張 偉

(武漢市第六醫(yī)院婦產(chǎn)科室，武漢 430015)

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)，2012年全球?qū)m頸癌新發(fā)病例528 000例，死亡266 000例，死亡率占所有女性癌癥死亡人數(shù)的7.5%，其中約87%的宮頸癌死亡病例發(fā)生在欠發(fā)達(dá)地區(qū)[1]。目前我國宮頸癌的發(fā)病率呈上升及年輕化趨勢(shì)[2]。因此，研究宮頸癌發(fā)病的分子機(jī)制、臨床治療的特異靶點(diǎn)以及預(yù)后判斷的指標(biāo)是當(dāng)前迫切需要解決的問題。

PBK/TOPK是一種Ser/Thr激酶，由激酶亞結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)合域組成，可在有絲分裂期間活化及磷酸化。研究報(bào)道PBK/TOPK在多種腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞的異常增殖、周期、凋亡及惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)[3,4]。為了探討PBK/TOPK在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義，本文對(duì)我院收治的45例宮頸癌患者和40例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的組織切片進(jìn)行免疫組化分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年1月～2014年12月期間我院病理科收集的宮頸癌組織蠟塊45例，其中鱗癌38例，腺癌7例；Ⅰ期12例，Ⅱ期22例，Ⅲ期11例；低分化14例、中分化16例，高分化15例；早期31例，進(jìn)展期14例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例。高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變蠟塊40例，患者年齡范圍28～64歲，平均(39.2±3.1)歲，50例低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINI)，患者年齡范圍27～61歲，平均年齡(37.2±2.8)歲。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署了知情同意書。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 免疫組化SP檢測(cè)試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)公司，免疫組化染色步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。所有石蠟標(biāo)本切片后常規(guī)脫蠟至水；將組織切片放入加熱至沸騰的0.01 mol/L枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0)中，大火加熱6 min進(jìn)行抗原修復(fù)；3% H2O2孵育5～10 min，抑制內(nèi)源性過氧化物酶；封閉液封閉后加PBK/TOPK一抗(鼠抗，單抗，CST,1∶50)，37℃孵育2 h；PBS沖洗后加二抗(辣根過氧化物酶，HPR)孵育；PBS沖洗后，DAB顯色劑顯色；自來水充分沖洗，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。用已知PBK/TOPK陽性的肺癌組織作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定 組織切片的免疫組化結(jié)果由病理學(xué)專業(yè)人員進(jìn)行評(píng)分，排除假陽性和假陰性結(jié)果后，在40倍物鏡下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，以細(xì)胞核或細(xì)胞漿染成棕黃或棕褐色為陽性，陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞﹤10%為0分，11%﹤陽性細(xì)胞≤25%為1分，26%﹤陽性細(xì)胞≤50%為2分，51%﹤陽性細(xì)胞≤75%為3分，陽性細(xì)胞﹥75%為4分。切片染色強(qiáng)度：無染色為0分，弱染色為1分，中度染色為2分，強(qiáng)染色為3分。免疫反應(yīng)(Immunoreactivity Score ，IS)得分=樣本著色程度得分×陽性細(xì)胞比例得分，0 分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為中度陽性(++)，9～12分為強(qiáng)陽性(+++)，如某一樣本著色程度為中等，則記做2分，陽性細(xì)胞比例為55%，則記做3分，免疫反應(yīng)得分則為2×3=6分，樣本得分范圍0～12分。

根據(jù)宮頸癌組織的PBK/TOPK表達(dá)水平，將本組45例患者分為PBK/TOPK陽性組和陰性組，分析PBK/TOPK表達(dá)與患者病理資料的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1宮頸癌組織PBK/TOPK表達(dá)情況分析 PBK/TOPK陽性染色呈棕黃色或棕褐色顆粒，定位于細(xì)胞核和胞漿(圖1)。免疫組化結(jié)果顯示，PBK/TOPK在宮頸癌組織的陽性表達(dá)率為75.6%，在非宮頸癌組織的陽性表達(dá)率為16.7%(表1)，兩組間數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2不同宮頸病變類型組織PBK/TOPK的表達(dá)水平比較 CINI組織的IS得分明顯低于高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤及宮頸癌組織，數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤IS得分明顯低于宮頸癌組織，數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見圖2。

2.3PBK/TOPK與P53在宮頸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析 經(jīng)非參數(shù)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，PBK/TOPK和P53在宮頸癌癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.68，P=0.008)，詳見表2。

2.4宮頸癌組織PBK/TOPK表達(dá)與臨床病理資料的相關(guān)性分析 PBK/TOPK表達(dá)水平與年齡、分化程度無關(guān)，與TNM分期、浸潤(rùn)程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表1 宮頸癌組織中PBK/TOPK的表達(dá)水平

Note：Compared with non cervical cancer tissue group,1)P<0.05.

圖1 不同宮頸組織PBK/TOPK的表達(dá)(×40)Fig.1 PBK/TOPK expression of different cervical tissue (×40)Note: A.Normal cervical tissue;B.Low-grade intraepithelial neoplasia;C.Low-grade intraepithelial neoplasia;D.Cervical squamous cell carcinoma;E.Cervical cancer.

圖2 不同宮頸病變組織PBK/TOPK的表達(dá)水平比較Fig.2 PBK/TOPK expression of different cervical tissue Note: *.P<0.05，**.P<0.01.

表2 PBK/TOPK與P53在宮頸癌組織中的表達(dá)相關(guān)性分析

表3 宮頸癌中PBK/TOPK表達(dá)水平與臨床病理特征之間的相關(guān)性

Note：Compared with PBK/TOPK negative group，1)P<0.05.

3 討論

宮頸癌早期癥狀多不明顯，到晚期后惡性程度高，目前尚缺乏有效的治療方法，緩則預(yù)后較差。因此，研究宮頸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找臨床診斷、治療的分子標(biāo)志物對(duì)提高宮頸癌患者的生存率具有重大意義。

PBK/TOPK是MAPKK分子家族成員，可以激活p38MAPK、ERK、JNK1等信號(hào)通路[5-8]，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、炎癥反應(yīng)等多種重要的生理病理過程。同時(shí)，PBK/TOPK還可以和P53、Ki67、raf等分子相互作用[9]。PBK/TOPK通過抑制P53及下游細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，如P21等來調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的發(fā)育與進(jìn)化[10]。在乳腺癌細(xì)胞中，PBK/TOPK通過調(diào)節(jié) LGN/GPSM2 的Thr450[11]，H3組蛋白Ser10[12]的磷酸化，影響細(xì)胞有絲分裂，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖。PBK/TOPK還可通過激活p38，參與DNA損傷修復(fù)，增加細(xì)胞存活率，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)[13]。

研究報(bào)道PBK/TOPK除在睪丸和部分胚胎組織中有表達(dá)外，在其他正常組織中表達(dá)較低，然而在多種腫瘤組織中，均檢測(cè)到PBK/TOPK的表達(dá)[14,15]。在人膀胱癌中，PBK/TOPK 在mRNA的表達(dá)水平高于癌旁組織，免疫組化結(jié)果表明64.6%的膀胱癌患者胞質(zhì)中高表達(dá)PBK/TOPK，同時(shí)其水平還與腫瘤的浸潤(rùn)、進(jìn)展有關(guān)[16]。本研究對(duì)45例宮頸癌組織和40例宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中PBK/TOPK的表達(dá)水平使用免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，PBK/TOPK在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為75.6%，在非宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率16.7%，兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步分析PBK/TOPK表達(dá)水平與臨床病理特征之間的相關(guān)性，結(jié)果顯示PBK/TOPK表達(dá)水平與年齡、分化程度無關(guān)，與TNM分期、浸潤(rùn)程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。p53基因分為野生型與突變型，野生型p53屬于抑癌基因，可參與細(xì)胞周期的調(diào)控，抑制細(xì)胞的增殖。一旦發(fā)生丟失或者突變則失去對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的作用，導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖。在肺癌中，Lei等[17]發(fā)現(xiàn)PBK/TOPK的表達(dá)與P53突變密切相關(guān)，并可影響肺癌細(xì)胞的增殖、活性及患者的預(yù)后。本研究結(jié)果表明在宮頸癌中，PBK/TOPK蛋白的表達(dá)與P53蛋白的表達(dá)具有明顯的正相關(guān)，不利于患者的預(yù)后。PBK/TOPK的異常高表達(dá)可能會(huì)促使宮頸癌的侵襲及轉(zhuǎn)移，使得宮頸癌難以根治，導(dǎo)致預(yù)后不良。

綜上所述，PBK/TOPK的表達(dá)與宮頸癌密切相關(guān)，可作為臨床腫瘤診斷及治療的新靶點(diǎn)。

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