王 偉劉 珍周 莉李 志桂建芳

(1. 中國科學(xué)院水生生物研究所, 淡水生態(tài)與生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢 430072; 2. 中國科學(xué)院大學(xué), 北京 100049)

銀鯽精巢特異的Ly-6/uPAR相關(guān)蛋白的分子克隆及其特征分析

王 偉1,2劉 珍1,2周 莉1李 志1桂建芳1

(1. 中國科學(xué)院水生生物研究所, 淡水生態(tài)與生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢 430072; 2. 中國科學(xué)院大學(xué), 北京 100049)

Ly-6/uPAR基因超家族(Ly-6 SF)成員廣泛地存在于后生動(dòng)物中, 開展該家族相關(guān)功能基因研究具有重要的意義。研究從銀鯽(Carassius auratus gibelio)中鑒定到一個(gè)該家族新成員, cDNA全長為570 bp, 其中開放閱讀框長度為300 bp, 編碼99個(gè)氨基酸, 生物軟件預(yù)測(cè)該蛋白含有一個(gè)LU結(jié)構(gòu)域, 不含GPI錨信號(hào)序列, N端含有信號(hào)肽, 表明其可能為Ly-6基因超家族中分泌型蛋白。組織表達(dá)分析顯示, 該基因只在銀鯽精巢中特異表達(dá), 且又是Ly-6基因超家族中一員, 因此將其命名為銀鯽精巢特異的Ly-6/uPAR相關(guān)蛋白(Carassius auratus gibelio testis-specific Ly-6/uPAR related protein, 簡稱CagTslurp)。原位雜交結(jié)果顯示, 該基因在銀鯽精巢的精原細(xì)胞, 初級(jí)精母細(xì)胞以及次級(jí)精母細(xì)胞中表達(dá), 精子細(xì)胞中存在少量的表達(dá), 而在體細(xì)胞中不表達(dá)。這種精巢特異的表達(dá)模式, 暗示CagTslurp在銀鯽精子發(fā)生中可能發(fā)揮了作用。

銀鯽; Ly-6基因超家族; CagTslurp; 精巢特異; 精子發(fā)生; 原位雜交

Ly-6基因家族成員被認(rèn)為在哺乳動(dòng)物天然免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮了重要作用。該家族基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn)為至少含有一個(gè)保守的 LU結(jié)構(gòu)域, 顯著特征是含有 8—10個(gè)半胱氨酸殘基, 這些半胱氨酸殘基會(huì)形成4—5對(duì)保守的二硫鍵模式[1,2]。大多數(shù)Ly-6家族成員只含有一個(gè) LU結(jié)構(gòu)域, 但是目前研究發(fā)現(xiàn)小鼠RoBo-1(Rodent Bone)[3]和人類CD177[4]有兩個(gè) LU結(jié)構(gòu)域, 以及人類尿激酶型纖溶酶原激活物受體(Urokinase-type plasminogen activator receptor, uPAR)[5]有三個(gè)LU結(jié)構(gòu)域。根據(jù)蛋白末端是否含有GPI錨信號(hào), 可以將該家族成員分為兩類, 一類為蛋白末端具有 GPI錨信號(hào)的膜蛋白, 主要成員包括CD59[6]、前列腺干細(xì)胞抗原(Prostate stem cell antigen, PSCA)[7]、精子頂體膜相關(guān)蛋白(sperm acrosomal membrane-associated protein 14, SAMP14)[8]等;另一類為蛋白末端不含GPI錨信號(hào)的蛋白, 其中大多數(shù)為分泌型蛋白, 包括分泌型 Ly-6/uPAR相關(guān)蛋白(Secreted Ly-6/uPAR related protein 1, SLURP-1)[9]、SLURP-2[10]、差異調(diào)節(jié)鱒蛋白(Differentially regulated trout protein 1, Drtp1)[11], 以及蛇神經(jīng)毒素(Snake neurotoxin)[12]等。

目前, 關(guān)于該家族成員的報(bào)道在人類、小鼠、果蠅以及蛇中相對(duì)較多, 如人類中目前至少存在 45個(gè)家族成員[13], 而果蠅中至少存在35個(gè)家族成員[14]。魚類中該家族成員的報(bào)道還較為缺乏, 如目前在模式生物斑馬魚中克隆鑒定的 ly-6家族成員, 僅有關(guān)于 lypd6、lye、lypd6b和CD59的報(bào)道[15,16]。研究認(rèn)為家族成員的表達(dá)模式一般可分為兩種, 組織特異表達(dá)和廣泛性表達(dá)[17], 如人類中SLURP-1基因是哺乳動(dòng)物中最先發(fā)現(xiàn)的分泌型蛋白, 在多個(gè)組織中表達(dá)[8], 而家族成員 SAMP14卻為精巢特異表達(dá)基因[9]; 如在小鼠中, 家族成員 Lynx-1[18]和 Lynx-2[19]主要在神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá), 而Robo-1卻主要在骨和軟骨生長板中表達(dá); 如在果蠅中, 家族成員 boudin、crooked、coiled以及 crimpled主要在胚胎發(fā)育外胚層和氣管中表達(dá)[14,20]。此外, 家族成員之間的同源性較低, 大多數(shù)成員氨基酸相似性只有 20%—30%,眾多成員的具體功能尚待研究[21]。

銀鯽具有單性雌核生殖和有性生殖的多種生殖方式, 已成為脊椎動(dòng)物發(fā)育生物學(xué)研究的特殊材料之一[22,23]。在天然種群中, 銀鯽存在少量(大約5%—20%)但又極其重要的雄性成員。通過銀鯽遺傳背景差異較大的兩個(gè)克隆系間的有性交配, 篩選出優(yōu)良個(gè)體經(jīng)5 代單性雌核生殖擴(kuò)群, 培育出“中科3號(hào)”新品種, 該品種具有生長快、出肉率高、抗肝臟寄生的吳李碘泡蟲以及遺傳穩(wěn)定等特點(diǎn), 已成為鯽養(yǎng)殖中的主要品種[24—26]。本研究從銀鯽“中科3號(hào)”中克隆鑒定到CagTslurp, 為 Ly-6基因家族新成員,在精巢組織特異表達(dá), 原位雜交表明 CagTslurp主要在精原細(xì)胞, 精母細(xì)胞中表達(dá), 而精子細(xì)胞有少量的表達(dá)。CagTslurp的克隆鑒定可能為進(jìn)一步研究ly-6基因家族, 以及銀鯽精子發(fā)生提供新的線索和基礎(chǔ)參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用銀鯽“中科 3號(hào)”, 均飼養(yǎng)在中國科學(xué)院水生生物研究所官橋?qū)嶒?yàn)基地。取性成熟銀鯽“中科3 號(hào)”的性腺(精巢、卵巢)、腦、垂體、脾臟、肝臟、腎臟、肌肉和心臟等9個(gè)組織, 液氮速凍, –80℃保存。取未受精卵、4細(xì)胞期、256細(xì)胞期、sphere時(shí)期、30%外包期、75%外包期、出芽期、5體節(jié)、26體節(jié)、受精后1天、受精后2天的胚胎液氮速凍,–80℃保存。

1.2 銀鯽CagTslurp全長cDNA克隆

提取銀鯽“中科3號(hào)”精巢組織的總RNA, 用購自Clontech公司的SMART cDNA合成試劑盒合成銀鯽精巢 cDNA 文庫, 具體文庫構(gòu)建步驟可詳見SMART cDNA synthesis Kit (Clontech)操作手冊(cè)。以本實(shí)驗(yàn)室銀鯽“中科3號(hào)”性腺轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得的序列片段為基礎(chǔ), 設(shè)計(jì)3′-RACE-F1、3′-RACE-R1和5′-RACE-F1、5′-RACE-R1引物(表1), 按照SMARTTMRACE cDNA Amplification Kit 操作說明書, 進(jìn)行5′和 3′RACE, 從精巢cDNA文庫中擴(kuò)增CagTslurp的5′端與3′端[27]。PCR反應(yīng)條件如下: 94℃預(yù)變性2min; 94 ℃ 30s; 60 ℃ 30s; 72 ℃ 1min; 35個(gè)循環(huán)之后72℃10min; 4 ℃ 5min 。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分離檢測(cè)后, 切膠回收相應(yīng)的目的片段, 并克隆到pMD18-T載體上, 16℃水浴連接4h。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌, 挑單克隆搖菌, PCR篩選陽性克隆送測(cè)序, 測(cè)序后進(jìn)行結(jié)果比對(duì)拼接, 獲得 CagTslurp cDNA全長序列。

1.3 銀鯽CagTslurp編碼的氨基酸序列分析

通過NCBI網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器上的ORF Finder軟件預(yù)測(cè)cDNA序列的ORF, 并翻譯成氨基酸序列。使用SignalP 3.0 server (http://www.cbs.dtu.dk/services/ SignalP/)預(yù)測(cè)蛋白信號(hào)肽; Smart (http://smart.emblheidelberg.de/)對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測(cè); 利用PreGPI (http://gpcr2.biocomp.unibo.it/gpipe/index.htm)對(duì)蛋白進(jìn)行 GPI信號(hào)預(yù)測(cè)。ClusterX和 GeneDoc進(jìn)行氨基酸多重序列比對(duì), MEGA5.0鄰位相接法(Neighbor-Joining, NJ)構(gòu)建家族系統(tǒng)進(jìn)化樹, 置信度(Bootstraps)1000次檢驗(yàn)各分支置信度[28]。SWISSMODEL軟件進(jìn)行三維蛋白同源建模結(jié)構(gòu)比較(http://swissmodel.expasy.org/)。

表1 銀鯽CagTslurp基因cDNA克隆與表達(dá)分析引物Tab. 1 Primers designed for cloning and expression analysis of gibel carp CagTslurp gene

1.4 半定量PCR和熒光定量PCR

采用Trizol與SV Total RNA試劑盒相結(jié)合的方法進(jìn)行 RNA的提取, 1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的質(zhì)量。逆轉(zhuǎn)錄酶Powerscrit 和oligo(dT)反轉(zhuǎn)錄獲得銀鯽組織和胚胎時(shí)序 cDNA, 并以斑馬魚β-actin引物(表1)為內(nèi)參。以銀鯽CagTslurp cDNA序列為基礎(chǔ), 設(shè)計(jì)特異性跨內(nèi)含子引物 CagTslurp-F1和CagTslurp-R1(表1), 半定量RT-PCR分析該基因在組織以及胚胎時(shí)期的表達(dá)狀況。熒光定量PCR檢測(cè) CagTslurp基因在組織中的相對(duì)表達(dá)量, 實(shí)驗(yàn)中每個(gè)樣品重復(fù)3次并以β-actin基因?yàn)閮?nèi)參, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用2–ΔΔCt方法[29]進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

1.5 原位雜交

根據(jù)銀鯽CagTslurp基因的cDNA全長, 在引物5′端加入T7啟動(dòng)子序列, PCR擴(kuò)增基因的同一片段,將帶有T7啟動(dòng)子的DNA片段連接到pMD18-T載體, 克隆并測(cè)序。克隆正確的質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR,純化回收 DNA片段, 體外轉(zhuǎn)錄獲得帶地高辛標(biāo)記的反義和正義RNA探針, 1%瓊脂糖電泳檢測(cè)RNA探針的質(zhì)量。原位雜交 PCR引物 CagTslurp-F2、CagTslurp-R2、CagTslurp-F3、CagTslurp-R3(表1)。取銀鯽精巢, 于 4% PFA中 4℃環(huán)境固定 16—18h,再經(jīng)30%蔗糖4℃滲透過夜, OTC包埋后進(jìn)行冰凍切片, 切片的厚度為8 μm。之后利用地高辛標(biāo)記的RNA探針進(jìn)行切片原位雜交, 實(shí)驗(yàn)過程主要包括:切片復(fù)水、蛋白酶消化、PFA固定、雜交、洗脫、抗體孵育、染色、顯色等步驟, 具體操作步驟可參照本實(shí)驗(yàn)室方法[30—32]。

2 結(jié)果

2.1 銀鯽CagTslurp cDNA序列與氨基酸序列分析

以銀鯽“中科3 號(hào)”精巢cDNA文庫為模板, 進(jìn)行3′-RACE和 5′-RACE 擴(kuò)增, 結(jié)果在250—500 bp分別獲得單一、明亮的目的片段, 克隆并測(cè)序, 結(jié)果3′端擴(kuò)增片段大小為 497 bp, 而 5′端片段大小為343 bp。對(duì)序列進(jìn)行拼接后 PCR驗(yàn)證, 獲得銀鯽CagTslurp cDNA的全長序列。該序列全長為570 bp,開放閱讀框有300個(gè)核苷酸, 編碼 99個(gè)氨基酸, 5′非編碼區(qū)為 48 bp, 3′非編碼區(qū)為 222 bp, 位于poly(A)序列上游有加尾信號(hào)序列AATAA, Genbank登錄號(hào) KP403808。PreGPI預(yù)測(cè)結(jié)果顯示該CagTslurp蛋白序列中不含GPI錨信號(hào), Sigal P 3.0 server軟件預(yù)測(cè)結(jié)果顯示其N端含有一個(gè)長度為20個(gè)氨基酸的信號(hào)肽, 預(yù)示著 CagTslurp很可能是一個(gè)分泌型蛋白。SWISS- MODEL軟件三維蛋白同源建模結(jié)構(gòu)比較結(jié)果顯示, CagTslurp蛋白的LU結(jié)構(gòu)域和家族成員 Lynx-1[33]蛋白相類似, 都有“三指”結(jié)構(gòu)。Smart protein在線軟件對(duì)蛋白功能結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)分析顯示該蛋白第 29—99位氨基酸為 LU結(jié)構(gòu)域,含有10個(gè)半胱氨酸殘基構(gòu)成五對(duì)二硫鍵。該蛋白的C 端存在典型的“CCXXXXCN”基序, 提示CagTslurp是Ly-6基因家族中的一名成員。

2.2 銀鯽CagTslurp氨基酸同源性分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建

銀鯽CagTslurp氨基酸序列經(jīng)NCBI中protein blast比對(duì), 首先, 一致性最高的為斑馬魚未知蛋白序列, 有 53.5%的一致性; 其次為羅非魚(Oreochromis niloticus) CD59B like預(yù)測(cè)序列, 有37.8%的一致性; 與慈鯛(Pundamilia nyererei) CD59B like序列,一致性為35.6%; 再者為斑馬魚CD59B like預(yù)測(cè)序列, 一致性為34.7%; 與虹鱒(Oncorhynchus mykiss)和美洲紅點(diǎn)鮭 (Salvelinus fontinalis )Drtp1序列, 一致性分別為32.9%和31.8%。同時(shí), 從NCBI數(shù)據(jù)庫中搜索出部分代表性物種的Ly-6基因超家族成員氨基酸序列, 利用ClusterX與GeneDoc進(jìn)行家族成員序列多重比對(duì), 比對(duì)的結(jié)果顯示家族成員之間氨基酸一致性偏低, 但序列中 8—10個(gè)半胱氨酸和末端“CCXXXXCN”基序相對(duì)保守。MEGA5.0軟件中N-J法構(gòu)建 Ly-6基因家族系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示, 銀鯽CagTslurp先與斑馬魚未知蛋白在一個(gè)分支, 再與羅非魚以及慈鯛 CD59B like成為一簇, 之后與SLURP1相簇成一個(gè)亞支; 而 CD59、Drtp1和Neruotoxin先各自組成一個(gè)亞支, 再與CagTslurp所在亞支構(gòu)成家族系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖1)。

2.3 銀鯽組織中CagTslurp基因表達(dá)分析

以各組織cDNA為模板, β-actin為參照基因進(jìn)行半定量 RT-PCR。結(jié)果表明僅在銀鯽“中科 3號(hào)”雄魚精巢組織中擴(kuò)出一條與預(yù)期大小一致的條帶,而在其他的8個(gè)組織中均未擴(kuò)出條帶(圖2A), 表明銀鯽CagTslurp為精巢特異表達(dá)。熒光定量PCR結(jié)果進(jìn)與半定量RT-PCR的結(jié)果相同, CagTslurp基因精巢特異表達(dá), 其精巢中的表達(dá)量約為β-actin基因的1.4倍(圖2B)。以胚胎時(shí)序cDNA為模板, β-actin為內(nèi)參調(diào)節(jié)模板濃度后進(jìn)行半定量 RT-PCR, 結(jié)果胚胎各時(shí)期都未擴(kuò)出相應(yīng)的目的條帶, 說明該基因在胚胎時(shí)期不表達(dá)(圖未示)。

圖1 基于NJ法構(gòu)建的Ly-6家族成員的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 1 Phylogenetic tree of Ly-6 superfamily factors based on N-J method

2.4 原位雜交

為了揭示 CagTslurp基因在銀鯽精巢組織的哪類細(xì)胞表達(dá), 我們進(jìn)行了原位雜交實(shí)驗(yàn)。反義RNA探針結(jié)果(圖3A)顯示, CagTslurp主要在精巢精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞中表達(dá)、精子細(xì)胞中有少量表達(dá), 體細(xì)胞中不表達(dá)。從銀鯽的精巢中可以觀察到, 其中細(xì)胞體積較大的為精原細(xì)胞, 比精原細(xì)胞體積略小的為初級(jí)精母細(xì)胞, CagTslurp信號(hào)在此類細(xì)胞中最強(qiáng); 而體積比初級(jí)精母細(xì)胞略小的為次級(jí)精母細(xì)胞, 可分裂形成圓形、細(xì)胞體積更小的精子細(xì)胞。正義RNA探針作為原位雜交實(shí)驗(yàn)對(duì)照, 精巢細(xì)胞中均未檢測(cè)到信號(hào)(圖3B)。

圖3 CagTslurp基因在銀鯽精巢中表達(dá)的原位雜交檢測(cè)Fig. 3 In situ hybridization detection of CagTslurp gene expression in testis of gibel carp

3 討論

本研究以銀鯽“中科 3號(hào)”為研究對(duì)象, 獲得CagTslurp基因的cDNA全長。氨基酸序列分析顯示,第29—99氨基酸為一個(gè)LU結(jié)構(gòu)域, 且末端含有保守的“CCXXXXCN”氨基酸基序, 從而提示該基因是Ly-6基因超家族中的一員。家族氨基酸多重序列比對(duì)結(jié)果顯示, 其中一致性最高為斑馬魚未知蛋白序列, 有 53.5%的一致性, 其次為羅非魚預(yù)測(cè)的CD59B like, 有37.8%的一致性, 與Drtp1的一致性在20%—33%, 和SLURP、SAMP14以及Neruotoxin等成員一致性更低。構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果表明, CagTslurp首先與斑馬魚未知蛋白在一個(gè)分支, 再和預(yù)測(cè)的CD59B like以及SLURP簇為一支。對(duì)虹鱒CD59 like-1(AAT94063)和CD59 like-2 (CAI54280)的鑒定表明 CD59 like與 CD59一樣, 都含有 GPI錨[11,34]。生物信息學(xué)分析表明, 銀鯽CagTslurp蛋白, N端含有一個(gè)信號(hào)肽, C端不含GPI錨。因此本研究鑒定的銀鯽 CagTslurp不是 CD59B-like, 而應(yīng)該是Ly-6超家族分泌型相關(guān)蛋白中的新成員, 且又為精巢特異表達(dá), 所以該基因命名為CagTslurp。

Ly-6超家族成員被認(rèn)為與機(jī)體的免疫過程有關(guān)。隨著研究的深入, 性腺中表達(dá)Ly-6家族成員也在逐漸被鑒定, 其功能可能是調(diào)節(jié)或保護(hù)性腺中的細(xì)胞, 使其免受機(jī)體免疫系統(tǒng)的攻擊[35]。譬如, 小鼠CD59b在睪丸高度表達(dá), 其他組織僅有微量的表達(dá), 研究顯示在精子頂體反應(yīng)激活和維持精子活力中起重要作用[36,37]; 人類Ly-6超家族成員SAMP14精巢特異表達(dá), 其功能與精子和卵子融合有關(guān)[9];在魚類成熟的卵母細(xì)胞以及排出的卵細(xì)胞中都能檢測(cè)到 drtp1轉(zhuǎn)錄本, 推測(cè)其功能可能與魚類的繁殖有關(guān)[35]。從組織表達(dá)分析結(jié)果上, CagTslurp與家族成員 SAMP14表達(dá)模式相同, 都為精巢特異表達(dá),但兩者僅有15.2%一致性, 且成員SAMP14為GPI錨定的膜蛋白, 而 CagTslurp更應(yīng)該是分泌型蛋白,所以CagTslurp是否會(huì)有類似于SAMP14的生物學(xué)功能還尚不清楚。

銀鯽 CagDzal的克隆鑒定與表達(dá)分析顯示, 銀鯽精子發(fā)生是一個(gè)極為復(fù)雜的細(xì)胞分化過程, 始于原始生殖細(xì)胞, 相繼經(jīng)歷精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞階段, 最后變態(tài)形成精子,會(huì)受到許多內(nèi)在和外在因素的影響[31]。CagTslurp基因精巢組織特異表達(dá), 且原位雜交結(jié)果顯示CagTslurp主要在精原細(xì)胞和精母細(xì)胞表達(dá), 精子細(xì)胞中有少量的表達(dá), 體細(xì)胞中沒有表達(dá), 暗示著其可能與銀鯽性腺發(fā)育過程中的精子發(fā)生有關(guān), 可能是一種參與調(diào)控銀鯽精子發(fā)生基因。從原位雜交信號(hào)上分析, CagTslurp在精巢的精原細(xì)胞和精母細(xì)胞中信號(hào)更強(qiáng), 在精子細(xì)胞中的信號(hào)較弱, 這暗示CagTslurp基因更可能是在銀鯽的精子發(fā)生過程中精原細(xì)胞的增殖和精母細(xì)胞的形成階段起著重要作用。本實(shí)驗(yàn)室曾發(fā)現(xiàn) Spindlin基因在銀鯽卵巢特異表達(dá)并與卵母細(xì)胞成熟過程有關(guān)[38], 而 CagTslurp基因是精巢特異表達(dá), 具體的功能與機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

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MOLECULAR CLONING AND EXPRESSION ANALYSIS OF TESTIS-SPECIFIC Ly-6/uPAR RELATED PROTEIN IN GIBEL CARP

WANG Wei1,2, LIU Zhen1,2, ZHOU Li1, LI Zhi1and GUI Jian-Fang1
(1. State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology, Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China; 2. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China)

The members of Ly-6/uPAR superfamily distribute widely in many metazoans. All proteins from this family have at least one conserved Ly-6/uPAR (LU) domain which is composed of about 70 to 100 amino acids, and contain 8 to 10 cysteine residues with a defined disulfide-bonding pattern. The members of Ly-6 family are classified into two subfamilies, namely GPI-anchored membrane proteins and secreted proteins, according to whether they possess the glycophosphatidyl inositol (GPI)-anchored signal sequence in the C-terminus. In this study, we cloned and characterized a new member of Ly-6 superfamily in gibel carp (Carassius auratus gibelio). The full-length sequence of this gene consisted of 570 base pairs that encoded 99 amino acids and had only one LU domain. Our analysis using on-line bioinformatic software showed that this protein might have one signal peptide but no GPI-anchor signal sequence, thus could be a type of secreted protein. We conducted RT-PCR to detect its expression in different tissues and found that this protein was specifically expressed in testis. According to its characteristics, we named the gene Carassius auratus gibelio testisspecific Ly-6/uPAR related protein (CagTslurp). In situ hybridization revealed the expression of CagTslurp in spermatogonia, primary spermatocytes, secondary spermatocytes and spermatids, but not in somatic cells. These results indicated that the CagTslurp gene might play a role in spermatogenesis of gibel carp.

Carassius auratus gibelio; Ly-6 superfamily; CagTslurp; Testis; Spermatogenesis; In situ hybridization

Q344+.1

A

1000-3207(2015)03-0441-08

10.7541/2015.59

2014-04-22;

2014-08-15

國家自然科學(xué)基金(31123001); 淡水生態(tài)與生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(2011FBZ17)資助

王偉(1989—), 男, 江西上饒人; 碩士研究生; 主要研究方向?yàn)榘l(fā)育遺傳學(xué)。E-mail: ncussww@126.com

桂建芳, E-mail: jfgui@ihb.ac.cn