馮 瀾，李紹民，代 月，馬 婷，馬淑霞

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

馬齒筧多糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道揮發(fā)性脂肪酸及肝臟細(xì)菌易位的影響①

馮 瀾1，李紹民1，代 月2，馬 婷2，馬淑霞2

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：探討中藥馬齒莧多糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道揮發(fā)性脂肪酸及肝臟細(xì)菌易位的影響。方法：應(yīng)用硫酸葡聚糖鈉(DSS)制備潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型，隨機(jī)分成2組：正常對照組、模型組，造模成功后模型組再分為自然恢復(fù)組、馬齒筧多糖治療組。分別于造模后、給藥7d后處死小鼠，進(jìn)行腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸測定及肝臟細(xì)菌易位檢測。結(jié)果：DSS造模后模型組小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸含量明顯下降, 肝臟有腸桿菌易位，小鼠出現(xiàn)腸道微生態(tài)失調(diào)。馬齒筧多糖治療7d后治療組小鼠與模型組小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸含量明顯上升, 肝臟腸桿菌數(shù)量減少。結(jié)論：馬齒筧多糖可以提高腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸含量并降低肝臟腸桿菌數(shù)量。馬齒筧多糖通過調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)失調(diào)，對潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)揮治療作用。

馬齒筧多糖；揮發(fā)性脂肪酸；細(xì)菌易位

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)又稱慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，是一種病因不明， 反復(fù)發(fā)生腸道潰瘍， 以腹瀉、黏液血便及腹痛為主要表現(xiàn)及侵犯直腸和結(jié)腸黏膜與黏膜下層為主的炎癥性病變[1]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎常伴有腸道微生態(tài)的嚴(yán)重失調(diào)。馬齒筧多糖是中藥馬齒筧的提取物，近年來逐漸被重視和推廣。馬齒筧多糖是一種中藥益生元制劑，能調(diào)整菌群失調(diào)，尤其是對雙歧桿菌的生長有明顯的促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)擬研究馬齒筧多糖對UC小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸及肝臟細(xì)菌易位的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及主要試劑

昆明系清潔級小鼠，6～8周，雌雄各半，體重18～22g，購于大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心[許可證號：SCXK(遼)2008-0002]。EMB瓊脂培養(yǎng)基由北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司提供。藥物硫酸葡聚糖鈉(DSS，分子量5000)購于廣州齊云生物科技有限公司；中藥馬齒筧由佳木斯大學(xué)藥店提供。馬齒筧多糖制備：方法見參考文獻(xiàn)[2]。使用的主要儀器:島津 GC-14C氣相色譜儀, 厭氧培養(yǎng)箱。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物分組及藥物治療

1.2.1 動物分組及模型制備：清潔級昆明種小鼠50只，隨機(jī)分成2組，正常對照組20只，模型組30只。模型組飲用5%葡聚糖硫酸鈉(DSS)蒸餾水7d，正常對照組飲用蒸餾水。造模第7d結(jié)腸炎小鼠模型明顯地出現(xiàn)體重減輕、從糊狀便到液態(tài)血便、懶動等癥狀，證明造模成功，處死正常對照組小鼠10只、模型組小鼠10只，取標(biāo)本進(jìn)行各種指標(biāo)檢測。把造模后的模型組小鼠分為2組：自然恢復(fù)組(陰性對照組)、馬齒筧多糖治療組，每組各10只小鼠。

1.2.2 中藥治療：模型制備后，自然恢復(fù)組小鼠、正常對照組灌胃等量的生理鹽水。馬齒筧多糖治療組灌胃0.5g/mL的馬齒筧溶液0.3mL，每天2次，連續(xù)7d。7d后處死小鼠，取標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)檢測。

1.2.3 氣相色譜法檢測腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸：方法見參考文獻(xiàn)[3]。

1.2.4 小鼠肝臟細(xì)菌易位檢測：方法見參考文獻(xiàn)[4,5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸檢測

2.1.1 造模后，檢測了小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸，模型組小鼠與正常對照組比，腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸含量降低(P<0.05)，見表1。

表1 模型組與正常對照組小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸含量檢測

注：*與正常對照組比P<0.01。

2.1.2 應(yīng)用馬齒筧多糖治療后，小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸發(fā)生明顯改變，與自然恢復(fù)組比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 藥物治療后各組小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸檢測

注：*與正常對照組比P<0.05，#與自然恢復(fù)組比P<0.05。

2.2 各組小鼠肝臟細(xì)菌易位檢測

2.2.1飲用DSS后，模型組小鼠與正常對照組比， 肝臟腸桿菌數(shù)量增加, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.2.2 馬齒筧多糖治療組小鼠肝臟腸桿菌數(shù)量發(fā)生明顯改變，與自然恢復(fù)組比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表3 模型組與正常對照組小鼠肝臟腸桿菌檢測

注：*與正常對照組比P<0.01。

表4 藥物治療后各組小鼠肝臟腸桿菌檢測

注：*與正常對照組比P<0.01，#與自然恢復(fù)組比P<0.05。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)用5%葡聚糖硫酸鈉造模后，模型組小鼠出現(xiàn)從糊狀便到液態(tài)血便、懶動、體重減輕等癥狀，這些改變證明UC模型造模成功。小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸含量明顯下降, 肝臟有腸桿菌易位，證實(shí)UC同時(shí)存在腸道菌群失調(diào)[7]。UC小鼠存在腸道細(xì)菌易位,腸道黏膜的改變促進(jìn)細(xì)菌易位。目前研究認(rèn)為，UC的發(fā)病主要與遺傳因素、環(huán)境因素和免疫因素有關(guān)，且三種因素相互影響，相互作用。而腸道內(nèi)致病菌與正常菌群比例失調(diào)是觸發(fā)UC發(fā)病的關(guān)鍵因素。腸道內(nèi)致病菌、條件致病菌增多，增多的細(xì)菌分泌的腸毒素使腸上皮細(xì)胞通透性增高，并形成大量的氧自由基，其在腸黏膜的損害中起重要作用。病菌分泌免疫抑制性蛋白，導(dǎo)致局部腸黏膜免疫耐受失衡，腸上皮細(xì)胞更易受到致病菌的侵襲而損傷。并且，某些過度生長的細(xì)菌導(dǎo)致上皮細(xì)胞受損傷，誘發(fā)腸道炎癥的發(fā)生[8]。腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸主要來源于厭氧菌對碳水化合物和未消化蛋白質(zhì)的發(fā)酵[9]。厭氧菌是腸道揮發(fā)性脂肪酸的主要產(chǎn)生菌。模型組小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸降低，說明厭氧菌減少，小鼠出現(xiàn)菌群失調(diào)。UC小鼠應(yīng)用中藥馬齒筧多糖治療后小鼠基本狀態(tài)恢復(fù)良好：糞便性狀正常、體重增加；腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸增加，肝臟腸桿菌數(shù)量下降；腸道菌群失調(diào)得到改善。總之，馬齒筧多糖作為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑可以增加小鼠腸內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸及降低肝臟腸桿菌數(shù)量、調(diào)整腸道菌群失調(diào)，通過促進(jìn)雙歧桿菌的生長達(dá)到抗炎作用，對UC有一定的治療效果[6]。中藥是祖國醫(yī)學(xué)之瑰寶，用馬齒筧多糖協(xié)助治療UC，有利于疾病的治愈[10]。

[1]蘇連明，莊彥華，王加良 ， 等. 凝結(jié)芽孢桿菌聯(lián)合奧沙拉嗪對輕中型潰瘍性結(jié)腸炎患者血清TNF-α、IL-8、IL-17的影響[J]．中國微生態(tài)學(xué)雜志，2013，25(7)：826-817

[2]雅庫，馬淑霞，成正祥，等．馬齒莧多糖對腸道微生態(tài)失調(diào)小鼠內(nèi)毒素含量及肝臟細(xì)菌易位的影響[J]．中國微生態(tài)學(xué)雜志，2011，23(1)：13-14

[3]胡新俊，李春香，王廣，等.馬齒莧多糖對腸道微生態(tài)失調(diào)小鼠的調(diào)整作用研究[J]．中國微生態(tài)學(xué)雜志，2010，22(9)：781-783

[4]李儉,王琳,楊景云,等. 四君子湯對免疫抑制小鼠肝臟細(xì)菌易位的影響[J]．中國微生態(tài)學(xué)雜志，2005，17(2)：102-106

[5]姚君，王立生，王建堯，等.白藜蘆醇對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜細(xì)胞因子表達(dá)的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2010，21(3)：227-229

[6]馮瀾，李紹民，代立娟，等.馬齒筧多糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜細(xì)胞因子及腸道菌群的影響[J]．中國微生態(tài)學(xué)雜志，2015，27(2)：139-142

[7]馮瀾，馬淑霞，金鑫，等.佳木斯大學(xué)生皮膚正常菌群的檢測[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2013,36(1)：96-97

[8]王志祥，王自恒, 劉嶺, 等. 三顆針提取物對仔豬生長及腸道菌群和揮發(fā)性脂肪酸的影響[J]．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)( 自然科學(xué)版)，2008,36(6)：34-38

[9]周正，馬婷，馮瀾，等. 馬齒筧多糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道菌群及血內(nèi)毒素的影響[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，2014，26(6)：647-648

[10]克里斯，郭建壯，楊景云，等.馬齒莧多糖對衰老小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2012,35(2)：27-28

The effects of polysaccharide from Portulaca oleracea L. on volatile fatty acids in the gut and bacterial translocation in the liver ofin mice with ulcerative colitis

FENGLan1,LIShao-min1,DAIYue2,MATing2,MAShu-xia2

(1. The Department Division of Infectious Diseases, The First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 2. The Department School of Basic Medical Sciences, Jiamusi University, Jiamusi 154007, China)

Objective: To explore the effects of polysaccharide from Portulaca oleracea L. on volatile fatty acids in the gut, and on bacterial translocation in the liver ofin mice with ulcerative Colitis; to Iinvestigate the effects of polysaccharide from Portulaca oleracea L. on intestinal mucosal cytokine and intestinal flora ofin mice with ulcerative colitis. Methods: Mice were randomly divided into two groups: model group in which rats were introduced by DSS (DSS group) and control group and model group introduced by DSS (DSS group). The mice with ulcerative colitis (DSS group) were further subdivided into natural recovery group and treatment group. After modeling and 7 days of therapy, the mice were respectively sacrificed to detect the volatile fatty acids and bacterial translocation. Results: The volatile fatty acids in the gut reduced and bacterial translocation of the liver appearedbegun；the intestinal flora was out of balanceimbalance, with the treatment of DSS. After 7 days of therapy, the volatile fatty acids in the gut increased compared with the model group and the liver enterobacter number reduced which treated mice compared with the model group. Conclusion: Polysaccharide of Portulaca oleracea L. can increase the volatile fatty acids in the gut and reduces the liver enterobacter number. By a regulate intestinal dysbiosis, polysaccharide from Portulaca oleracea L., will be helpful for the treatment of ulcerative colitis.

polysaccharide from Portulaca oleracea L.; volatile fatty acids; bacterial translocation

黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目，編號：H201363；黑龍江省衛(wèi)生廳課題，編號：2013-240。

馮瀾(1980～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主治醫(yī)師。

馬淑霞(1966～)女，黑龍江佳木斯人，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師。E-mail：marry1964@163.com。

R574.62

A

1008-0104(2015)04-0001-02

2015-03-10)