李 靜，李倚云，聞琍毓

(揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所，揚(yáng)州 225009)

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HPLC法檢測(cè)減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明

李 靜，李倚云，聞琍毓

(揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所，揚(yáng)州 225009)

目的：建立高效液相色譜法檢測(cè)減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent TC-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為0.02 mol/L乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.0)-甲醇(45∶55)，流速為1.0 ml/min，柱溫為35 ℃，檢測(cè)波長為225 nm。結(jié)果：酚酞和鹽酸西布曲明分別在10.77～107.70 μg/ml(r=0.999 9)和11.15 ～ 111.50 μg/ml (r=0.999 9)范圍內(nèi)，濃度與其峰面積呈良好線性關(guān)系，平均回收率分別為99.37% (RSD為0.73%)和98.97%(RSD為0.60%)。結(jié)論：本方法簡便易行、準(zhǔn)確可靠，可用于檢測(cè)減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明。

酚酞，鹽酸西布曲明，減肥類保健食品，高效液相色譜法

目前市場(chǎng)上減肥類保健食品種類繁多，良莠不齊。一些不法商家為追求功效，牟取暴利，不惜向保健食品中非法添加化學(xué)藥品，給廣大消費(fèi)者的身體健康造成嚴(yán)重危害。其中，最常見的添加藥物是酚酞和鹽酸西布曲明。為有效地監(jiān)督減肥類保健食品的質(zhì)量，本文參照有關(guān)文獻(xiàn)[1-3]，采用HPLC法對(duì)減肥類保健食品中非法添加的酚酞和鹽酸西布曲明進(jìn)行定性定量檢測(cè)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Waters 2695高效液相色譜儀(配Waters 2996二極管陣列檢測(cè)器和Empower 化學(xué)工作站)；瑞士METTLER公司AG135型電子分析天平。

1.2 試藥 酚酞對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號(hào)100091-199601，供含量測(cè)定用，使用前不需干燥處理)；鹽酸西布曲明對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號(hào)100624-200401，供含量測(cè)定用，使用前不需干燥處理)；減肥膠囊(編號(hào)為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，批號(hào)為20121113、130409、W201308161)；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：0.02 mol/L乙酸銨溶液(用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.0)-甲醇(45∶55)；檢測(cè)波長：225 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液的制備 精密稱取酚酞和鹽酸西布曲明對(duì)照品各約10 mg，置同一100 ml量瓶中，加甲醇超聲處理30 min使溶解，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.2.2 供試品儲(chǔ)備溶液的制備 分別取供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10粒，傾出內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉約0.2 g，置100 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30 min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ儲(chǔ)備溶液。

2.3 定性鑒別 分別取混合對(duì)照品溶液和供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ儲(chǔ)備溶液，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果顯示供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的色譜圖中，檢出與酚酞和鹽酸西布曲明對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相一致的色譜峰。采用二極管陣列檢測(cè)器采集各點(diǎn)光譜，供試品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ色譜圖中的兩個(gè)色譜峰分別與酚酞和鹽酸西布曲明對(duì)照品色譜峰的紫外吸收光譜一致，可證實(shí)這三批樣品中均添加了酚酞和鹽酸西布曲明?；旌蠈?duì)照品溶液和典型樣品HPLC色譜圖見圖1。

1.酚酞 2.鹽酸西布曲明

2.4 定量測(cè)定

2.4.1 線性關(guān)系考查 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下的酚酞和鹽酸西布曲明混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1.0、2.0、3.0和5.0 ml，分別置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成酚酞和鹽酸西布曲明的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液和混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以酚酞和鹽酸西布曲明的峰面積(Y)對(duì)其濃度(X)進(jìn)行線性回歸，回歸方程分別為酚酞Y=5×107X+45 486(r=0.999 9，n=5)；鹽酸西布曲明Y=2×107X-11 046(r=0.999 9，n=5)。結(jié)果表明，酚酞和鹽酸西布曲明分別在10.77～107.70 μg/ml和11.15～111.50 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取酚酞和鹽酸西布曲明混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液10 μl，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，酚酞和鹽酸西布曲明峰面積的RSD分別為0.93%和0.92%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品Ⅰ，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定，酚酞和鹽酸西布曲明峰面積的RSD分別為1.50%和0.90%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品Ⅰ溶液，在0、2、4、6和8 h分別進(jìn)樣，記錄峰面積。酚酞和鹽酸西布曲明色譜峰峰面積的RSD分別為0.68%和1.12%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品Ⅰ，共9份，每份約0.2 g，精密稱定，置100 ml量瓶中。精密稱取酚酞對(duì)照品28.30 mg與鹽酸西布曲明對(duì)照品33.40 mg，置同一25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取2、2.5和3 ml各三份，分別加入上述9個(gè)100 ml量瓶，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。精密量取10 μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示酚酞和鹽酸西布曲明的平均回收率分別為99.37%和98.97%，RSD分別為0.73%和0.60%，見表1和表2。

2.4.6 含量測(cè)定 取樣品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品儲(chǔ)備液。樣品Ⅰ：取儲(chǔ)備液即得。樣品Ⅱ：取儲(chǔ)備液測(cè)定鹽酸西布曲明含量。另精密量取儲(chǔ)備液5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，測(cè)定酚酞含量。樣品Ⅲ：取儲(chǔ)備液測(cè)定鹽酸西布曲明含量。另精密量取儲(chǔ)備液5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，測(cè)定酚酞含量。在上述色譜條件下，分別注入高效液相色譜儀測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中酚酞和鹽酸西布曲明的含量，結(jié)果見表3。

表1 樣品中酚酞的回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品中鹽酸西布曲明的回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 酚酞屬于接觸性輕瀉藥，可促進(jìn)腸蠕動(dòng)而起到減肥的作用，但也可引起過敏性反應(yīng)，誘發(fā)腸炎、皮炎及大出血等，過量或長期濫用可造成電解質(zhì)紊亂、心律失常，發(fā)生神智不清、 肌痙攣以及倦怠無力等癥狀[4]。鹽酸西布曲明是一種有中樞神經(jīng)抑制作用的減肥藥物，長期服用會(huì)產(chǎn)生肢體痙攣、思維異常、癲癇等危害嚴(yán)重的副作用[4]。上述兩種化學(xué)藥物只能作為藥品使用，而在保健食品中均不得添加。若消費(fèi)者片面追求減肥效果，盲目地長期、大量服用這類保健食品，必將對(duì)自身的健康和生命造成嚴(yán)重威脅。

3.2 實(shí)驗(yàn)中采用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)兩種物質(zhì)進(jìn)行波長掃描，酚酞在228 nm有最大吸收峰，鹽酸西布曲明在222 nm有最大吸收峰。經(jīng)比較，選擇225 nm作為檢測(cè)波長，兩種物質(zhì)在此波長處均有較好的吸收，且干擾峰較少，峰形良好。

3.3 由于違法添加化學(xué)藥物的保健食品不會(huì)標(biāo)示添加物的含量，在實(shí)際測(cè)定中，應(yīng)先通過預(yù)實(shí)驗(yàn)初步探索樣品中添加物的含量，再根據(jù)需要采用不同的稀釋比例，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.4 本文建立了HPLC法檢測(cè)減肥類保健食品中非法添加酚酞和鹽酸西布曲明的方法。操作簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為檢測(cè)非法添加酚酞和鹽酸西布曲明有效方法。

1 姚莉，陳景國，陳冬.減肥類保健品中非法添加化學(xué)藥品的快速篩查[J].淮海醫(yī)藥，2012, 30(6): 547

2 黃奕濱，黃諾嘉，楊文紅.HPLC法測(cè)定減肥類保健食品中非法添加酚酞的研究[J].齊魯藥事, 2011, 30(1): 12

3 曹文丁，余佳文，官柳，等.高效液相色譜法測(cè)定曲美膠囊中鹽酸西布曲明的含量[J].中國藥房，2004，15(4): 240

4 曾濤.常用減肥藥物的不良反應(yīng)[J]. 中國藥師, 2007, 10(6): 599

2014-10-23

R927.11

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1006-5687(2015)02-0017-03