薛士鵬

金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯(lián)免疫檢測研究

薛士鵬

目的 探討金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯(lián)免疫檢測的臨床應(yīng)用價值。方法 本次研究的對象是小白鼠, 將本院自制的金黃色葡萄球菌B型腸毒素作為免疫抗體, 研究這種抗體在產(chǎn)生過程中的作用, 采用金黃色葡萄球菌B型腸毒素間接競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢驗方式對其進行檢驗,總結(jié)出金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯(lián)免疫檢測在細菌霉素中檢測的理論依據(jù)。結(jié)果 本院自制的金黃色葡萄球菌B型腸毒素純度較高, 能夠與金黃色葡萄球菌B型腸毒素的濃度呈現(xiàn)出線性關(guān)系。在本次研究過程中, 小白鼠最高效價為1：10000。從本次試驗中發(fā)現(xiàn), 當(dāng)金黃色葡萄球菌B型腸毒素的濃度在2～1000 ng/ml范圍中時競爭性抑制率與金黃色葡萄球菌B型腸毒素濃度10～450 ng/ml時樣品中的金黃色葡萄球菌B型腸毒素濃度會隨之增加。結(jié)論 采用金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯(lián)免疫檢測這種方式應(yīng)用于檢測中具有極強的價值, 靈敏度較高, 能夠檢測出樣品中金黃色葡萄球菌B型腸毒素的殘留情況。

金黃色葡萄球菌B型腸毒素；酶聯(lián)免疫檢測；臨床應(yīng)用價值；研究

改革開放以來, 我國國民經(jīng)濟進入了快速增長的階段,隨著人們生活水平的提高, 日常生活的飲食結(jié)構(gòu)和消費觀念產(chǎn)生了巨大的變化, 動物源性食品的比重在人們生活中所占有的比重越來越多。金黃色葡萄球菌B型腸毒素是重要的食源性和醫(yī)源性雙重致病菌, 經(jīng)常存在于多種物質(zhì)中, 這種病菌對營養(yǎng)物質(zhì)水平的要求不高, 耐鹽性較強, 大量聚集會產(chǎn)生食物中毒的情況發(fā)生。為了探討金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯(lián)免疫檢測的臨床應(yīng)用價值, 本院特進行了一次研究,取得了較為良好的效果, 現(xiàn)將具體情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 本次研究中所使用的分光光度計主要由日本島津提供, 型號為UV-265FW；在實驗中ZFQ-85A型酶聯(lián)免疫檢測儀主要由華中電子管廠提供；研究中采用的離心機型號為TGL, 由北京醫(yī)用離心機廠提供。金黃色葡萄球菌B型腸毒素主要由信陽農(nóng)業(yè)高等實驗室保存。牛血清白蛋白主要由華美公司提供。

1.2 檢測方法

1.2.1 金黃色葡萄球菌B型腸毒素的制備 金黃色葡萄球菌B型腸毒素的制備主要包括3個方面：①從瓊脂板上挑選出單菌落, 將其接種到10 ml的培養(yǎng)液中, 需要保持培養(yǎng)環(huán)境的溫度為37℃, 培養(yǎng)的時間為12 h, 得到種子液, 將1 ml含量的種子液接種到200 ml的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng), 培養(yǎng)的溫度、時間與上述時間相同；②將培養(yǎng)好的金黃色葡萄球菌B型腸毒素菌液進行離心處理, 離心的速度為10000 r/min, 離心后取其上清液, 用濾膜過濾后放置在300 ml的濾杯之中 ,用截留孔徑為10 k的超模在氮氣壓力下對其進行濃縮處理,濃縮成其原體積的1/10。需要注意的是, 氮氣壓力設(shè)置在0.2 MPa。液體濃縮好之后將其放置在冰浴之中, 根據(jù)體積的具體情況分次進行磁力攪拌并加入固體達到飽和度為60%的狀態(tài), 再冰浴4 h之后進行15 min的離心處理, 取上清液繼續(xù)放置在冰浴中加入(NH4)2SO4, 將飽和度情況提高到85%,放置在4℃的環(huán)境中即可。過夜后需要對取得的液體進行蛋白沉淀, 離心, 除去上清后加入其體積1/10的水重新溶解,隨后進行為期為24 h的透析；③根據(jù)儀器中的色譜柱相關(guān)要求對毒素進行純化。

1.2.2 金黃色葡萄球菌B型腸毒素抗血清的制備 此種制備的方式主要包括2個方面：①在進行抗原注射前的1周對小白鼠進行皮內(nèi)注射, 注射的藥物為卡介苗, 這樣能夠刺激動物的免疫系統(tǒng), 然后再進行抗原注射, 抗原注射使用的量為0.1 ml/次；②抗原注射后的1個月之后對小白鼠進行斷尾, 采其血樣, 將其放置在室溫中進行凝血處理, 在4℃的環(huán)境下進行過夜, 采用轉(zhuǎn)速為3000 r/min的速度進行離心處理,離心的時間為5 min。

1.2.3 ELISA進行檢測 按照ELISA的相關(guān)檢測標準進行操作即可。

2 結(jié)果

小白鼠最高效價為1：10000, 當(dāng)金黃色葡萄球菌B型腸毒素的濃度在2～1000 ng/ml之中時競爭性抑制率與金黃色葡萄球菌B型腸毒素濃度10～450 ng/ml時樣品中的金黃色葡萄球菌B型腸毒素濃度會隨之增加。

3 討論

金黃色葡萄球菌B型腸毒素英譯為Staphylococcal Enterotoxin B, 簡稱為SEB。金黃色葡萄球菌B型腸毒素經(jīng)常會蘊藏在蛋白質(zhì)、水分含量充足并且同時含有一定含量的淀粉之類的食物之中［1］。在日常生活中, 牛奶、大多數(shù)乳制品均符合金黃色葡萄球菌B型腸毒素生長的條件, 在牛奶中含有的金黃色葡萄球菌B型腸毒素具有極強的耐熱性, 耐受度可高達100℃300 min［2］, 也就是說在原料乳經(jīng)過熱處理后雖然金黃色葡萄球菌能夠被殺死, 但是金黃色葡萄球菌B型腸毒素還能夠?qū)е聶C體致病的情況發(fā)生, 因此, 對乳制品中的金黃色葡萄球菌B型腸毒素進行檢測對人類的身體健康具有極其重要的意義［3］。金黃色葡萄球菌B型腸毒素在檢測中傳統(tǒng)的方式是采用動物學(xué)試驗的方式進行的, 但是這種檢驗方式動物來源較為困難, 并且靈敏度情況較低, 在檢驗的過程中經(jīng)常會出現(xiàn)檢測結(jié)果不滿意的情況［4］。本次研究中, 作者根據(jù)具體的情況用自制的金黃色葡萄球菌B型腸毒素進行研究,將小白鼠作為免疫實驗的對象, 取得了較為良好的效果, 檢測的靈敏度情況明顯提高。

綜上所述, 金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯(lián)免疫檢測這種檢測方式具有極強的臨床應(yīng)用價值, 值得在實際中應(yīng)用。

［1］ 楊靜.食源性金黃色葡萄球菌腸毒素基因在液體培養(yǎng)基和牛肉制品中的表達研究.南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013.

［2］ 章建輝.免疫磁珠快速檢測金黃色葡萄球菌方法的研究.湖南師范大學(xué), 2013.

［3］ 李樂.致病微生物新型檢測方法及預(yù)防體系應(yīng)用研究.中南大學(xué), 2014.

［4］ 王立新.臨床血流感染患者金黃色葡萄球菌耐藥機制及分子流行病學(xué)研究.天津醫(yī)科大學(xué), 2013.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.192

2015-01-30］

473061 南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校