孫淑波,李 冬,時(shí) 慧,高洪霞,張沙莎

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科,黑龍江 佳木斯 154003)

蝙蝠葛堿透皮擴(kuò)散促滲劑的研究分析①

孫淑波,李 冬,時(shí) 慧,高洪霞,張沙莎

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科,黑龍江 佳木斯 154003)

目的:比較、分析、選擇蝙蝠葛堿透皮擴(kuò)散促滲劑。方法:通過(guò)改良Franz擴(kuò)散池,根據(jù)Q-t方程和通過(guò)考察透皮速率常數(shù),從1%丙二酮，3%Azone，3%OA，十二烷基硫酸鈉，冰片，6%尿素，5%松節(jié)油中分析比較出最適合蝙蝠葛酚性堿的透皮擴(kuò)散促滲劑。結(jié)果:由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出3%氮酮為較好透皮滲透促進(jìn)劑。結(jié)論:此研究操作方法簡(jiǎn)單易行,可重復(fù)性好。

蝙蝠葛堿；吸收促滲劑；透皮吸收

心臟病是比較常見的一類循環(huán)系統(tǒng)疾病。心臟、血管和神經(jīng)體液組織(主要是調(diào)節(jié)血液循環(huán))構(gòu)成循環(huán)系統(tǒng)，這一系統(tǒng)的疾病被稱為心血管病，屬于內(nèi)科疾病的常見病，其中以心臟病最為多見，能顯著地影響患者的勞動(dòng)力。目前發(fā)現(xiàn)，人類健康的頭號(hào)殺手就是心臟病，多發(fā)于老年人群，它的發(fā)生往往讓患者們束手無(wú)措，如果心臟病急性發(fā)作，很有很能會(huì)導(dǎo)致患者失去生命。統(tǒng)計(jì)顯示，每年全世界有1700萬(wàn)人死于心臟病，每年，全世界死亡患者中，有三分之一是心臟病患者。而且，心臟病的危害很多：心力衰竭可引起低鉀血癥；心力衰竭引起低鈉血癥；心力衰竭病人要忍受極大痛苦：呼吸困難、足踝腫脹、精疲力竭等癥狀；心力衰竭給病人及家屬帶來(lái)諸多的不便和沉重的負(fù)擔(dān)；心力衰竭可嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量。

蝙蝠葛堿是從常用中藥防己科植物蝙蝠葛根莖中提取出的類似生物堿結(jié)構(gòu)的混合物。目前已有研究表明，蝙蝠葛堿可用于預(yù)防和治療冠心病、心絞痛，心律失常等常見疾病。但是通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，市面上主要還是以口服的劑型為主，例如：片劑，粉針劑，膠囊劑等[1,2]。本次實(shí)驗(yàn)的主要出發(fā)點(diǎn)是：避免胃腸道的降解和肝臟的首過(guò)效應(yīng)。而且結(jié)合心血管疾病需要長(zhǎng)期用藥，需要保持平穩(wěn)的血藥濃度，需要盡量減少用藥頻率，需要保證給藥間隔適當(dāng)延長(zhǎng)，需要在發(fā)病期能夠及時(shí)準(zhǔn)確地給藥等特點(diǎn)，結(jié)合藥物理化性質(zhì)，將蝙蝠葛堿研發(fā)出不同以往的外用制劑品種。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)所用的儀器

TP-5型智能透皮擴(kuò)散儀(天津市鑫洲科技有限公司)， 101-1AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)，Agilent1100型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)，SK250LH超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)，艾科勒ALC-210.4型電子天平(上海蘭科儀器有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)的藥品與試劑

蝙蝠葛堿對(duì)照品(廠家購(gòu)買)，去離子水(實(shí)驗(yàn)室自制)，甲醇及乙腈(色譜純)，丙二醇(分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)，油酸(分析純，沈陽(yáng)市東陵區(qū)紅日化工廠)，尿素(分析純，沈陽(yáng)市試劑五廠)，松節(jié)油(分析純，哈爾濱市化工化學(xué)試劑廠)，氮酮(分析純，天津市博迪化工有限公司)，十二烷基硫酸鈉(化學(xué)純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)，冰片(教研室樣品)。

1.3 實(shí)驗(yàn)所需的動(dòng)物

家兔(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，合格證編號(hào)：200101008)，雄性，體重(2500±3)g。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的建立

色譜柱:Hypersil ODS-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相:緩沖液(將1.36 mL磷酸和1.42 mL的三乙胺加純凈水至1000 mL)-乙腈(76:24)；檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm；柱溫:41℃；流速:1.1 mL·min-1；進(jìn)樣量:5.0 μL 。

2.2 貯備液的制備

精密稱取蝙蝠葛堿對(duì)照品0.00398g，置于25mL量瓶中，用已選好的最佳pH 5.8磷酸鹽生理鹽水緩沖液定容(溶液濃度為0.1592μg·μL-1)，然后過(guò)0.45μm微孔濾膜備用。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

取對(duì)照品溶液，每種溶液分別進(jìn)樣1，3，5，7，9，11 μL，測(cè)定后，以蝙蝠葛堿進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計(jì)算得出回歸方程Y=750.44X-27.82，r=0.9995，確定蝙蝠葛堿0.3562～1.8384 μg·μL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。見圖1。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品溶液，于0，3，6，9，12，15，18 h每次進(jìn)樣5.0μL，以蝙蝠葛堿的含量計(jì)算，RSD為3.92%。由此實(shí)驗(yàn)可以說(shuō)明樣品穩(wěn)定性良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取蝙蝠葛堿對(duì)照品溶液10 μL，按實(shí)驗(yàn)操作要求，反復(fù)重復(fù)進(jìn)樣10次，測(cè)定對(duì)照品溶液吸收峰面積，所得結(jié)果為：RSD為 2.68 %

圖1 蝙蝠葛堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6 加樣回收試驗(yàn)

將蝙蝠葛堿對(duì)照品貯備液10份分別加入供試品溶液，充分搖勻，完全溶解，微孔膜濾過(guò)，進(jìn)樣5.0μL，測(cè)峰面積，反復(fù)進(jìn)樣10次，結(jié)果代入回歸方程，換算成實(shí)際濃度，得出樣品的平均回收率為101%，RSD為 0.97 % 。

2.7 制備八種蝙蝠葛酚性堿溶液

精密稱取蝙蝠葛酚性堿6.0005mg，置10 mL量瓶中加去離子水定容，備用。精密量取蝙蝠葛酚性堿溶液8份，其中第一份直接加去離子水置100 mL量瓶中定容，備用。其余七份分別配成含有3%OA，1%丙二酮， 3%Azone，冰片，6%尿素，5%松節(jié)油，十二烷基硫酸鈉的溶液各100mL，將八種溶液分別編號(hào)為1～8，備用。

2.8 皮片的制備

首先，取一張事先準(zhǔn)備好的已經(jīng)去毛、去結(jié)締組織的兔皮[3]，然后，剪取大小合適的橢圓形皮片，最后，在擴(kuò)散池及接收池中間位置用以消毒的夾子固定皮片。

2.9 透皮吸收試驗(yàn)

將Franz擴(kuò)散池加滿水，調(diào)溫于37 ℃，轉(zhuǎn)速為300r·min-1，加熱。當(dāng)達(dá)到(37±0.5)℃后，接收池放入磁攪拌子，加入12mL的pH 5.8磷酸鹽生理鹽水緩沖液接收液，將八種預(yù)先配好的蝙蝠葛堿溶液分別加入每個(gè)擴(kuò)散池中，放入頂部的水浴。在實(shí)驗(yàn)開始后的1，3，5，7，9 ，11 ，13 h吸取各接收池中6mL的樣品，放入已經(jīng)備用的西林瓶中，將標(biāo)簽粘貼好，不斷地補(bǔ)充6mL接收液。所得樣品液放入冰箱中冷藏，備用。

2.10 測(cè)定體外透皮速率常數(shù)

將樣品溶液測(cè)峰面積(在280nm下)，分別計(jì)算樣品濃度。計(jì)算累積滲透量Q值。具體公式如下：

表1 加入不同促滲劑蝙蝠葛堿的Q-t方程

從表1可以看出，3%Azone的J= 687.55μg·cm-2·h-1(P<0.05)，選其為蝙蝠葛堿透皮實(shí)驗(yàn)的促滲劑。

3 討論

3.1 蝙蝠葛堿具有抗早后去極化所致心律失常作用，能減少心肌去甲腎上腺素出胞釋放量，抑制交感神經(jīng)纖維上鈉通道及鈣通道，降低H+-ATP酶活性,阻止鈉進(jìn)入囊泡,導(dǎo)致囊泡中鈉含量減少。蝙蝠葛堿能增高胞漿內(nèi)單胺氧化酶MAO活性,加速胞漿內(nèi)鈉降解,減少鈉進(jìn)入囊泡，拮抗鈣通道。蝙蝠葛堿可減慢心率、延長(zhǎng)P-R間期及竇房傳導(dǎo)時(shí)間。蝙蝠葛堿可抑制缺血/再灌注性室顫發(fā)生。蝙蝠葛堿可減少停灌20min后心臟鈉釋放，可抑制缺血心臟鈉非出胞釋放。蝙蝠葛堿具有降低心肌耗氧量作用，擴(kuò)張外周血管降低血壓,減輕心臟負(fù)荷。蝙蝠葛堿減慢心率作用也減少了心肌對(duì)氧的消耗 。綜上，蝙蝠葛堿可用于治療心律失常及心肌缺血性疾患。

3.2 經(jīng)篩選，從所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出：3%Azone為促進(jìn)吸收劑時(shí)，蝙蝠葛堿的透皮速率常數(shù)是最大的，而且3%Azone的實(shí)驗(yàn)成本不是特別高，可以考慮選用3%Azone為蝙蝠葛堿透皮擴(kuò)散的促滲劑。本次實(shí)驗(yàn)的方法相對(duì)來(lái)說(shuō)，還是比較簡(jiǎn)單可靠，重復(fù)率高的，而且實(shí)驗(yàn)的結(jié)果真實(shí)穩(wěn)定，為蝙蝠葛堿經(jīng)皮給藥進(jìn)一步研究提供有利的基本理論依據(jù) ，為后續(xù)篩選外用制劑劑型工作時(shí)，免去了考慮吸收滲透劑的影響，為比較蝙蝠葛堿巴布膏劑，透皮貼劑，橡膠膏劑等劑型體外吸收奠定了前期必要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

3.3 雖然經(jīng)皮給藥系統(tǒng)有它的缺點(diǎn)(考慮皮膚的不透過(guò)性，考慮部分藥物的活性是否合適制成經(jīng)皮給藥制劑，考慮某些特殊體質(zhì)的患者有可能發(fā)生接觸性皮炎等等)，但是作為現(xiàn)代藥劑學(xué)研究的熱點(diǎn)，經(jīng)皮給藥系統(tǒng)以它獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)逐漸地代替很多的口服制劑。在研究經(jīng)皮給藥系統(tǒng)時(shí)，要綜合考慮多種相關(guān)因素，選擇合適的藥物、輔料、工藝都成為要全面考慮到的對(duì)象。如何選用先進(jìn)的技術(shù)，使中藥材減小原本龐大的體積，使中藥提取物能夠便于成型和保持藥物特殊的療效，增強(qiáng)藥物的透皮吸收的程度，實(shí)現(xiàn)成品質(zhì)量的穩(wěn)定性和可控性，還要在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步的研究。

[1]徐敏.中藥透皮吸收制劑的研究概況[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2008，15(2):159

[2]吳鐵，張志平. 薄荷腦促進(jìn)撲熱息痛透皮吸收作用研究[J]. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1992，12(3):104

[3]盧聞， 賀浪沖. 白芷香豆素類有效部位體外透皮特性研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，2003，38(12)：939

The research and analysis on Dauricine transdermal penetration enhancers on the research and analysis

SUNShu-bo,LIDong,SHIHui,GAOHong-xia,ZHANGSha-sha

(the First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003, China)

Objective: To compare,analyzesis, and selection of Dauricine transdermal penetration enhancers.Methods: The most suitablePAMD transdermal diffusion penetration enhancers 5% turpentine was analyzed and compared by modified Franz diffusion cell,the Q-t equation and percutaneous rate constant through the inspection according to the,from 1% C two ketone,3%Azone,3% OA, twelve sodium alkyl sulfate,borneol,6% urea,analysis and comparison of the most suitable PAMD transdermal diffusion penetration enhancers 5% turpentine.Results:Tthe effect of 3% azoneas good transdermal penetration enhancers was good.Conclusion:Tthe research method of operation is simple with,good repeatability.

Dauricine; penetration enhancers on the transdermal absorption

孫淑波(1977-)女，黑龍江佳木斯人，學(xué)士，主管藥師。

張艷霞(1982～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主管藥師。E-mail：zhangyanxia119@126.com。

R285.1

A

1008-0104(2015)04-0070-02

2015-03-10)