性動(dòng)物食品、大量生食蔬菜等易出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng), 而維生素C或其他具有還原作用的藥物使隱血試驗(yàn)假陰性, 因此患者檢測(cè)前需控制飲食或藥物。

2 膠體金法檢測(cè)糞便隱血出現(xiàn)假陰性的原因

膠體金法通過(guò)充分發(fā)揮單克隆和多克隆抗體特異性來(lái)檢測(cè)糞便標(biāo)本當(dāng)中的人血紅蛋白, 具有特異性高、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單快速、不受其他藥物、鐵劑、動(dòng)物血、飲食限制等干擾的優(yōu)點(diǎn)。然而臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)該檢測(cè)方法存在部分缺陷:當(dāng)血紅蛋白的抗原性改變時(shí), 與抗體結(jié)合可能發(fā)生異常,呈現(xiàn)假陰性;當(dāng)患者出血量比較大時(shí), 增高血紅蛋白的含量,檢測(cè)時(shí)可能因抗原過(guò)剩出現(xiàn)鉤狀效應(yīng), 呈現(xiàn)假陰性;當(dāng)血紅蛋白長(zhǎng)時(shí)間存在于消化道時(shí), 分泌的酶降解則會(huì)在一定程度上破壞腸道以及胃酸, 呈現(xiàn)假陰性。

這種方法的靈敏度較高, 但亦可造成一定的假陰性結(jié)果。在實(shí)際的免疫反應(yīng)中, 檢測(cè)樣本中血紅蛋白含量過(guò)高(>30000 μg/ml)或過(guò)低 (<0.03 μg/ml)時(shí) , 試驗(yàn)結(jié)果以陰性呈現(xiàn)。在血紅蛋白含量處于3~300 μg/ml的范圍時(shí), 才以強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)呈現(xiàn)［3］。假陰性產(chǎn)生的主要原因有以下幾個(gè)方面：抗原過(guò)少或過(guò)多、抗原性發(fā)生改變、抗原抗體不匹配?？乖^(guò)少是因?yàn)椴蓸恿坎蛔慊蛳♂屢河昧靠刂撇粐?yán)格而造成的?？乖^(guò)多是因?yàn)椴蓸恿窟^(guò)多或過(guò)量大出血而致反應(yīng)體系中抗原過(guò)剩出現(xiàn)后帶現(xiàn)象引起的, 通常情況下, 柏油樣便主要是由于上消化道出血引起的, 一旦糞便標(biāo)本中血紅蛋白有著過(guò)高的含量, 則會(huì)導(dǎo)致隱血試驗(yàn)以假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果或者弱陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)［3］。抗原性發(fā)生改變是有些患者上消化道出血后, 胃部存在血紅蛋白后, 則會(huì)在較快的時(shí)間內(nèi)水解珠蛋白鏈, 血紅蛋白可能被充分降解或消化殆盡而失去單克隆抗體所特異結(jié)合的抗原決定簇, 另外, 腸道內(nèi)存在的體外細(xì)菌能夠促進(jìn)血紅蛋白免疫活性在糞便中逐漸喪失, 造成出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況。另外, 還出現(xiàn)患者由于單克隆抗體、血紅蛋白無(wú)法匹配出現(xiàn)假陰性的情況, 同時(shí)由于水觸珠蛋白、糖化血紅蛋白屏蔽抗原決定簇而出現(xiàn)假陽(yáng)性的檢驗(yàn)結(jié)果［4］。

在關(guān)注膠體金法檢測(cè)糞便隱血可能出現(xiàn)假陰性的同時(shí),也要注意可能出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況, 健康人胃腸道生理出血量在0.6 m l/d內(nèi), 因?yàn)樯硎а獙儆谡Ｇ闆r, 加上免疫學(xué)方面敏感性較高, 一般健康人在服用對(duì)胃腸道產(chǎn)生刺激的藥物后, 可導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。

3 避免膠體金法檢測(cè)糞便隱血出現(xiàn)假陰性可采取的措施

選用合格的、質(zhì)量好及靈敏度高的商品試劑。制訂完善標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行。操作中應(yīng)多點(diǎn)采樣, 尤其是外觀未見(jiàn)異常的樣本。應(yīng)該嚴(yán)格控制標(biāo)本采樣量, 以10 mg/ml為宜, 嚴(yán)格控制蒸餾水用量, 以1 ml為宜, 并在說(shuō)明書(shū)標(biāo)識(shí)的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)觀察結(jié)果。倘若柏油樣便或者黑便的檢測(cè)結(jié)果以陰性結(jié)果呈現(xiàn), 那么應(yīng)該將采集量減少, 同時(shí)進(jìn)行多次稀釋,以確保檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性, 倘若多次稀釋后仍然為陰性, 應(yīng)該加用化學(xué)法檢測(cè), 將免疫和化學(xué)法相結(jié)合聯(lián)合檢測(cè)便潛血［5］,避免免疫法的假陰性出現(xiàn)遺漏的情況, 同時(shí)應(yīng)該及時(shí)告知臨床主治醫(yī)生, 防止患者疾病治療受到影響, 并且應(yīng)該觀察患者用藥以及飲食等, 防止因?yàn)檫M(jìn)食動(dòng)物血或服用中藥、鐵劑等藥物而出現(xiàn)黑便。

［1］葉應(yīng)撫, 王毓三, 申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.廣州:東南大學(xué)出版社, 2006:310.

［2］孫彩林, 袁明鳳.鄰聯(lián)甲苯胺法和單克隆抗體法檢測(cè)糞便隱血的應(yīng)用評(píng)價(jià).檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2011, 8(20):2527.

［3］思凌云, 王剛, 王凌, 等.免疫金標(biāo)法糞便隱血試驗(yàn)的質(zhì)量控制.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2003, 18(4):47-48.

［4］王志強(qiáng).膠體金試紙條法檢測(cè)糞便隱血方法評(píng)價(jià).九江醫(yī)學(xué),2007, 22(2):37-38.

［5］趙海英.膠體金法檢測(cè)便潛血假陰性結(jié)果分析.中國(guó)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志, 2006, 7(6)422-423.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.10.177

014040 包頭市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科

2015-01-22］